占国清
- 作品数：14 被引量：86H指数：6
- 供职机构：郧阳医学院附属人民医院更多>>
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- 深圳人群弓形虫感染的血清流行病学调查研究被引量：15
- 2000年
- 为了调查目前深圳地区人群弓形虫感染情况 ,本文自 1997年至 1999年采用酶联免疫吸附试验( ELISA)对深圳地区不同人群 12 2 0份血清进行检查 ,结果总人群 Ig G阳性率为 11.15% ,Ig M阳性率为0 .2 5%。其中 ,幼儿组、青少年组、成年组、老年组 Ig G阳性率分别为 2 .33%、 5.68%、 8.90 %、 10 .2 3% ;动物饲养员、屠宰工人的阳性率为 2 3.57%、 2 5.0 0 % ,与阳性率分别为 14 .66%、 7.14 %、 6.32 %、 5.68%的饮食业人员、目前没有与动物接触职业者、医务工作者、中学生之间有显著性差异 ( P<0 .0 0 5) ;男性 Ig G阳性率为 11.73% ,与 Ig G阳性率为 10 .66%的女性比较无差异 ( P>0 .5)。结果显示深圳地区人群感染率有随年龄递增而升高趋势 ,且不同职业之间亦有显著差异性 ,但性别差异无显著性。
- 林敏吴少庭高世同占国清
- 关键词：刚地弓形虫血清流行病学调查IGGIGM
- 弓形虫DNA疫苗免疫鼠体内重组质粒分布的探讨被引量：6
- 2000年
- 目的 通过肌注弓形虫 DNA疫苗质粒 p BK- P30、p BK- P2 2直接免疫小鼠 ,观察重组质粒在鼠体内不同器官组织的分布。方法 疫苗 p BK- P30、p BK- P2 2经肌注免疫 BAL B/ c鼠 ,5周和 10周后 ,分别取免疫鼠的肺、心脏、肝脏、脾、肌肉、肾脏及血液 ,抽提组织 DNA,并以此为模板进行 PCR扩增 ,扩增的产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果 免疫后 5周 ,p BK- P30免疫组的上述各器官组织 DNA中均扩增出 P30基因片段 ,其大小 10 2 7bp,p BK- p30 & p BK- P2 2免疫组分别扩增出 P30和 P2 2基因片段 ,P2 2基因片段为 5 93bp,均与预期结果相符合。NS对照组和 p BK- CMV空质粒对照组未扩增出片段。免疫后 10周 ,仅免疫鼠血液扩增出上述特异性基因片段。结论 弓形虫 DNA疫苗免疫 BAL B/ c鼠 5周后 ,多个不同器官组织均可检测出重组质粒 ,免疫后 10周血液检测出重组质粒。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏郑春福
- 关键词：弓形虫DNA疫苗重组质粒小鼠
- 弓形虫表面抗原P30基因分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒的构建及序列测定被引量：5
- 2000年
- 目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定。方法 弓形虫RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,酚 /氯仿法抽提基因组DNA ;根据基因库P30基因序列设计合成一对引物 ,采用PCR法扩增编码P30的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将P30基因定向克隆到分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达质粒 ,转化大肠杆菌DH5dα,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子 ,并经双酶切及PCR鉴定 ;最后对重组子进行序列测定。结果 PCR所扩增的P30基因片段为 10 37bp ,阳性重组质粒pBCG -P30经XbaI+KpnI双酶切 ,获得包含P30和热休克蛋白 (hsp70 )启动子的复合基因片段 ,此片段的大小为 1170bp ,与预期的理论值相符合。序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P30抗原的基因片段。结论 成功构建编码弓形虫表面抗原P30基因大肠杆菌 -分枝杆菌穿梭质粒pBCG -P30。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏梁驹卿郑春福
- 关键词：弓形虫表面抗原P30基因重组
- 弓形虫表面抗原 P22编码基因片段的亚克隆与表达被引量：5
- 2002年
