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c－k－ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21^（ras）表达的序列特异性被引量：2: 1996年; 本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突变或ＲＮＡ剪接异常．用分别与野生型和上述突变型ｋ－ｒａｓ第９～１５密码子互补的１８聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为６μｍｏｌ·Ｌ－１），发现与突变型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸能抑制ＨＣｅ８６９３细胞生长并有ｐ２１ｒａｓ蛋白表达量的抑制；而与野生型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明ｃ－ｋ－ｒａｓ反义寡核苷酸对ＨＣｅ８６９３细胞生长和ｐ２１ｒａｓ蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性．; 钱瑛余应年董海涛陈星若罗建红; 关键词：原癌基因反义寡核苷酸

HeLa-MSH2-细胞的生物学特性被引量：1: 1997年; 凝胶阻滞实验证实转染了本实验室构建的hMSH2反义RNA表达质粒的HeLa细胞（HeLa－MSH2-细胞），其细胞抽提物中C·T碱基对和A·C碱基对错配结合蛋白表达明显降低。该细胞系细胞与母本HeLa细胞在生长速率方面无差异，但经十几次传代后，其生长速率加快约两倍，出现了次磺酸磷酸核糖转移酶（hypoxanthinephosphoribosyltransferase,hgprt）自发突变率升高，但不存在N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（N－methyl－N’－nitro－N－nitrosogyanidine,MNNG）耐受。认为hMSH2蛋白在错配修复系统中起了错配识别和结合作用，但该基因的突变不能完全解释道传性非息向性结直肠癌（hereditarynonpolpoiscolorectalcarcinoma，HNPCC）病人来源的细胞系的生物学改变。; 钱瑛余应年陈星若罗建红谢海洋; 关键词：结肠肿瘤细胞生物学 HMSH2 RNA

c─k─ras反义寡核苷酸抑制Hce─8693细胞生长的序列特异性研究: 1995年; ｃ─ｋ─ｒａｓ反义寡核苷酸抑制Ｈｃｅ─８６９３细胞生长的序列特异性研究钱瑛，董海涛，余应年，陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）原癌基因的突变激活和抑癌基因的失活是恶性肿瘤发生发展的分子生物学基础。选择性抑制突...; 钱瑛董海涛余应年陈星若; 关键词：原癌基因反义寡核苷酸

hMSH2反义核糖核酸表达质粒的构建: 1998年; 利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），特异地扩增ＨｅＬａ细胞中ｈＭＳＨ２ｃＤＮＡ的最保守区域，并将其克隆到ＴＡ载体，从重组质粒两端进行序列分析，证实为目的片段．将该目的片段反向克隆到哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９的ＢａｍＨⅠ和ＫｐｎⅠ位点之间，筛选后得ｐＲＥＰ９－ｈＭＳＨ２反义表达重组质粒．用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法将重组质粒ＤＮＡ及载体ＤＮＡ分别导入ＨｅＬａ细胞，经Ｇ４１８筛选，扩大培养．凝胶阻滞实验证实转染有ｐＲＥＰ９－ｈＭＳＨ２重组质粒的ＨｅＬａ－ＭＳＨ２－细胞抽提物中Ｇ·Ｔ和Ａ·Ｃ错配结合蛋白质表达明显降低。; 钱瑛余应年陈星若罗建红谢海洋; 关键词：CDNA 质粒

错配修复缺陷细胞中的自发突变: 1998年; 错配修复基因的突变导致错配修复功能缺陷，引起ＤＮＡ复制保真度下降，为研究其在肿瘤发生中的作用，近年来对错配修复缺陷细胞系的自发突变性进行了大量研究。; 张芸钱瑛; 关键词：错配修复细胞修复突变肿瘤

人细胞色素P450 2C9 cDNA的克隆、鉴定及真核细胞表达重组质粒的构建被引量：1: 1998年; 从人肝组织中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９的ｃＤＮＡ。以Ｔ－Ａ克隆方法将该基因的ｃＤＮＡ连接到ｐＧＥＭ－３Ｚ质粒上，然后通过内切酶图谱分析及部分序列分析加以鉴定，结果显示克隆片段具有人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９内切酶图谱和核苷酸序列，该片断含５′端和３′端部分非编码区及完整的编码区。最后将该ｃＤＮＡ片段连接到哺乳动物细胞的表达质粒ｐＲＥＰ９中。为建立表达人细胞色素Ｐ４５０２Ｃ９基因的细胞系打下了基础。; 汪爱今钱瑛钱羽力余应年; 关键词：细胞色素P450 RT-PCR 重组质粒

HeLa-MLH1^-细胞的生物学特性检测: 1998年; 对本实验室构建的错配修复功能缺陷细胞ＨｅＬａ－ＭＬＨ１－的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（ｈｐｒｔ）基因自发突变率进行检测，发现相对于无ｈＭＬＨ１缺陷的对照细胞ＨｅＬａ－Ｒ９和ＨｅＬａ而言，其突变率分别提高了８７８倍和３５３倍（Ｐ＜００１），此表型改变与本实验室已构建的另一错配修复功能缺陷细胞ＨｅＬａ－ＭＳＨ２－相同。本实验室还证明ＨｅＬａ－ＭＬＨ１－细胞存在甲基硝基亚硝基胍（ｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ，ＭＮＮＧ）耐受，这与我们在ＨｅＬａ－ＭＳＨ２－细胞实验中的发现不同，提示不同的错配修复基因功能缺陷对细胞表型影响不尽相同。; 张芸钱瑛余应年汪爱今罗建红; 关键词：细胞实验生物学特性突变

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钱瑛