丘立文
- 作品数：59 被引量：152H指数：8
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省医学科学技术研究基金广州市科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 侵袭性曲霉感染特异性抗体的筛选及其初步临床应用研究被引量：3
- 2010年
- 目的 筛选出可用于侵袭性曲霉感染实验室早期诊断的特异性单克隆抗体.方法 应用单克隆抗体技术制备针对不同曲霉抗原的特异性抗曲霉单克隆抗体,根据单抗识别表位不同,初步筛选出两组灵敏度高、特异性强的单抗组合,并分别建立了双抗体夹心ELISA检测法.通过检测常见临床和环境分离曲霉株、马尔尼菲青霉及念珠菌培养液,感染动物模型标本,临床标本,初步评估检测方法的敏感性和特异性.并应用WB对抗体所识别靶标进行初步鉴定.结果 获得32株稳定分泌曲霉单抗的杂交瘤细胞株,建立了2种双抗体夹心ELISA法,第1种方法可识别环境和临床分离的19种曲霉.第2种方法仅特异性识别临床和环境分离的烟曲霉,与其他曲霉抗原无交叉.对同一种烟曲霉培养液而言,第1种方法可检测稀释度为第2种方法的10倍.WB分析显示该组单抗识别的靶标为相对分子质量在25 000～75 000之间的甘露聚糖蛋白.结论 本研究获得了可用于侵袭性曲霉感染实验室诊断的特异性单克隆抗体,单抗识别的抗原为相对分子质量在25 000～75 000之间的甘露聚糖蛋白.该抗原是侵袭性曲霉感染早期诊断的潜在标志物.
- 江凌晓王艳芳郝卫丘立文蔡建飘潘玉先陈文霞姜长宏林丽娟车小燕
- 关键词：曲霉标志物
- Ⅰ型登革病毒NS1蛋白检测体系的建立及在2014年广东登革疫情诊断中的应用被引量：4
- 2016年
- 目的以Ⅰ型登革病毒（DENV）非结构蛋白1（NS1）为免疫原制备NS1特异性单克隆抗体,建立Ⅰ型登革病毒NS1抗原特异性检测方法,并应用于广东以Ⅰ型登革感染为主的临床血清标本检测。方法用原核表达的重组登革病毒NS1蛋白和灭活的Ⅰ型登革病毒免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,间接ELISA、免疫荧光和免疫印迹鉴定,获得DENV1NS1特异性单克隆抗体并建立检测方法。结果共获得26株Ⅰ型登革病毒NS1蛋白特异性结合的单抗。通过对26株1型登革病毒NS1蛋白特异性单抗进行多株抗体组合配对,最终筛选出最佳抗体组合。该组合检测DENV1病毒培养上清的检测限为1∶16 384（12.5 pfu/ml）,且与其他3个血清型登革病毒、乙型脑炎病毒和黄热病毒均无交叉反应,对500份健康人血清标本检测中,阴性标本497例,临界3例,对发病0~13 d的836份临床确诊的登革热患者血清检测的敏感性为85.6%,明显高于q RT-PCR检测体系（66.3%）（P〈0.001）,亦明显高于病毒分离诊断率（P〈0.001）。结论成功获得了1组DENV1-NSl蛋白的特异性单克隆抗体,利用该组抗体建立了1种敏感性和特异性更好的只针对DENV1-NS1蛋白的双抗体夹心检测方法,且比其他方法能够覆盖更宽泛的时间范围,该方法可作为登革热早期诊断的工具。
- 丁细霞潘玉先陈月丘立文陈满君温坤郭勇晖余楠车小燕富宁
- 关键词：登革病毒非结构蛋白单克隆抗体
- SARS抗体检测方法的建立与IgG变化规律被引量：4
- 2004年
- 目的 :检测分析SARS患者血清IgG抗体产生情况 ,研究一种新的SARS冠状病毒IgG抗体检测方法的实际效果和临床意义。方法 :利用基因重组SARS冠状病毒核壳抗原 (N )建立间接ELISA法 ,检测SARS确诊、疑似患者及其他呼吸道疾病患者共 3 78份血清标本中的特异性IgG抗体。结果 :以A450 值 =2 1× 2 0 0例健康献血员均值作为抗体阳性判断的临界值 ,IgG的阳性临界值 0 2 3 9,对 160份SARS确诊病人、176份疑似病例和 42例对照病例血清IgG抗体检测结果进行分析 ,对于确诊病例发病 1周内 ,IgG抗体检测阳性率为 5 63 % ,发病第 2周 ,IgG检出阳性率为 62 86% ,第 3周为 92 5 9%。结论 :机体产生针对SARS冠状病毒核壳抗原的IgG抗体 ,在 1周后逐渐升高 ,持续时间长 ,证明在SARS冠状病毒致病转归机制中可能起重要作用 ,并且可作为SARS检测的重要手段。