- 目的 亚克隆弓形虫 RH株表面抗原 P2 2编码基因 ,构建表达质粒 p BK/ P2 2 ,并对其在大肠杆菌 (E.coli)中的表达作初步研究。 方法 以限制性内切酶 Bam H 和 Kpn 双酶切质粒 p BCG5 .6 / P2 2 ,获得弓形虫表面抗原 P2 2编码基因目的片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,插入表达质粒载体 p BK- CMV的多克隆位点 ,构建重组体 p BK/ P2 2 ,并转化大肠杆菌 DH5 α,快速酚法初筛阳性重组子 ,阳性克隆以 PCR法与限制性酶切分析鉴定后 ,以 IPTG进行诱导在 E.coli DH5 α中表达 ,表达产物以 SDS- PAGE与免疫印迹分析。 结果 双酶切质粒 p BCG5 .6 / P2 2 ,获得约 5 93bp的 P2 2编码基因片段 ,与预期片段大小相符 ;所构建 p BK/ P2 2重组体阳性克隆经双酶切和 PCR鉴定与预期结果一致 ;SDS-PAGE与免疫印迹显示 ,表达产物的大小约 2 8ku。 结论 成功亚克隆并构建了弓形虫表面抗原 P2 2编码基因 p BK/P2 2表达质粒 ,诱导表达了弓形虫 P2 2表面抗原蛋白 。
- 高世同吴少庭林敏梁驹卿占国清
- 关键词：弓形虫基因克隆基因表达
- 弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察被引量：15
- 2001年
- 目的 观察弓形虫表面抗原 P30 DNA疫苗免疫 BAL B/ c小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用。 方法 重组质粒 p BK- P30用生理盐水稀释后 ,肌注免疫 BAL B/ c小鼠。分别于免疫后 5周和 10周 ,EL ISA测定 Ig G抗体滴度 ;取免疫鼠的血液、肺、心脏、肝脏、脾、肾脏及肌肉 PCR扩增 P30基因 ;免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染。 结果 两次检测 ,均可测到特异性 Ig G抗体 ,且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高 ;免疫后 5周 ,免疫鼠的上述组织均可扩增出 P30基因条带 ,但免疫后 10周仅血液扩增出特异 P30基因条带 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染 ,免疫组鼠的平均存活时间较对照组鼠延长 ,但统计学差异不显著 (P>0 .0 5 )。 结论 弓形虫表面抗原 P30DNA疫苗能诱导 BAL B/ c小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用。
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏郑春福
- 关键词：弓形虫体液免疫
- 弓形虫DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究被引量：9
- 2006年
- 研究弓形虫表面抗原P30和P22 DNA疫苗联合诱导BALB/c小鼠的保护性免疫作用。48只BALB/c小鼠随机分成4组:A组(NS对照组),肌注生理盐水100μl/鼠;B组(空质粒对照组),肌注pBK-CMV 100μl/鼠(1mg/ml);C组(pBK-P30免疫组)肌注pBK-P30 100μl/鼠(1mg/ml);D组(pBK-P30&pBK-P22联合免疫组)分别肌注pBK-P30和pBK-P22各100μl/鼠(1mg/ml),免疫后5周,通过ConA刺激,MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率,使用间接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CD8+T细胞群进行测定。免疫后10周,免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染。结果表明,ConA刺激小鼠脾T淋巴细胞均发生增殖反应,疫苗免疫组略高于两对照组,但4组之间的差异均无显著性(P>0.05)。T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+T细胞在各组的增殖均不明显(P>0.05),但两免疫组CD8+T细胞数量升高,CD4+/CD8+比值降低,与空质粒pBK-CMV对照组和NS对照组之间差异均有显著性(P<0.05,P<0.01),pBK-CMV对照组与NS对照组之间差异也有显著性(P<0.01),两免疫组之间差异无显著性(P>0.05)。弓形虫速殖子攻击感染,联合免疫组平均存活时间较两对照组均延长(P<0.05)。但两免疫组间、pBK-P30免疫组与两对照组之间差异无显著性(P>0.05)。弓形虫DNA疫苗能诱导BALB/c鼠产生特异性细胞免疫应答及部分抗虫免疫保护作用,此两种DNA疫苗联合免疫有一定的免疫保护效果。
- 占国清吴少庭高世同李国光
- 关键词：弓形虫免疫
- 深圳市有关人群弓形虫感染的血清学流行病学调查研究
- 2001年
- 为了解深圳地区人群弓形虫感染情况,本文采用ELISA对深圳地区1220名不同年龄、部分特殊职业人群进行了血清弓形虫IgG及IgM抗体检测.
