吴洪玉
- 作品数：42 被引量：85H指数：4
- 供职机构：第二军医大学附属长海医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划常州市社会发展科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 酪蛋白空肠灌注对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺外分泌的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察空肠内灌注酪蛋白对急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠胰腺外分泌的影响，并初步探讨其神经机制。方法30只SD大鼠按随机数字法分为对照组、ANP组和肠内营养组。后2组以胰管内逆行注射牛磺胆酸钠法制作ANP模型。造模后24h空肠插管分别灌注酪蛋白溶液（肠内营养组）和生理盐水（对照组和ANP组），每15min收集胰液1次，共6次，记录胰液分泌量和检测胰液蛋白含量。取大鼠延髓孤束核，采用免疫组化法检测c—Fos蛋白表达。结果ANP组和肠内营养组组内各时间段之间胰液分泌量无显著差别，两组相应时间段之间胰液分泌量也无显著差别，但均显著低于对照组对应时间段的胰液分泌量（P〈0．05）。对照组、ANP组和肠内营养组空肠灌注过程中胰液蛋白含量水平稳定，不同时间段间无明显差异，但ANP组和肠内营养组空肠灌注后0～15min、15—30min、30～45min、75～90min时间段内胰液蛋白含量均低于对照组（P〈0．05）。肠内营养组灌注后延髓孤束核c-Fos蛋白表达阳性，而对照组和ANP组延髓孤束核c—Fos表达阴性。结论空肠内酪蛋白灌注可促进延髓孤束核c—Fos表达，但不增加胰液分泌量和胰液蛋白含量。
- 赵航李兆申黄丹丹龚燕芳高峻吴洪玉满晓华许爱芳
- 关键词：急性坏死性肠道营养孤束核
- 三种胰腺癌细胞株Mesothelin的表达及成瘤速度的比较被引量：1
- 2012年
- 目的比较3种人胰腺癌细胞株在体外和裸鼠体内Mesothelin的表达及裸鼠皮下种植瘤生长速度的差异。方法培养人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3、PANC1，取对数生长期分别注射于裸鼠左腋窝皮下，每周测量裸鼠皮下种植瘤的长、短径，计算体积，SW1990、BxPC3组裸鼠观察3周，PANC1组裸鼠观察5周；用蛋白质印迹法分别检测3种细胞及裸鼠皮下种植瘤组织中的Mesothelin表达，用免疫组化染色检测3种裸鼠皮下种植瘤组织中Mesothelin表达。结果人胰腺癌细胞株体外Mesothelin表达的强弱顺序是BxPC3〉PANC1〉SW1990，体内种植瘤组织表达的强弱顺序是SW1990〉BxPC2〉PANC1。3种人胰腺癌细胞种植于裸鼠皮下的成瘤率均为100％，各组肿瘤的生长速度顺序为SW1990〉BxPC3〉PANC1。结论不同人胰腺癌细胞株Mesothelin的表达量不同，裸鼠皮下种植瘤的生长速度亦不同，两者无相关性。
- 潘璜吴洪玉陈士跃刘敬禹邵成伟田建明
- 关键词：胰腺肿瘤
- 人NPTX2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立
- 2010年
- 目的构建人神经元正五聚蛋白2（NPTX2）真核表达载体，转染人胰腺癌细胞PANC1，建立稳定转染的细胞系。方法通过双酶切的方法获得人NPTX2全长cDNA，利用NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点将其插入到真核表达载体pcDNA3．1（＋），经酶切和测序验证后，用脂质体转染法转染PANC1细胞，通过G418筛选，建立稳定转染的PANC1细胞，用实时定量PCR方法筛选NPTX2mRNA高表达克隆。结果成功构建了pcDNA3．1（＋）-NPTX2真核表达载体，并建立了稳定转染的PANC1细胞，成功表达了目的基因。结论真核表达载体的构建和稳定转染PANC1细胞系的建立为进一步研究NPTX2基因在胰腺癌细胞的作用奠定了良好的基础。
- 张玲高军龚燕芳李兆申吴洪玉金晶满晓华
- 关键词：胰腺肿瘤转染细胞系
