陈洪
- 作品数：16 被引量：30H指数：4
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- 柯萨奇B组病毒VP1胞质表达系统的建立
- 2005年
- 目的 利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量 ,提高基因疫苗的免疫效果。方法 (1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒 (EMCV) 5′非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7EMCVP1。将该质粒和编码T7RNA酶的pAR 3132共转染HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞 ;(2 )将上述质粒分别转化减毒鼠伤寒沙门菌SL72 0 7,让带有不同质粒的两种载体细菌共感染小鼠腹腔巨噬细胞。结果 (1)经共转染 ,在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中 ,目的抗原VP1在胞质中的表达比单独转染真核表达质粒pcDNA3VP1增加 2～ 4倍 ;(2 )两种质粒载体细菌感染小鼠巨噬细胞后 ,目的抗原VP1也能在细胞中较好表达。结论 pT7EMCVP1和pAR 3132能在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞胞质中表达 。
- 陈洪刘晶星陈淑云何平胡宝瑜李振红
- 关键词：VP1小鼠腹腔巨噬细胞柯萨奇B组病毒HELA细胞共转染胞质
- 柯萨奇病毒和腺病毒受体的研究进展被引量：2
- 2003年
- 吴赟刘晶星陈洪
- 关键词：柯萨奇病毒腺病毒受体靶细胞CAR基因治疗
- 柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备被引量：2
- 2004年
- 目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度。结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中。纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1:32 000。结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础。
- 吴赟陈洪黄孝天陈宏新刘晶星
- 关键词：胞外段腺病毒受体多克隆抗体基因新西兰兔
- 类天疱疮和天疱疮患者肿瘤坏死因子α及可溶性肿瘤坏死因子Ⅰ型受体的测定被引量：2
- 1999年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）则及其可溶性Ⅰ型受体（sTNF-RI）在类天疱疮（BP）、天疱疮（PV）患者疱液和血清中的变化及其临床意义。方法应用ELISA方法对比研究31例BP、9例PV患者血液和疱液中TNFα和sTNF-RI的含量。并以15例正常人吸疱液和30例正常人血清作对照。结果BP、PV患者活动期癌液和血液中sTNF-RI水平均高于对照，且疱液中浓度更高；BP缓解初期血中sTNF-RI水平高于活动期；BP患者血液和疱液中均未测到或有极少量TNFα，PV患者血液中仅测到低浓度的TNF。而疱液中TNFα浓度明显高于对照。结论细胞因子sTNF-RI和TNFα可能参与了BP和PV的发病，sTNF-RI在BP中可能对机体起保护作用，有望成为病情好转和治疗有效的新的观察指标。
- 陈向东翁孟武陈洪苏玮侯爱琴
- 关键词：类天疱疮大疱性天疱疮TNFΑ
- 柯萨奇病毒B3型VP1基因在酿酒酵母中的表达被引量：2
- 2005年
- 目的在酿酒酵母AH109中表达柯萨奇病毒B3型VP1基因,并检测VP1蛋白对报告基因的转录自激活作用。方法用乙酸锂法将重组柯萨奇B3病毒VP1基因的细菌-酵母菌穿梭载体pGBKT7-VP1转化酵母菌。通过表型鉴定、PCR法验证质粒导入宿主菌后,Westernblotting验证VP1蛋白的表达,最后经营养缺陷培养基和酶底物X--αGal反应检测VP1基因对报告基因的转录自激活作用。结果表型鉴定和PCR法均证实pGBKT7-VP1质粒转入酵母菌成功,Westernblotting证实AH109能表达VP1蛋白,营养缺陷型培养基和酶底物X--αGal反应结果显示VP1蛋白对3种报告基因均无转录自激活作用。结论柯萨奇病毒B3型VP1蛋白可作为酵母双杂交系统的诱饵蛋白,为筛选与其相互作用的宿主细胞蛋白提供了基础。
- 黄孝天陈宏新陈洪吴斌贝刘晶星
- 关键词：柯萨奇病毒VP1基因
- 抗龋IgY和IgY牙膏对体外培养变形链球菌影响的电镜观察被引量：6
- 2004年