- 许寅超郝卫丘立文潘玉先温坤冯常森车小燕
- 关键词：IGG抗体SARS冠状病毒血清IGG抗体检测
- 一组曲霉单克隆抗体的制备及在免疫病理诊断中的研究
- 2008年
- 目的研究一组抗曲霉共同抗原的单克隆抗体,在病理组织切片中特异性诊断曲霉感染的免疫病理学方法。方法采用烟曲霉细胞壁抗原、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备特异性的抗曲霉单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠属抗原的交叉反应。以单克隆抗体检测侵袭性烟曲霉感染兔模型的肾、肝脏组织切片和SARS合并侵袭性曲霉感染患者和肺曲霉病患者的肺组织切片。结果特异性抗曲霉共同抗原的单克隆抗体可敏感检测组织病理切片中曲霉菌丝体抗原。结论抗曲霉共同抗原的单克隆抗体在免疫病理诊断中为确定组织中曲霉,区分真菌种属提供了有用的工具,具有很好的临床应用前景。
- 郝卫潘玉先廖志勇丘立文王压娣宋朝阳车小燕
- 关键词：曲霉单克隆抗体免疫组化
- 检测烟曲霉菌GM抗原生物素-亲和素-夹心酶联免疫吸附试验法的建立被引量：3
- 2002年
- 车小燕徐华丘立文潘玉先邱庆林郝卫
- 关键词：烟曲霉菌微生物检验
- 慢病毒介导短发夹状RNA沉默生存素基因对人异位内膜细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:研究慢病毒介导生存素(survivin)基因特异性短发夹状RNA(shR-NA)对人异位内膜细胞中survivin基因表达及细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建靶向survivin基因的shRNA慢病毒表达载体,将重组慢病毒感染原代培养的异位内膜细胞,以未转染及空载慢病毒感染异位内膜细胞为对照。采用RT-PCR、Western blot法分别检测各组异位内膜细胞中survivin mRNA和蛋白表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖,Cy5-Annexin V/PI双染标记流式细胞仪测定细胞凋亡。结果:与未转染细胞及空载慢病毒转染细胞相比,shRNA慢病毒感染人异位内膜细胞后survivin mRNA及蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA及蛋白表达抑制率分别为64%和59%。转染后1～5天实验组细胞生长速度较阴性对照组及空白对照组明显减慢,除第1天外,差异均有统计学意义(P<0.01);阴性对照组及空白对照组细胞生长速度的差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,实验组细胞凋亡率为(41.61±3.64)%,明显高于阴性对照组的(9.14±1.88)%和空白对照组的(7.07±1.16)%(P<0.01),后两组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢病毒介导survivin基因特异性shRNA可有效沉默异位内膜细胞中survivin基因表达,明显抑制异位内膜细胞的增殖并促进细胞凋亡。
- 彭冬先何援利丘立文罗敏
- 关键词：生存素短发夹状RNA慢病毒
- 细胞色素P4501 A1基因多态性与子宫内膜异位症的遗传易感性被引量：5
- 2003年
- 彭冬先何援利丘立文杨芳林敬明
- 关键词：细胞色素多态性子宫内膜异位症遗传易感性
- 非结构蛋白1抗原捕获酶联免疫吸附法评价登革病毒抗体中和活性被引量：4
- 2009年
