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基于Au蛋白芯片技术的狼疮肾炎患者尿蛋白标志物研究被引量：2: 2010年; 目的寻找狼疮肾炎（LN）患者尿蛋白标志物，探讨基于Au蛋白芯片技术预测LN的应用价值。方法采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI～TOF—MS）技术及Au蛋白芯片检测166例LN患者和对照者尿蛋自指纹图，通过t检验评价蛋白表达差异性，筛选LN患者尿标志蛋白并结合人工神经网络（ANN）技术建立诊断模型，评价其预测LN的价值。对部分筛选的差异蛋白通过比对标准蛋白质谱数据进行初步鉴定。结果LN患者与对照者尿中差异蛋白质峰有24个（t值为～6．44～10．14，P〈0.05），通过BPS软件筛选4863、9744、8762、33832、67403和80806质荷比（m／z）蛋白质建立的ANN模型预测LN的灵敏度为100％（26／26），特异度为95％（38／40）。其中5个11700、22509、33832、67403和80806m／z蛋白与标准蛋白质谱比对显示可能为β2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、α1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白。结论基于Au蛋白芯片技术的尿蛋白指纹图谱检测在LN的早期警示、判断蛋白尿类型及指导免疫抑制剂的使用中具有潜在应用价值。; 姜伟杨永长肖代雯韵雪雪刘华黄文芳; 关键词：蛋白质阵列分析红斑狼疮狼疮肾炎

利用蛋白芯片技术诊断和评估肾损伤的临床应用被引量：1: 2011年; 目的利用Au蛋白芯片(proteinchip gold array)技术检测肾损伤患者尿蛋白指纹图谱,探讨其灵敏、快速预测和评估肾损伤的临床应用价值。方法利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption-ionization time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术及Au蛋白芯片检测477例尿蛋白指纹图,包括237例肾病患者和240例对照者。利用生物标志模型软件(biomarker patterns software,BPS)筛选标志蛋白,结合人工神经网络(artificialneural network,ANN)技术建立模型,评价其在诊断和评估肾损伤中的应用价值。通过电喷雾四级杆飞行时间质谱(electrospray ionization quadrupole time of flight,ESI-Q-TOF)结合比对标准蛋白质谱,对部分差异蛋白进行鉴定。结果肾病患者与对照者尿中差异表达的蛋白质峰有75个,其丰度值两组间比较差异均有统计学意义(t值为-11.6-28.1,P均<0.05),筛选质荷比(m/z)6182、88439、7402、37706、76508、0045和91 240蛋白质建立的ANN模型预测肾损伤的灵敏度为96.6%(84/87),特异度为94.4%(85/90)。鉴定结果表明11735、15150、22871、23770、67650 h和80045m/z蛋白分别为β2-微球蛋白、血红蛋白、α1-抗胰蛋白酶、α1-微球蛋白、白蛋白和转铁蛋白。结论基于Au蛋白芯片的SELDI-TOF-MS技术检测尿蛋白指纹图,在肾脏疾病的诊断、蛋白尿类型判断、肾损伤评估及治疗评价中具有潜在的应用价值。; 姜伟杨永长肖代雯张琳琳韵雪雪刘华闫慧黄文芳; 关键词：蛋白芯片肾病蛋白标志物人工神经网络

体外培养乳腺癌细胞线粒体差异蛋白的筛选: 2011年; 目的比较体外培养的乳腺癌细胞与正常乳腺细胞线粒体蛋白指纹图谱,筛选差异蛋白,为乳腺癌亚细胞蛋白标志物的研究奠定基础。方法提取乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7及正常乳腺细胞株HBL-100线粒体蛋白,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)检测蛋白表达,Biomarker Wizard Software分析软件统计结果,筛选差异蛋白,并探讨溶剂及长期冻存对结果分析的影响。结果在相对分子质量2 000～100 000范围内检测到近200个蛋白峰,HBL-100与MDA-MB-231和MCF-7细胞相比,差异蛋白峰分别为45个和36个(P<0.05),其中相对分子质量9 200、13 800、14 000和22 500的蛋白在2株癌细胞中表达均下降,相对分子质量10 000和11 600的蛋白在2株癌细胞中表达均升高。4‰的TritonX-114及冻存3～6个月对结果分析无影响。结论 SELDI-TOF-MS能够快速、灵敏地检测分析乳腺癌线粒体差异表达蛋白,为亚细胞水平乳腺癌标志物的研究提供了新的思路。; 韵雪雪杨永长姜伟肖代雯闫慧黄文芳罗春丽; 关键词：乳腺肿瘤线粒体蛋白质类蛋白指纹图谱差异蛋白

