韩威
- 作品数：15 被引量：36H指数：3
- 供职机构：沈阳药科大学中药学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国科学院知识创新工程国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 融合干扰素-BLA(IFN-BLA)的构建、表达、纯化及抗病毒活性测定(英文)
- 2005年
- 干扰素BLA(IFN BLA)由干扰素beta1b(IFN beta1b)和干扰素alpha2b(IFN alpha2b)通过连接肽GGGS融合而成。优化了其在大肠杆菌BL21CodonPlus(DE3)RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的35%以上并且主要以包涵体的形式存在。对包涵体的复性条件进行了摸索,建立了IFN BLA的复性及纯化方法,纯化后的蛋白产量约为45mg/L,纯度在90%以上。抗病毒活性分析表明这一新的融合蛋白可能具有协同或加成活性。
- 马文哲沈琼韩威陆晨轶杨胜利龚毅
- 关键词：基因表达纯化抗病毒活性
- 不同年生的辽宁GAP基地龙胆根际土壤真菌变化特征被引量：1
- 2014年
- 目的研究龙胆根际土壤真菌在不同月份、不同年限变化的特征和趋势，为寻找防治病害的有益真菌种类奠定基础。方法对辽宁省清原县英额门镇龙胆GAP基地6～9月的二年生和三年生龙胆根际土壤样品进行真菌分离、纯化及分子生物学鉴定。结果鉴定11个属，分属于28种真菌，分别为青霉属（Penicillium）9种，木霉属（Trichoderma）4种，镰刀菌属（Fusarium）4种，毛霉属（Mucor）3种，Plectosphaerella2种，毛壳属（Chaetomium）、肉座菌属（Hypocrea）、小球腔菌属（Leptosphaeria）、Gongronella、Simplicillium和Myrmecridium各1种。结论随生长年限增加，其中真菌属增多，真菌总数增多，有益真菌总数减少，有害真菌总数增多。说明根际土壤微生物种群平衡遭到破坏，可能是植物病害原因之一。
- 葛彩艳段宇韩威潘华奇吴小兰刘晓秋
- 关键词：龙胆根际土壤真菌
- 基因组重排选育麦迪霉素高产菌株被引量：1
- 2011年
- 目的以生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)突变株为研究对象,选育麦迪霉素高产菌株。探索并验证基因组重排技术在菌种选育中的重要作用。方法通过2轮多亲株灭活原生质体融合技术实现基因组重排。将来自不同育种方法的5株麦迪霉素高产菌株B64-5、01-GM-1、H-101、H-106和H-108作为第一轮亲本,在质量浓度为3 g.L-1溶菌酶3、2℃水浴60 min条件下制备原生质体,分别采用紫外线照射148 s和52℃加热60 min灭活原生质体,然后采用质量分数35%PEG 4000、37℃保温2 min诱导原生质体融合。融合子经过初筛和复筛,获得产量进一步提高的重组子作为亲本进行第二轮的多亲株灭活原生质体融合实验。用生物学方法测定麦迪霉素效价,用HPLC方法测定麦迪霉素A1含量。结果与结论经过2轮基因组重排实验成功选育出3株高产且遗传稳定的麦迪霉素生产菌株。其中1株菌株GSZ2-32发酵前补加前体X-1后摇瓶产量比原始出发菌株Streptomyces mycarofaciens var.464提高1.1倍,麦迪霉素A1(MDMA1)质量分数含量保持在80%以上。
- 朱岩宋欣怡黄小池韩威
- 关键词：麦迪霉素基因组重排
- DNA甲基化与脊椎动物胚胎发育被引量：18
- 2012年
- DNA甲基化是指DNA甲基转移酶(DNMT)将DNA序列中的5′胞嘧啶转变为5′甲基胞嘧啶的化学修饰,可以调控基因的时空特异性表达,从而影响细胞命运决定和分化等生物学过程。近年来研究发现,DNA甲基化在脊椎动物胚胎早期发育中有重要作用,Dnmt基因的缺失会影响胚胎早期发育和多个器官的形成及分化,如胚胎早期致死、内脏器官和神经系统终末分化缺陷以及血液发生紊乱等。文章总结了DNA甲基化转移酶在小鼠和斑马鱼发育过程中的动态变化,并系统阐述了DNA甲基化在胚胎早期发育和器官发生中的作用,重点揭示DNA甲基化转移酶与组蛋白甲基化转移酶如何协同调控DNA甲基化从而影响基因转录的分子机理。DNA甲基化作为一种关键的表观遗传学因素,全面系统地理解其在胚胎发育过程中的作用机制对靶向治疗人类相关疾病有一定的理论指导意义。
- 杨晓丹韩威刘峰
- 关键词：DNA甲基化DNA甲基转移酶胚胎发育斑马鱼小鼠
- BLyS受体TACI、BCMA与人IgG1 Fc融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达与鉴定被引量：8
- 2004年
