陈建发
- 作品数：9 被引量：39H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 保留直肠肛管移行上皮对预防感觉性大便失禁的意义被引量：5
- 2003年
- 目的 :观察保留直肠肛管移行上皮 (ATZ上皮 )对预防感觉性大便失禁的作用。方法 :对 12例切除ATZ上皮患者的排便功能进行随访 ,以同期行同种手术且保留ATZ上皮的患者为对照组。结果 :两组患者无一例发生完全性大便失禁。切除ATZ组发生排便感觉丧失和感觉性大便失禁的发生率明显高于ATZ保留组 (P <0 .0 5 )。但除 2例患者外 ,术后 3个月切除ATZ的 10例患者肛门自制自行恢复。结论 :ATZ上皮在肛门自制 ,特别是预防感觉性大便失禁有着重要作用 ,术中应尽可能保护 ,但如果为了避免直肠粘膜外翻 ,必要时也可以切除 ,不会引起完全性大便失禁和永久性感觉性大便失禁。
- 陈建发黄宗海肖建秋
- 关键词：直肠肛管移行上皮环状痔
- 应用AdEasier-1系统高效制备含VEGFP驱动TK自杀基因的重组腺病毒被引量：7
- 2004年
- 背景及目的:自杀基因疗法的瓶颈之一是自杀基因在肿瘤细胞的特异性表达水平低。利用肿瘤特异性启动子来调控自杀基因使其在肿瘤细胞中特异性表达已成为肿瘤自杀基因研究的热点。研究证实血管内皮生长因子在绝大多数实体瘤细胞中都有过量表达而在正常组织中不表达或表达甚微,其过量表达与血管内皮生长因子启动子(vascularendothelialgrowthfactorpromoter,VEGFP)活性上调有关。为研究VEGFP可否提高TK自杀基因在肿瘤细胞的特异性表达水平,本研究应用一种高效的重组腺病毒构建系统,即AdEasier-1系统制备含VEGFP驱动TK自杀基因的重组腺病毒。方法:VEGFP自pEGFP-1-SV-VEGFP切下后插入pAdtrack载体上构建pAdtrack-VEGFP。用HindⅢ/XbaⅠ自pREP8-TK切出带polyA加尾信号的TK基因,亚克隆到pAdtrack-VEGFP中构建转移质粒pAdtrack-VEGFP-TK。PmeⅠ酶线性化转移质粒pAdtrack-VEGFP-TK,转化含腺病毒基因组质粒pAdEasy-1的细菌AdEasier-1,用25μg/ml卡那霉素筛选阳性克隆,先后进行琼脂糖电泳和PacⅠ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-TK,经293细胞包装、扩增获得重组腺病毒Ad-VEGFP-TK,行酶切鉴定、PCR鉴定和测序。结果:卡那霉素抗性细菌只有两种,一种含pAdEasy-VEGFP-TK(大于33kb)。
- 陈建发黄宗海黄元媛宋慧娟车小燕
- 关键词：肿瘤重组腺病毒自杀基因治疗血管内皮生长因子
- 新法制备含VEGF启动子驱动的CD/TK融合基因重组腺病毒被引量：5
- 2004年
- 目的 应用简化的细菌内同源重组法高效制备含血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。方法 先以氯化钙法替代电穿孔法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入BJ5183细菌，制备BJ5183pAdEasy-1细菌；再以后者作感受态细菌，与线性化的转移质粒pAdtrack-VEGFP-CDglyTK进行同源重组，获得重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CDglyTK，转染293细胞，制备含VEGF启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。结果 构建重组腺病毒质粒的成功率为60％(6／10)。转染293细胞后7～12d可收获病毒。结论 简化的细菌内同源重组法简便易行，重组效率较高，易于推广应用。
- 黄元媛黄宗海陈建发汤福祥杨文宇郑全车小燕
- 关键词：VEGF启动子重组腺病毒血管内皮细胞生长因子基因治疗
- 血管抑素的研究进展
- 2003年
- 作为第一种被发现并纯化的肿瘤血管抑制剂,血管抑素是目前抗肿瘤血管生成研究的热点之一。血管抑素是血浆纤维蛋白溶解酶原和/或纤维蛋白溶解酶的降解产物,具有抑制内皮细胞增生、促进内皮细胞凋亡、抑制内皮细胞定向迁移和抑制毛细血管芽生等抗肿瘤血管生长活性。作用机制包括:(1)增强黏附激酶活性,诱导内皮细胞凋亡;(2)拮抗碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮细胞生长因子的作用;(3)诱导蛋白激酶ERK-l和ERK-2脱磷监化,降低两种酶活性;(4)和组织纤溶酶原激原物非竞争性结合,抑制血管内皮细胞迁移和毛细血管芽生;(5)通过和内皮细胞表面ATP合成酶的α/β亚基结合,使内皮细胞在缺氧环境中合成ATP的能力丧失,抑制内皮细胞增生。通过重组法、转基因法和体内降解法,许多Ⅰ期、Ⅱ期临床试验证实血管抑素具有良好的抗肿瘤血管活性。
