高孟
- 作品数：49 被引量：194H指数：8
- 供职机构：浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目浙江省“钱江人才计划”国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 原发性小肝癌超声引导下经皮微波消融与手术切除疗效的对比研究被引量：19
- 2015年
- 目的对比研究超声引导下经皮微波消融与手术切除治疗直径≤3cm的原发性小肝癌的疗效。方法回顾性分析44例超声引导下经皮微波消融的原发性小肝癌患者与54例手术切除的原发性小肝癌患者的资料，比较两组无瘤生存率及总生存率。结果微波消融组3月、6月、12月、24月、36月、48月无瘤生存率分别为93．0％、88．0％、77．2％、60．2％、31．2％、31．2％，手术切除组同期无瘤生存率分别为90．7％、90．7％、80．0％、70．1％、70．1％、56．1％（P=0．207）；微波消融组6月、12月、24月、36月、48月总生存率分别为97．4％、97．4％、92．9％、83．6％、83．6％，手术切除组同期总生存率分别为96．2％、96．2％、96．2％、88．2％、75．6％（P：0．869）。术后肝功能（ALT、AST、ALB）、术后平均住院时间比较，微波消融组均优于手术切除组（Pd0．05）。结论超声引导下经皮微波消融治疗原发性小肝癌可以得到与手术切除相近或相一致的疗效，对患者机体损伤小，术后恢复快，是原发性小肝癌首选的治疗方式之一。
- 高孟李开艳罗洪昌张伟张婷婷查文慧刘若冰邓又斌
- 关键词：超声检查
- 肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证被引量：2
- 2013年
- 目的 探究利用大肠埃希菌原核表达系统表达的肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VP1的抗原性和免疫原性.方法 将EV71 H3-TY株的VP1基因通过PCR扩增,并引入Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,定向克隆至pET44a-EV71 VP1表达载体,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,并用IPTG诱导VP1的表达.然后将表达的重组VP1 （rVP1）经超声、离心和Ni-NTA亲和层析柱纯化并透析复性,用Western免疫印迹法和先前建立的夹心ELISA等方法检测其抗原活性,同时用rVP1免疫兔子并通过测定其诱导的特异性抗体水平来确定其免疫原性.结果 rVP1在大肠埃希菌中主要表达于包涵体中,但能被顺利且有效地纯化和复性.SDS-PAGE显示表达的rVP1相对分子质量约为34 000,与预期大小相符.纯化的rVP1可分别与兔抗EV71多克隆抗体、大鼠抗EV71 VP1单克隆抗体（单抗）和小鼠抗EV71 VP1单抗进行特异性免疫应答.rVP1免疫兔诱导产生的特异性抗体效价高达729 000,高于本底效价,且差异有统计学意义（t=2.646,P＜0.01）.结论 EV71 VP1在大肠埃希菌原核表达系统中得以成功表达,纯化的rVP1具有良好的抗原活性和免疫原性.
- 朱赟李剑波高孟唐彩华罗永能
- 关键词：肠道病毒感染衣壳蛋白原核表达
- HEK293细胞的传代、建库与高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒的研究被引量：1
- 2015年
- 目的对HEK293细胞进行三级细胞库的建立,并高效表达重组的HPV16-E6E7腺病毒。方法进行HEK293细胞传代培养,并建立三级细胞库,按中国药典2010年版III部要求进行常规检验;培养重组HPV16-E6E7腺病毒,测定滴度,插入目的基因以及基因组酶切图谱鉴定。结果 HEK293细胞传代符合其生长形态,建立的三级细胞库和不同细胞库之间的传代数,细胞浓度和装量均符合疫苗基质制备的要求;能高效表达重组HPV16-E6E7腺病毒,种子滴度>3.0×109 IU·m L?1;表达的目的基因和目的蛋白稳定。结论建立的HEK293三级细胞库符合疫苗用细胞基质的要求。
- 吴洁李剑波高孟金素凤潘海桦陈刚姜云水庄昉成
- 关键词：HEK293细胞库HPV16
- 禽流感病毒H7N9神经氨酸酶的优势线性B细胞抗原位点的预测及确定被引量：1
- 2017年
- 目的 确定禽流感病毒H7N9神经氨酸酶的优势线性B细胞抗原位点.方法 利用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析禽流感病毒H7N9神经氨酸酶氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性,计算不同区段上述指数的加权平均值,预测出潜在的优势线性B细胞抗原位点并进行人工合成.利用多肽-酶联免疫吸附试验（多肽-ELISA）检测各预测片段与明确感染H7N9患者血清的反应性,同时以未感染H7N9的正常人血清作为阴性对照.结果 根据抗原性、亲水性和表面可及性指数均较高的特点,共预测出7个潜在的神经氨酸酶线性B细胞抗原位点,分别为A、B、C、D、E、F和G多肽-ELISA实验结果证实各预测表位均与H7N9患者血清发生阳性反应.结论 成功预测及确定了禽流感病毒H7N9神经氨酸酶优势线性B细胞抗原位点,为抗原分子特异性研究和抗体制备奠定了基础.
