雷迎锋
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ATM基因siRNA真核表达载体的构建及其对转染宫颈癌细胞株ATM表达的抑制作用被引量：2
- 2005年
- 目的:研究特异性siRNA对宫颈癌ATM基因的阻 抑效果以及用RNAi效应对宫颈癌做基因治疗的可行性. 方法:构建可表达人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒 pSuppressorNeo ATM,电穿孔法转染Siha宫颈癌细胞株.应用 RT PCR,Westernblot,流式细胞术、免疫荧光法等方法检测转 染的宫颈癌细胞中ATM基因的表达水平.结果:RT PCR, Western blot均表明瞬时转染pSuppressorNeo ATM的宫颈癌 细胞中ATM基因的表达受到明显抑制,流式细胞术、免疫荧 光法检测表明ATM蛋白含量明显下降.结论:pSuppressor Neo ATM质粒构建成功,瞬时转染宫颈癌细胞后可以明显抑 制ATM基因的表达.
- 魏莉辛晓燕王健雷迎锋薛小平
- 关键词：ATM基因RNA干扰宫颈癌转染
- 乙肝病毒前S1基因与截短C基因穿梭表达载体构建被引量：3
- 2006年
- 目的构建HBV前S1基因和截短C基因分泌型大肠杆菌和分枝杆菌穿梭质粒。方法以含HBV基因组质粒pCP10序列为模板,PCR扩增前S1基因和C基因截短片段,依次克隆至分泌型穿梭表达载体pDE22,电穿孔转化法将重组质粒导入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选及PCR鉴定,阳性克隆热休克诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析。结果扩增到了预期长度的2个目的基因,构建了分泌型穿梭载体,SDS-PAGE分析可见相对分子质量约23000蛋白表达条带。结论已成功构建耻垢分枝杆菌分泌表达前S1基因和截短C基因的穿梭载体,为研究含前S基因和截短C基因的重组BCG疫苗奠定了基础。
- 胡兴斌徐志凯尹文韦三华雷迎锋杨敬吕欣孙梦宁
- 关键词：乙肝病毒穿梭载体分枝杆菌疫苗
- 抑制ATM表达对^(60)Co照射下宫颈癌细胞损伤修复机制的影响被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨抑制毛细血管扩张-共济失调突变基因(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)表达对人宫颈癌细胞株HeLa在60Co照射下细胞损伤修复机制的影响。方法:电穿孔法将人ATM基因siRNA的重组真核表达质粒pSup-ATM转染宫颈癌HeLa细胞;G418筛选建立稳定转染株;RT-PCR、W estern-b lot、免疫荧光法检测ATM基因表达的抑制情况;W estern-b lot法检测60Co照射前后各组细胞ATM、p53Ser15磷酸化、CHK2Thr 68磷酸化、p53、CHK2蛋白的表达水平;流式细胞术检测60Co照射后各组的细胞周期变化。结果:ATM基因在HeLaATM细胞中表达明显低于在HeLa、HeLans细胞中的表达水平,成功地建立了ATM低表达的宫颈癌细胞模型。HeLaATM细胞在60Co照射后p53Ser15磷酸化、CHK2Thr68磷酸化、p53蛋白表达均显著降低,细胞周期呈现为G2期延长,G1/G2倒置。结论:抑制ATM基因表达可显著抑制宫颈癌细胞对60Co辐射损伤的修复。这一机制可能与HeLaATM细胞中ATM蛋白表达缺失,ATM依赖性的细胞损伤修复通路受阻有关。
- 魏莉辛晓燕王建薛涛曹云新雷迎锋张红菊
- 关键词：宫颈肿瘤小分子干扰ATM基因HELA细胞
- 乙型肝炎病毒S基因与截短C基因融合的穿梭表达载体的构建
- 2005年
- 研究目的是构建HBVS基因和截短C基因融合的胞壁型和分泌型大肠杆菌和分枝杆菌(E.coli-BCG)穿梭质粒。采用PCR方法从结核分枝杆菌MTB毒株H37Rv的基因中扩增出相对分子质量为19000的抗原胞壁区及其上游调控元件基因,克隆入穿梭载体pOLYG中。以含HBV基因组的质粒pCP10序列为模板,PCR扩增获得S基因片段Sw和C基因编码氨基端的部分基因片段Ct,克隆入胞壁型穿梭表达载体pCW和分泌型穿梭表达载体pDE22。经酶切和序列测定证实,胞壁型和分泌型载体pCW-Sw-Ct和pDE22-Sw-Ct构建成功。为进一步研究含S基因和截短C基因融合的重组BCG活疫苗奠定了基础。
- 胡兴斌徐志凯尹文韦三华雷迎锋杨敬吕欣孙梦宁
- 关键词：乙型肝炎病毒分泌型载体穿梭质粒调控元件穿梭载体MTB
