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吴洁: 作品数：22 被引量：51H指数：5; 供职机构：浙江省医学科学院更多>>; 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省自然科学基金浙江省中医药科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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人参皂甙Rg1对HPV16 L2 E6 E7融合蛋白疫苗的免疫佐剂作用研究: 2016年; 宫颈癌（ cervical carcinoma）是威胁女性健康的第二大恶性肿瘤,其危害程度仅次于乳腺癌。据国际癌症中心（ In-ternational Agency for Research on Cancer,IARC）统计,全球每年宫颈癌的新发病例约为49.3万,死亡人数约为27.4万。Papovaviridae科的人乳头瘤病毒（ human papillomaviruses, HPV）感染是导致宫颈癌发生的重要原因,目前已发现它有170多种亚型,而75%以上的宫颈癌患者感染了16、18、31和45型的HPV病毒。; 苏小艳王云皓徐伟吴洁关然何珊珊陈刚胡松华; 关键词：人参皂甙RG1 HPV16 蛋白疫苗宫颈癌发生 E6 E7

重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用: 2017年; 目的研究重组4-1BB配体（recombinant 4-1BB ligand，r4—1BBL）作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型（humanpapillomavirus16，HPVl6）蛋白疫苗（HPVl6蛋白疫苗）免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化，并通过NdeI和XhoI酶切位点定向插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21（DE3），并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定，并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-IBBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL／6小鼠，用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平，观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。结果密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达，且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体，电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比，r4—1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答（t=3．525，P=0．024）和产生更明显的肿瘤生长抑制作用（t=2．534，P=0．021）。结论r4-1BBLL在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果，具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。; 高孟高丽美朱赟陈刚吴洁许玲敏罗永能庄昉成; 关键词：佐剂免疫人乳头瘤病毒16

表达人乳头瘤病毒16型E6E7重组腺病毒疫苗对小鼠的免疫和抗肿瘤效应被引量：2: 2014年; 目的评价HPVl6E6E7的复制缺陷型重组5型腺病毒（PK—HPV—ad5）治疗性疫苗对实验小鼠免疫应答和抗肿瘤的生物学效应。方法使用基因重组技术构建PK—HPV—ad，疫苗，并通过小鼠免疫试验，检测小鼠总抗体和特异性IFNl，同时将造模小鼠分成疫苗组和对照组，分别对其进行抑瘤试验、TC-1肿瘤细胞挑战试验和肿瘤切除后防复发试验。结果HPV16E6E7诱导的总抗体第12天的水平相对较高（1：400～1：600）；3批次疫苗特异性IFNl在第14天与对照组比较分别升高8．6、5．9和8．9倍，差异有统计学意义（t=15．721、6．967和14．342，P均〈0．01）。抑瘤试验表明疫苗剂量为10^7IU／只时小鼠肿瘤生长率为0，与对照组比较差异有统计学意义（确切概率法，P〈0．01），3批次疫苗验证有效剂量为10^7IU／只时肿瘤抑制率可达80％（8／10）以上。TC-1肿瘤细胞挑战试验结果显示：小鼠先接种疫苗能引起特异性的免疫应答，并能保护90％（9／10）的小鼠免受TC-1肿瘤细胞的攻击；肿瘤切除后防止复发试验提示在注射相同剂量疫苗时，对10^4个，只和10^5个／只肿瘤细胞造模小鼠，第0、5天免疫组肿瘤复发数少于第5，8天免疫组（1／10，4／10VS8／10，7／10）。结论PK—HPV—ads疫苗能诱导小鼠产生特异性的免疫应答，对抗肿瘤复发有治疗潜力。; 吴洁陈刚金素凤高孟庄昉成李剑波姜云水毛子安; 关键词：腺病毒疫苗抗肿瘤作用