1材料与方法
1.1调查对象
深圳部分餐饮业人群,光明农场动物饲养员及屠宰场工人,老年人、婴幼儿、中学生、医务工作者、孕妇、育龄妇女,共检测1220份血清.
- 刘学宁林敏高世同占国清
- 关键词：弓形虫感染血清流行病学
- 弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导细胞免疫应答的研究被引量：14
- 2001年
- 目的 观察弓形虫表面抗原 P30 DNA疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫应答。 方法 大量制备重组真核表达质粒 p BK- P30 ,用生理盐水 (NS)稀释至 1μg/μl,1次肌注免疫 BAL B/ c小鼠 ,分别在免疫后 5和 10周 ,通过 Con A刺激 ,MTT法测定免疫鼠脾脏 T淋巴细胞转化率 ;使用间接免疫荧光法 ,用流式细胞仪对 CD4+、CD8+T细胞亚群进行测定。 结果Con A刺激小鼠脾 T淋巴细胞发生增殖反应 ,p BK- P30免疫组与两对照组及对照组之间的差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。T细胞亚群 CD4+、CD8+动态分析 ,CD4+T细胞在各组增殖均不明显 (P>0 .0 5 ) ,但免疫组 CD8+细胞数量升高 ,CD4+/CD8+比率下降 ,与空质粒 p BK- CMV对照组和 NS对照组之间差异均有显著性 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,p BK- CMV对照组与 NS对照组之间差异也有显著性 (P<0 .0 1)。免疫后 10周 ,与 NS对照组相比较 ,免疫组和 p BK- CMV对照组 CD8+细胞仍升高 (P<0 .0 1) ,但它们之间的差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 结论 弓形虫表面抗原 P30 DNA疫苗能诱导 BAL B/
- 占国清吴少庭李国光高世同林敏郑春福
- 关键词：弓形虫DNA疫苗细胞免疫重组质粒
- 重组BCG疫苗在传染病防治中的应用
- 2002年
- 卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)作为预防结核病的重要手段,已证明其对人体安全,且接种效果不受母体抗体的影响,成为WHO推荐的两种新生的活疫苗之一.BCG本身是强免疫佐剂,临床上常用于肿瘤治疗.近年来国内外学者以BCG为疫苗载体,将具有免疫保护作用的外源基因转入BCG[1],希望开发在BCG中表达保护性抗原或免疫因子的新一代活疫苗,以达到增强BCG免疫原性和一苗多用的目的.本文就重组BCG疫苗在传染病防治中的应用作一综述.
- 占国清李国光
- 关键词：重组BCG疫苗卡介苗免疫机制HIV寄生虫病
- 弓形虫表面抗原P22编码基因片段的克隆及序列测定被引量：15
- 2000年
- 目的克隆弓形虫表面抗原P22编码基因片段并进行序列测定。方法设计合成1对引物，采用PCR法扩增出P22目的基因片段，以低熔点琼脂糖回收纯化，并以限制性内切酶BamHI和KpnI双酶切后，插入质粒载体p5．6的多克隆位点，构建重组体p5．6／P22，并转化大肠杆菌DH5α，快速酸法初筛阳性重组子，并以PCR法与限制性酶切分析对阳性克隆进一步鉴定。被鉴定的重组子以双脱氧链终止法进行序列测定。结果从弓形虫核酸提取物中扩增出约593bpDNA条带，与预期扩增片段大小相符，空白对照无特异性扩增条带；所构建p5．6／P22重组体阳性克隆经双酶切与PCR鉴定与预期结果一致；序列测定的结果确证了插入片段的正确性。结论体外成功扩增、克隆了弓形虫表面抗原P22编码基因片段，并经序列分析所验证，为弓形虫P22表面抗原的表达以及弓形虫疫苗的制备作好铺垫。
- 高世同吴少廷林敏梁驹卿占国清
- 关键词：克隆弓形体病