- 高孟谢珲姜立民高丽美倪红霞罗永能
- 关键词：流感病毒A型
- 柯萨奇病毒A16型感染性模型的建立及其相关免疫学指标和应用的评价被引量：5
- 2017年
- 目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50%致死剂量(LD50);并测定感染3 d后其血液和主要组织器官中CVA16病毒滴度;最后用CVA16灭活疫苗在1日龄和11日龄免疫2针沙鼠后,在14日龄时用LD50剂量病毒攻毒,观察并记录沙鼠体重、症状及死亡率,2周后眼球采血,应用微量中和试验和ELISA分别检测中和抗体效价和总抗体水平。结果长爪沙鼠感染CVA16后出现活动减少、后肢无力、麻痹瘫痪、死亡等临床症状,不同日龄沙鼠对CVA16感染的易感能力和感染后发病程度不同,7日龄和14日龄沙鼠易感,28日龄沙鼠不易感染,最敏感和最合适接种日龄为14日龄,其LD50为1×104.5 CCID50,感染3 d后其血液和主要组织器官中均可检测到高滴度的CVA16病毒,免疫两针灭活疫苗的14日龄沙鼠用LD50剂量攻毒,存活率87.5%,疫苗免疫诱导沙鼠产生的CVA16中和抗体几何平均值(GMT)为28.14,抗体阳性率为87.5%。结论长爪沙鼠对CVA16敏感并且病毒能在其体内进行有效的复制和繁殖,可作为CVA16致病机制研究、疫苗研发及药物评价的可靠小动物模型。
- 张锋高孟高丽美罗永能
- 关键词：柯萨奇病毒A16型长爪沙鼠动物模型
- 柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究被引量：5
- 2014年
- 目的 探索柯萨奇病毒A16型（CVA16） YY157株在非洲绿猴肾（Vero）细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变（CPE）,可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ～0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2％牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90％以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础.
- 张锋朱莲陈军高孟唐彩华周康凤高丽美罗永能
- 关键词：病毒培养
- 人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗酶联免疫检测法的建立及其应用被引量：1
- 2015年
- 目的建立人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗（HPV16 L2E6E7）酶联免疫的检测方法,用于疫苗发酵过程中的重组蛋白表达的监控。方法用常规方法制备兔抗HPV16 L2E6E7多克隆抗体作为包被抗体,商品化小鼠抗HPV16 E7单克隆抗体为检测抗体,夹心ELISA方法检测HPV16 L2E6E7抗原参考品,建立抗原标准曲线,确定线性范围及检测限,同时验证该方法的特异性。结果建立了检测HPV16 L2E6E7抗原含量的夹心ELISA方法,抗原参考品系列浓度在19.53~1 250 ng·m L-1内有很好的线性（R2〉0.99）和回收率（90%~110%）;特异性好,不受发酵液中宿主菌蛋白的干扰。结论建立了人乳头瘤病毒重组蛋白疫苗重组抗原含量的测定方法,为该疫苗的发酵工艺的质控提供了有效技术手段。
- 李剑波潘海桦姜云水吴洁陈刚高孟金素凤吴小红包佳源陈科达庄昉成
- 关键词：人乳头瘤病毒16型重组蛋白抗体
- 一种抗原多肽及其应用
- 本发明公开了一种抗原多肽，氨基酸序列为QMTKSYKNTRKS或在此基础上经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸能够与人抗H7亚型禽流感病毒血凝素抗体特异性结合的多肽；本发明还公开了所述抗原多肽在制备诊断人感染H7亚型禽流...