- 目的 :观察抗龋IgY和IgY牙膏对变形链球菌超微结构的影响 ,为探讨IgY的防龋机制提供形态学资料。方法 :体外厌氧培养变形链球菌 ,用不同浓度抗龋IgY和IgY牙膏处理菌细胞 ,并对培养出的菌细胞做透射电镜和扫描电镜观察。结果 :①透射电镜。经抗龋IgY处理的变形链球菌 ,细胞壁不完整 ,细胞壁最外层荚膜溶解消失 ;经IgY牙膏处理的变形链球菌除上述变化外 ,部分菌细胞结构破坏 ,菌体溶解。②扫描电镜。经抗龋IgY处理的变形链球菌 ,其长链菌减少 ,菌体表面光滑。结论 :抗龋IgY可导致变形链球菌细胞壁损伤。由于细胞壁具有的黏附作用丧失 ,导致菌体黏附牙面的能力下降和菌斑形成减少 ,从而达到抗龋作用 ;IgY牙膏膏体中的成分可能对菌细胞有破坏作用。
- 陈新宇陈洪张岚朱平
- 关键词：变形链球菌电子显微镜
- 抗龋IgY和IgY牙膏抗变形链球菌的体外实验研究被引量：5
- 2004年
- 目的 :了解抗龋IgY和IgY牙膏在体外的抗变形链球菌作用。方法 :①将细菌用不同浓度的抗龋IgY和IgY牙膏培养 ,检测其抑菌圈、A60 0 时细菌的浓度和菌落计数。②用不同浓度和不同时间处理细菌后 ,将细菌在高糖培养基中培养 ,观察细菌黏附率的变化 ;或在普通培养基中培养 ,检查对细菌生长和培养基pH值的影响。结果 :①抑菌作用在 15 %抗龋IgY为 (9± 0 .3)mm ,0 .8%IgY为 (2± 0 .3)mm ,0 .8%IgY牙膏为 (1± 0 .1)mm。②抗龋IgY及其牙膏的作用经A60 0 检测结果低于对照组。 0 .8%IgY与其牙膏的A60 0 值有差异 (0 .0 85± 0 .4 1)～ (0 .4 95± 0 .0 2 7)。菌落计数的结果相同。③经加入IgY及其牙膏培养后 ,黏附率低于对照组 2 0 %～ 30 %。结论 :抗龋IgY和IgY牙膏均能在体外抑制细菌的生长和黏附作用。该牙膏中某些成分影响了抗龋IgY作用的发挥。
- 陈洪陈淑云肖家祁刘晶星
- 关键词：变形链球菌
- 以减毒沙门菌作为DNA疫苗载体的研究被引量：2
- 2004年
- 目的 以真核表达质粒pCMVβ为报告基因 ,研究用芳香族氨基酸合成缺陷的沙门菌SL72 0 7为载体以提高DNA疫苗免疫应答的可行性。方法 携带质粒pCMVβ的SL72 0 7体外感染小鼠腹腔巨噬细胞后 ,用X gal染色方法和RT PCR方法检测巨噬细胞内 β gal的表达。小鼠口服免疫SL72 0 7(pCMVβ)后 ,用RT PCR方法检测 β gal基因在淋巴组织中的转录产物 ;用ELISA方法检测体液免疫 ;用3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞增殖 ;用JAM试验检测杀伤性T淋巴细胞反应。结果 SL72 0 7能有效地将质粒DNA传递到体外培养的巨噬细胞中并进行表达 ;小鼠口服携带有pCMVβ的SL72 0 7后 ,能在脾脏、派伊尔结、肠系膜淋巴结中检测到目的基因的转录 ,并可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。与肌内注射pCMVβ相比较 ,口服SL72 0 7(pCMVβ)能更有效地诱导出细胞免疫应答。结论 减毒沙门菌SL72 0 7作为DNA疫苗的载体 ,可经口服途径进行免疫 ,并可将质粒直接传递给抗原递呈细胞 ,诱导出以细胞免疫为主的免疫应答。
- 何平陈洪刘晶星陈淑云胡宝瑜
- 关键词：CMV沙门菌减毒RT-PCR方法ELISA方法
- 口服基因疫苗质粒稳定性测定被引量：4
- 2003年
- 在研究口服基因疫苗的过程中 ,为确保口服疫苗剂量 ,对转化细菌中质粒稳定性的动态变化 ,细菌浓度OD60 0 值与有效细菌 (携带质粒的细菌 )的关系等进行了测定 ,结果显示PAR3132在培养 10h前 ,pcDNA3 VP1在培养 6h前质粒在细菌中的稳定性可维持在 95 %以上 ,但当培养时间超过 16h ,2种质粒的稳定性在Amp为 5 0g/L时均不足 2 0 %。高浓度Amp可提高质粒稳定性。在质粒稳定性维持于 95 %的时段内 ,细菌浓度的OD60 0 值与有效细菌的量呈线性关系。因此 ,在确定口服基因疫苗剂量时 ,应根据细菌各自的情况决定振摇的时间和采用的OD值。
- 陈洪刘晶星何平陈淑云
- 关键词：质粒稳定性免疫方法
- 自身免疫性大疱病患者自身抗体及可溶性白介素2受体、白介素12的测定被引量：4
- 2000年
- 目的 探讨自身免疫性大疱病疱液的诊断价值，了解可溶性白介素 2受体（ sIL 2R）、白介素 12（ IL 12）与自身免疫性大疱病的相关性。方法 寻常型天疱疮（ PV） 9例，大疱性类天疱疮（ BP） 31例，获得性大疱性表皮松解症（ EBA） 4例，线状 IgA大疱病（ LAD） 2例。用直接免疫荧光（ DIF）检测患者皮损中自身抗体的类型及沉积部位，用间接免疫荧光（ IIF）检测血清和疱液中自身抗体的类型和滴度，用酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测血清和疱液中 sIL 2R、 IL 12的含量。结果 BP和 EBA疱液中均检测到自身抗体。 BP、 PV活动期血清和疱液中 sIL 2R水平明显升高，且随 BP病情好转而下降。 IL 12在 BP、 PV血清中含量高于对照。 BP患者病情严重度不同的两组间血清中两种细胞因子的平均值无差异。结论 疱液具有一定的诊断价值。 sIL 2R可作为监测 BP病情活动性的参考指标。
- 陈向东翁孟武苏玮侯爱琴陈洪
- 关键词：大疱病SIL-2RIL-12