- 陈建发黄宗海
- 关键词：血管抑素肿瘤血管生成分子结构
- 肛垫切除术治疗Ⅲ、Ⅳ期环状痔被引量：4
- 2003年
- 目的比较肛垫切除术和外剥内扎术治疗Ⅲ、Ⅳ期环状痔的临床效果。方法48例Ⅲ、Ⅳ期环状痔患者随机分成两组,分别接受肛垫切除术和外剥内扎术治疗。比较两组患者的术后疼痛评分、手术时间、创面愈合时间、平均住院时间、术后并发症的发生率以及疗效。结果两组患者术后的疼痛评分无显著性差异。肛垫切除术手术时间长于外剥内扎术,但术后创面愈合时间、平均住院时间和术后并发症明显少于对照组。肛垫切除术的疗效明显优于外剥内扎术。结论肛垫切除术治疗Ⅲ、Ⅳ期环状痔的疗效确切,并发症轻,是一种安全有效的手术方式。
- 陈建发黄宗海陈引香肖建秋
- 关键词：环状痔外剥内扎术手术方法
- 前药转换酶/前药体系的研究进展被引量：2
- 2004年
- 前药转换酶 /前药体系是自杀基因疗法的核心 ,关系到自杀基因疗法的成败 ,近年来得到深入研究。就前药转换酶 /前药体系的种类、作用机制和体外。
- 陈建发黄宗海
- 关键词：基因疗法转导转染
- 肿瘤血管抑制剂的研究进展被引量：4
- 2003年
- 肿瘤生长和转移具有血管依赖性,应用肿瘤血管抑制剂改变肿瘤血管生长促进因子和抑制因子的平衡可有效地抑制肿瘤生长、转移和复发,是近年来肿瘤研究的新热点之一,也是肿瘤防治的又一条新途径。本文对肿瘤血管抑制剂的种类、各自的作用机理以及临床应用的研究进展作一综述。
- 陈建发
- 关键词：肿瘤生长肿瘤转移
- 简化的两步法细菌内同源重组高效制备腺病毒质粒被引量：11
- 2003年
- 目的 :应用简化的两步法细菌内同源重组高效制备腺病毒质粒。方法 :对细菌内同源重组法进行改进和简化 ,先构建含腺病毒基因组质粒pAdEasy 1的BJ5 183细菌 ,筛选出链霉素和氨苄青霉素抗性菌落 ,继而应用氯化钙法制作BJ5 183pAdEasy 1感受态细菌。用PmeⅠ酶使转移质粒pAdtrack CMV TK线性化 ,和BJ5 183pAdEasy 1感受态细菌混合进行转化 ,在含 12 5 μg mL卡那霉素的LB琼脂平皿上培养 ,筛选出卡那霉素抗性的细菌进行质粒抽提纯化 ,获得重组腺病毒质粒。结果 :卡那霉素抗性细菌有 2种 ,一种是含pAdeasy CMV TK(约 34kb) ,另一种含pAdtrack CMV TK(约 10kb) ,两者可经琼脂糖电泳加以鉴别。构建重组腺病毒质粒的成功率达 90 % (9 10 )。结论 :简化的两步法细菌内同源重组是一种简便易行。
- 陈建发黄宗海黄元媛汤福祥杨文宇车小燕
- 关键词：基因治疗病理学重组腺病毒遗传学质粒两步法
- 含血管内皮生长因子启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒的制备及其体外杀伤作用观察被引量：6
- 2004年
- 目的应用AdEasier-1系统高效制备含血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒并观察其体外肿瘤杀伤作用。方法以JM109细菌基因组为模板,PCR扩增出含HindⅢ/BamHⅠ酶切位点的CD基因,亚克隆到pREP8,继而用HindⅢ/XbaⅠ切出含pA加尾信号的CD基因,插入到预先构建的含VEGF启动子的转移质粒pAdtrack-VEGFP构建pAdtrack-VEGFP-CD。经PmeⅠ线性化后转化AdEasier-1细菌,用25 μg/ml卡那霉素筛选阳性克隆,先后进行琼脂糖电泳和PacⅠ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CD。经293细胞包装、扩增获得重组腺病毒Ad-VEGFP-CD,行PCR鉴定。通过测定细胞克隆形成率和细胞存活率观察重组腺病毒对体外培养的LoVo细胞的细胞毒作用。结果构建重组腺病毒质粒的成功率为70%(7/10)。包装扩增后重组腺病毒的滴度为4.8×1012 CFU/ml,PCR扩增结果与预期相符。在前药5-氟胞嘧啶存在下,重组腺病毒对LoVo具有明显杀伤作用,细胞克隆形成率和细胞存活率都明显下降。结论应用AdEasier-1系统可以成功制备含VEGF启动子驱动CD自杀基因的重组腺病毒,该重组体具有明显的肿瘤杀伤作用。
- 陈建发黄宗海俞金龙厉周车小燕
- 关键词：胞嘧啶脱氨酶血管内皮细胞生长因子同源重组