- 陶薇洪艳罗永能高孟姜立民谢珲倪红霞高丽美傅婷何卓晶
- 大鼠抗肠道病毒71型衣壳蛋白VP1特异性中和单克隆抗体的研制与应用被引量：6
- 2013年
- 目的研制大鼠抗肠道病毒71型（EV71）衣壳蛋白VPl特异性中和单克隆抗体（单抗），并用Westem印迹、ELISA和免疫荧光检测（IFA）等方法验证其特异性。方法采用单克隆杂交瘤技术人工合成包含EV71 VP1中和抗原决定簇位点SPT0的多肽偶联载体蛋白KLH，腹腔内注射免疫大鼠数次后，取有预期免疫应答的脾细胞与SP2／0小鼠骨髓瘤细胞融合，用间接ELISA法筛选和有限稀释法亚克隆获得稳定的阳性单克隆杂交瘤细胞株并鉴定其IgG亚型。选取其中1株单克隆杂交瘤细胞系BC6，体外培养后注射于SCID裸鼠腹腔制备腹水以产生大量抗体，用ProteinA层析柱亲合纯化后获得纯化抗体。细胞培养微量中和试验测定该单抗中和EV71的滴度，并将其用于多种方法检测EV71特异性抗原。结果共获得8株稳定的单克隆杂交瘤细胞系，分别有6株属于IgGl亚型，2株为IgG2a亚型。通过制备腹水大量产生抗EV7l大鼠单抗BC6并纯化，其对EV71的中和滴度为1：32。BC6用于Western免疫印迹可特异检测大肠埃希菌表达的EV71VPl重组蛋白和EV71样品中的VPl，用于ELISA可灵敏特异地定性或定量检测EV71抗原含量，用于IFA可特异识别被感染Vero细胞内的EV71颗粒，而对柯萨奇病毒A16型无交叉反应。结论成功制备获得了大鼠抗EV71VPl的特异性中和单抗，可应用于Western免疫印迹、ELISA、IFA等方法，成为灵敏特异地检测EV71VPl或全病毒颗粒的有效工具。
- 张锋高丽美朱赟高孟潘海桦陈卓吴海光罗永能
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体ELISA免疫荧光检测
- 超声引导下经皮穿刺置管序贯治疗胰腺假性囊肿远期疗效观察被引量：8
- 2016年
- 目的:探讨并总结超声引导下经皮穿刺置管序贯治疗胰腺假性囊肿的远期疗效。方法:回顾性分析经保守治疗无效的266例胰腺假性囊肿患者的临床病历资料,其中234例患者行超声引导下经皮穿刺置管序贯治疗,32例患者转外科手术治疗;分析其远期疗效及影响因素。结果:266例患者共有298个胰腺假性囊肿,234例经皮穿刺置管序贯治疗的患者均成功完成超声引导下的置管引流,且未出现胰漏、感染扩散等并发症。225例患者治疗有效,囊腔闭合,囊肿消失,有效率96.2%。其中5例复发,复发率为2.3%。32例外科手术治疗患者,有效率96.7%。1例患者复发,复发率为3.1%。所有患者随访超过12个月。结论:超声引导下经皮穿刺置管序贯治疗胰腺假性囊肿安全有效,具有微创、住院时间短及并发症少等优点。
- 罗鸿昌孙珊珊张伟高孟刘若冰王敏李开艳
- 关键词：胰腺假性囊肿超声引导经皮引流疗效