- 目的在获得具有中和活性的针对Ⅰ型登革病毒（dengue virus serotype Ⅰ，DENV-1）的抗体基础上，评价已建立的非结构蛋白Ⅰ（nonstructural protein 1，NS1）抗原捕获酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）分析抗体中和活性的可行性，为中和抗体的筛选和疫苗效果的评价提供一个更为快速、简便的检测方法。方法使用重组DENV-1包膜蛋白Ⅲ区（envelope protein domain Ⅲ，EDⅢ）免疫5只BALB／c小鼠制备单克隆抗体（简称单抗），采用间接ELISA、间接免疫荧光法（immunofluorescence assay，IFA）和免疫印迹法（Western Blot）对单抗进行筛选及鉴定；同时用该重组蛋白免疫1只新西兰兔，制备多克隆抗体血清；以传统噬斑减少中和试验（plaque reduction neutralization test，PRNT）作为参比方法，采用NS1抗原捕获ELISA对所获抗体进行中和活性检测。结果获得4株针对DENV-1 EDⅢ单抗和1份兔多抗血清，且被PRNT试验证明均具有中和活性，四株单抗腹水（1A1、1B3、3D3、9D6）和兔多抗血清中和效价分别为1：1024、1：512、1：256、1：4096和1：4096。使用NS1抗原捕获EHSA法检测不到PRNT中和效价最低的3D3抗体对DENV-1有中和能力，而检测其余3株单抗（1A1、1B3、9D6）和多抗兔血清中和效价均远低于PRNT测定结果，分别为1：32、1：32、1：128和1：128。结论简单、快速的NS1抗原捕获ELISA可用于评价DENV抗体的中和活性，该方法适合于高效价中和抗体的筛选，有望成为评价疫苗效果的方法之一。
- 温坤丁彦青丘立文潘玉先蔡建飘岳彩峰狄飚车小燕
- 关键词：登革热病毒病毒包膜蛋白质类酶联免疫吸附测定病毒非结构蛋白质类
- 慢病毒介导shRNA沉默survivin基因对鸡胚绒毛尿囊膜子宫内膜异位症模型的影响被引量：5
- 2012年
- 目的研究慢病毒介导生存素基因特异性短发夹状RNA(shRNA)对子宫内膜异位症异位内膜生长及新生血管形成的影响。方法建立鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)子宫内膜异位症模型,随机分成单纯接种组、shRNA慢病毒组、空载慢病毒组和空白载体组,每组30只。通过Image-proplus软件测量新生血管面积与鸡胚尿囊膜面积比(VA/CAM)评价沉默survivin基因对CAM血管生成的影响,TUNEL检测异位内膜细胞凋亡,组织病理学观察异位内膜病灶生长行为。结果 shRNA慢病毒处理组种植内膜存活率最低,该组VA/CAM明显低于单纯接种组、空载慢病毒组和空白载体组(P<0.001),后3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组种植内膜细胞凋亡率明显高于其他3组(P<0.05),另3组间比较无显著性差异(P>0.05)。shRNA慢病毒处理组病灶在光镜下可见腺体结构不完整,间质伴有不同程度的坏死。结论慢病毒介导survivin基因特异性shRNA能够显著抑制人子宫内膜异位症种植CAM模型的新生血管形成,抑制子宫内膜在CAM上的种植生长。
- 彭冬先何援利丘立文
- 关键词：生存素短发夹状RNA子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜
- 子宫内膜异位症异位内膜细胞原代培养方法的改良被引量：1
- 2011年
- 目的:建立一种简易的人异位子宫内膜细胞体外原代培养方法。方法:通过胰蛋白酶消化、贴壁纯化等技术,分离及培养10例子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜细胞。在光学显微镜下观察细胞形态,以免疫细胞化学法鉴定细胞类型。结果:8份标本获得成功,培养的异位内膜细胞均有腺上皮细胞和间质细胞两种形态细胞。膜上皮细胞和基质细胞分别经角蛋白单抗和波形蛋白单抗免疫组化染色为阳性,腺上皮细胞平均生长时间为5周,间质细胞平均生长时间为14周。结论:成功建立了子宫内膜异位症异位内膜细胞体外原代培养方法,该改良培养法经济、简单、高效。
- 彭冬先何援利丘立文
- 关键词：子宫内膜异位症原代培养