- 从人肝脏和肾脏cDNA文库中扩增了人IgG1Fc与B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)的受体TACI及BCMA的胞外编码区 ,构建了TACI Fc及BCMA Fc融合表达质粒pSec1 Fc TACI与 pSec1 Fc BCMA ,并使用电穿孔法转染COS 7细胞 ,从 1L无血清培养上清中可纯化得到分泌表达的TACI Fc与BCMA Fc融合蛋白约 2mg。为获得TACI Fc与BCMA Fc的稳定来源 ,构建了TACI Fc与BCMA Fc的CHO稳定表达细胞株。免疫沉淀和ELISA结果显示 ,TACI Fc及BCMA Fc能特异性地结合其配体BLyS而不与BLyS同家族的TNF结合。TACI Fc及BCMA
- 田瑞阳黄玉辉陈悦韩威俞缨刘惠翁忠辉杨胜利龚毅
- 关键词：融合蛋白哺乳动物细胞CDNA
- 响应面方法优化生米卡链霉菌基因工程菌W-08发酵培养基被引量：1
- 2010年
- 目的优化生米卡链霉菌基因工程菌W-08发酵培养基,以提高麦迪霉素A1产量。方法首先,用Plackett-Burman设计评价发酵培养基的8个成分对麦迪霉素A1的影响。然后用最速上升实验确定重要成分在中心复合设计中的取值变化范围。最后采用中心复合设计响应面方法优化了重要成分的浓度。结果葡萄糖和鱼粉对麦迪霉素A1影响最大(P<0.05),是重要成分,其优化浓度分别为20.15g/L和1.80g/L。发酵培养基优化后麦迪霉素A1效价达到1410.16μg/mL,比优化前的A1效价1021.10μg/mL提高了38.1%。结论数理统计实验设计和分析的方法成功地用于了生米卡链霉菌基因工程菌W-08发酵培养基优化。该方法结果准确可靠、有效且节约时间。
- 王海涛卢金莲于春波夏焕章韩威
- 关键词：发酵培养基
- BLyS改组噬菌体文库的构建及初步筛选
- 2006年
- 从质粒pT7474-BLyS及人胎脑cDNA文库中分别扩增出BLyS和APRIL基因,用DNase I消化后,回收小于50 bp的片断,用于DNA改组。PCR产物与噬菌体载体pfUSE5连接后,电转E.coliER2738获得改组文库。构建的改组文库库容量为8.9×105。对文库进行初步的筛选,获得了一个受体结合活性降低的突变克隆。成功构建了BLyS改组噬菌体文库,为蛋白结构与功能之间关系的深入研究打下了基础。
- 沈琼宋聿文韩威丁艳丽龚毅袁勤生
- 关键词：DNA改组噬菌体展示文库
- 生米卡链霉菌的耐前体变株选育及发酵工艺优化被引量：2
- 2010年
- 目的提高生米卡链霉菌的发酵水平和有效组分A1含量。方法出发菌株109S通过紫外线、亚硝基胍的组合诱变处理后筛选高产前体抗性突变株,并考察高产变株的发酵周期、最适补加前体的时间和剂量。结果和结论共筛选了368个抗性突变株,得到一株生产能力比出发菌株提高33%、A1组分提高16%的高产变株B64-5,连续传4代生产能力基本不变,较稳定;确定了变株发酵周期为52 h,发酵最佳补加前体时间为0 h,最佳补加剂量为0.3 g.L-1。
- 何亮张洁枝贺元川韩威
- 关键词：紫外线亚硝基胍前体发酵
- BLyS对噬菌体随机12肽库的筛选被引量：1
- 2006年
- 用B淋巴细胞刺激因子(BLyS)对噬菌体随机12肽库进行亲和淘洗,3轮筛选后阳性噬菌体得到富集。用ELISA鉴定噬菌体克隆,多个阳性克隆测序后得到了同一个小肽序列(RHKIQLRQNIIT)。将该小肽与GST融合,在大肠杆菌中进行表达及纯化,ELISA实验进一步验证了其具有与BLyS特异结合的活性。该小肽有可能成为其天然受体的拮抗剂。
- 丁艳丽韩威沈琼刘惠杨胜利龚毅
- 关键词：BLYS噬菌体肽库小肽
- 转氨酶催化不对称合成芳香族L-氨基酸被引量：2
- 2012年
- 芳香族L-氨基酸是合成许多药物、农药、精细化学品和食品添加剂的重要手性砌块(Chiral buildingblocks)。利用酶催化具有高活性和高立体选择性的特点合成手性砌块是目前不对称合成领域重要的研究方向。通过对不同来源转氨酶的进化分析,选择分别源自原核生物大肠杆菌Escherichia coli和真核生物酿酒酵母Saccharomyces cerevisia中的两种具有代表性Ⅰ型芳香族转氨酶TyrB和Aro8,比较研究了两种转氨酶通过平衡逆转不对称氨化催化合成芳香族L-氨基酸的反应过程和催化效率。重组转氨酶TyrB和Aro8都能有效地合成天然芳香族氨基酸苯丙氨酸和酪氨酸以及非天然氨基酸苯甘氨酸。手性HPLC分析表明,合成的氨基酸都是L-构型的,e.e值等于100%。L-丙氨酸是适宜的氨基供体,转氨酶TyrB和Aro8都不能利用D-型氨基酸作为氨基供体。反应体系中氨基供体L-丙氨酸和氨基受体芳香族α-酮酸的最适摩尔比为4∶1。底物芳香族α-酮酸分子结构中芳香环上的取代基以及脂肪酸碳链部分的长度都对酶催化的转氨效率有显著的影响。在制备规模试验中,TyrB催化不对称转氨反应合成L-苯甘氨酸、L-苯丙氨酸和L-酪氨酸的比生产速率为0.28 g/(g.h)、0.31 g/(g.h)和0.60 g/(g.h),Aro8催化上述反应的比生产速率分别为0.61 g/(g.h)、0.48 g/(g.h)和0.59 g/(g.h)。研究结果对利用转氨酶通过平衡逆转不对称催化合成芳香族L-氨基酸的工业化应用具有指导意义。
- 夏温娜孙雨闵聪韩威吴胜
- 关键词：转氨酶手性