样品沉淀方法对线粒体蛋白指纹图谱分析影响: 2011年; 目的比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础。方法提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮（TCA-丙酮）沉淀,饱和（NH4）2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据。结果每种方法均重复试验20次,在质荷比（m/z）2000~100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和（NH4）2SO4沉淀14个;选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对分子量（Mr）〈11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr〉11 kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果。; 韵雪雪杨永长姜伟肖代雯刘华闫慧黄文芳

应用金芯片技术预测肾功能损害的临床应用研究被引量：1: 2010年; 目的探讨利用金(Au)芯片检测尿蛋白质指纹图谱在预测肾功能损害中的应用价值。方法利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术及Au芯片检测186例肾病患者和188例对照者尿蛋白质指纹图,分析肾病患者与对照组尿蛋白质表达差异并筛选标志蛋白质,结合人工神经网络(ANN)技术建立智能预测模型,评价其诊断肾病的应用价值。对部分差异蛋白质通过电喷雾四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)进行鉴定。用免疫散射比浊法检测尿微球蛋白并与蛋白质指纹图谱结果比较,评价SELDI-TOF-MS检测性能。结果肾病患者与对照者尿中共检测到214个蛋白质峰,有69个蛋白质峰差异有统计学意义(P<0.05),筛选其中质荷比(m/z)11 735、23 770、51 720、58 720、67 650、80 045、91 240蛋白质建立的ANN模型预测肾功能损害的灵敏度为98.8%(85/86),特异度为96.6%(85/88)。蛋白鉴定结果表明m/z 11 735、23 770、67 650、80 045蛋白质分别为β2-微球蛋白、α1-微球蛋白、白蛋白、转铁蛋白。SELDI-TOF-MS检测微球蛋白较免疫散射比浊法更灵敏。结论基于Au蛋白芯片技术的尿蛋白质指纹图谱检测,可快速、灵敏、高通量的显示尿蛋白质表达情况,对诊断肾损伤、判断蛋白尿类型及治疗评价具有重要的应用价值。; 姜伟杨永长肖代雯张琳琳韵雪雪刘华黄文芳; 关键词：蛋白芯片肾病人工神经网络

乳腺癌细胞膜蛋白的SELDI-TOF-MS分析被引量：1: 2012年; 目的比较乳腺癌细胞株和正常乳腺上皮细胞膜蛋白指纹图谱,为乳腺癌亚细胞蛋白组学的研究奠定基础。方法试剂盒提取两株乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MCF-7及一株乳腺正常上皮细胞HBL-100的膜蛋白,SEL-DI-TOF-MS分析蛋白指纹图谱,寻找差异蛋白。结果在分子量2kD-100kD范围内3株细胞均可检测到近100个蛋白点,MDA-MB-231和MCF-7与HBL-100相比,膜蛋白差异点分别为32个和34个(P<0.05),其中7.8kD,8.3kD和8.8kD的蛋白在两株癌细胞中表达均降低,9.6kD的蛋白在两株癌细胞中表达均增高。结论 SELDI-TOF-MS可以快速灵敏地检测到乳腺癌亚细胞蛋白水平的差异,为乳腺癌早期诊断提供依据。; 韵雪雪杨永长姜伟肖代雯闫慧黄文芳; 关键词：膜蛋白 SELDI-TOF-MS 乳腺癌蛋白组学

体外培养乳腺癌亚细胞差异蛋白筛选: 目的:探讨适于表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析乳腺癌细胞亚细胞蛋白的检测方案。比较体外培养乳腺癌细胞与正常乳腺细胞的线粒体、细胞核和细胞膜蛋白指纹图谱,筛选差异表达蛋白,为乳腺癌蛋白标志物...; 韵雪雪; 关键词：体外培养亚细胞细胞蛋白蛋白指纹图谱 SELDI-TOF-MS 细胞膜蛋白

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