非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸对人乳头瘤病毒治疗性蛋白疫苗的免疫佐剂作用被引量：2: 2013年; 目的研究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）联合宫颈癌治疗性融合蛋白疫苗HPV16L2ESET（以下简称蛋白疫苗）诱导小鼠产生的免疫应答及其在肿瘤免疫治疗中的免疫佐剂作用。方法免疫学试验：108只雌性C57BL／6小鼠随机分成CpG组、蛋白疫苗组、CpG＋蛋白疫苗组，每组36只，分别肌肉注射CpG-ODN（10μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg/只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0,3、7d；ELISPOT法检测IFN-T，间接ELISA法检测IgG抗体水平，分别评价小鼠产生的细胞及体液免疫效果。肿瘤抑制试验：将40只雌性C57BL／6小鼠皮下接种TC．1肿瘤细胞（1×104／只），24h后随机分成4组接种疫苗，每组10只，CpG组、蛋白疫苗组和CpG＋蛋白疫苗组分别肌肉注射CpG-ODN（10μg/只）、蛋白疫苗（120μg／只）、蛋白疫苗（120μg／只）和CpG-ODN（10μg／只）的混合溶液，免疫程序为0、3、7d；对照组不给药。通过成瘤率分析抗肿瘤效果。结果免疫学试验表明，免疫后14、21和28d,CpG＋蛋白疫苗组小鼠分泌IFN-y的T细胞高于蛋白疫苗组（Z=-2．36、-3．58、-3．58，P均〈0．05），在21d达到最高水平；免疫后5周，CpG＋蛋白疫苗组IgG抗体滴度维持在1：1×105左右，其中在10、14、21、42d与蛋白疫苗组比较差异显著（t=6．15、5．84、4．57、7．91，P均〈0．01）；抑瘤试验表明，蛋白疫苗组能延缓肿瘤生长，成瘤率为40％，添加CpG-ODN后，成瘤率降为0（x^2=5．00，P〈0．05）。结论将CpG-ODN与HPV16L2E6E7融合蛋白疫苗联合应用，可以诱导C57BL／6雌性小鼠产生更强的特异性体液和细胞免疫应答，对荷瘤鼠有更好的抗肿瘤效果，有望提高疫苗的免疫治疗效果。; 吴小红吴洁陈刚金素凤高孟陈科达姜云水李剑波罗永能庄昉成; 关键词：CPGODN 肿瘤免疫治疗

牛血清蛋白含量的高低对细胞生长的影响被引量：7: 2005年; 许多生物技术科学研究和产品的生产都离不开细胞培养。培养液是进行细胞培养的关键，而培养液的主要成分新生牛血清在细胞生产中使用最为广泛，是目前细胞培养中用量最大的天然培养基，它主要提供维持细胞生长的激素、结合蛋白、粘附蛋白、细胞贴壁因子、蛋白酶抑制剂，对细胞的生长繁殖发挥着至关重要的作用。; 宋红英高丽美顾春燕吴洁; 关键词：细胞生长蛋白含量细胞培养蛋白酶抑制剂结合蛋白

HEK293细胞的传代、建库与高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒的研究被引量：1: 2015年; 目的对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶切图谱鉴定。结果 HEK293细胞传代符合其生长形态,建立的三级细胞库和不同细胞库之间的传代数,细胞浓度和装量均符合疫苗基质制备的要求;能高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒,种子滴度>3.0×109 IU·m L?1;表达的目的基因和目的蛋白稳定。结论建立的HEK293三级细胞库符合疫苗用细胞基质的要求。; 吴洁李剑波高孟金素凤潘海桦陈刚姜云水庄昉成; 关键词：HEK293 细胞库 HPV16 重组腺病毒

冻干甲型肝炎减毒活疫苗的安全性及免疫原性观察: 2012年; 目的观察采用不含明胶、不含人血白蛋白保护剂制备的冻干甲型肝炎（甲肝）减毒活疫苗接种后的安全性及免疫原性。方法在浙江杭州及河北正定二个点，筛选了183名甲肝病毒易感者，给予冻干甲肝减毒活疫苗一针免疫。观察疫苗接种后7d内的局部和全身反应，同时采集接种后的血清样本，检测甲肝抗体阳转率及抗体产生的水平。结果观察期间主要表现为轻度反应，肝功能检测未见异常，未发生与疫苗有关的重度反应、皮疹及不良事件。疫苗接种后2个月的抗体阳转率为98．2％，抗体的几何平均滴度为135．5mlU／mL。结论不含明胶、不含人血白蛋白的保护剂制备的疫苗安全性及免疫原性良好。; 陈念良忻亚娟马景臣吴洁金巧军庄防成; 关键词：疫苗甲型肝炎安全性免疫原性

人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用被引量：1: 2015年; 目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗（HPV16 L2E6E7）酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性（R2〉0.99）和回收率（90%~110%）;特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。; 李剑波潘海桦姜云水吴洁陈刚高孟金素凤吴小红包佳源陈科达庄昉成; 关键词：人乳头瘤病毒16型重组蛋白抗体

人乳头瘤病毒治疗性活载体疫苗的研究进展被引量：1: 2011年; 高危型人乳头瘤病毒（HPV）－16和HPV-18在宫颈癌的致病过程中起着重要作用。近年来，HPV预防性疫苗已成功上市，但其费用较高，且不能治疗已感染的患者及相关的损伤。多种靶向E6／E7抗原的HPV治疗性疫苗已进入临床前模型和临床试验，包括活载体疫苗，多肽、蛋白疫苗，核酸疫苗及细胞疫苗。此文就HPV治疗性活载体疫苗进行了综述。; 吴小红陈科达吴洁庄昉成; 关键词：宫颈癌

冻干甲肝减毒活疫苗免疫原性及持久性分析被引量：5: 2008年; 许国章陈耀荣姜立民边国林马瑞吴洁董红军徐国峰张姝倪红霞; 关键词：疫苗免疫原性甲肝疫苗免疫持久性疫苗接种计划免疫管理流行病学效果

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