- RNA干扰DNA甲基转移酶1对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察以DNA甲基转移酶1（DNA methy transferas 1，DNMT1）基因为靶基因的RNA干扰对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法设计、合成针对DNMT1基因的siRNA和阴性对照siRNA（N—siRNA）。实验分为空白对照组、脂质体组（仅予脂质体）、N—siRNA组（转染30 nmol N-siRNA）、siRNA组（转染30 nmol siRNA）。siRNA转染48h后，实时PCR法检测DNMT1 mRNA水平；WST-8法检测细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果siRNA组DNMT1mRNA的抑制率为（86．0±4．3）％，明显高于N—siRNA组的（40．1±2．2）％和空白对照组的0（P〈0．01）；细胞存活率为（47．6±5．6）％，明显低于N—siRNA组的（68．1±4．1）％和空白对照组的100％（P〈0．01）；细胞凋亡率为（14．94±2．89）％，明显高于空白对照组的（7．51±1．12）％、脂质体组的（7．06±0．39）％、N—siRNA组的（8．84±1．44）％（均P〈0．01）。结论siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1 mRNA的表达，同时抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。
- 徐岷高道键张玉琦高军李兆申龚燕芳吴洪玉杜奕奇金晶满晓华
- 关键词：胰腺肿瘤RNA小分子干扰细胞增殖
- 温和高温下胰腺癌细胞株PANC1对吉西他滨耐药性的影响
- 2012年
- 目的观察温和高温下胰腺癌细胞株PANC1对吉西他滨敏感性的影响。方法应用1μmol／L吉西他滨处理胰腺癌PANC1细胞1h后，分别置37、42、45℃水浴锅孵育1h，再继续培养0、24、48h。采用CCK．8法检测细胞增殖，AV／PI染色后上流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果42℃及45℃孵育细胞24、48h后的细胞增殖均较37℃孵育的细胞显著降低（0．96±0．05、0．88±0．03比1．05±0．02：1．28±0．04、0．94±0．04比1．49±0．09；t值分别为4．367、25．120、3．510、12．101，P值均〈0．05），且45℃孵育的细胞增殖显著低于42℃孵育的细胞（￡值分别为3．348、11．732，P值均〈0．05）。37、42、45℃孵育的吉西他滨处理的PANC1细胞48h后的细胞凋亡率分别为（7．125±0．064）％、（9．985±0．615）％、（14．845±1．987）％，3组间的差异均具有统计学意义（t值分别为10．320、9．832、4．575，P值均〈0．05）。结论温和高温可以增加PANC1细胞对吉西他滨的敏感性。
- 刘明浩李淑德李兆申高军吴洪玉龚艳芳
- 关键词：胰腺肿瘤吉西他滨药物疗法
- 抵抗素在大鼠急性胰腺炎中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的检测抵抗素在大鼠急性胰腺炎（AP）中的表达，探讨其与胰腺病理改变的关系。方法40只SD大鼠按数字表法随机分为正常组、假手术组、急性水肿性胰腺炎（AEP）组和急性坏死性胰腺炎（ANP）组。AEP组腹腔注射雨蛙素，ANP组腹腔注射精氨酸，正常组未做任何处理，假手术组腹腔注射等容量生理盐水。测定大鼠血清淀粉酶、抵抗素、TNF-α、IL-1β、C反应蛋白（CRP）水平，记录胰腺／体重比值，观察胰腺组织病理变化，免疫组化法检测胰腺组织抵抗素蛋白表达，实时定量PCR法检测胰腺组织抵抗素mRNA表达。结果抵抗素主要定位于胰腺腺泡细胞的胞质内。AEP组血清淀粉酶水平、胰腺／体重（g／kg）比值、胰腺组织病理评分、抵抗素mRNA表达量及血清抵抗素、IL-1β、TNF-α和CRP水平分别为（4377±343）U／L、（8．67±1．43）、（5．39±0．26）、（2．04±0．19）、（10．21±1．34）ng/ml、（184．18±45．24）pg／ml、（194．24±44．81）pg／ml、（3586±63）ng／ml；ANP组分别为（6750±322）U／L、（9．33±1．76）、（7．81±0．28）、（3．29±0．30）、（15．14±0．84）ng／ml、（349．31±94．54）pg／ml、（315．59±37．04）pg／ml、（4345±244）ng／ml。两组均显著高于假手术组的（1442±183）U／L、（4．34±0．42）、（1．10±0．21）、（0．88±O．08）、（5．13±0．74）ng/ml、（108．74±31．03）pg／ml、（106．44±21．31）pg／ml和（2895±165）ng／ml（P〈0．01），且该两组间差异也有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。血清抵抗素水平与CRP、TNF-α、IL-1β水平及胰腺组织病理评分均呈正相关，相关系数r分别为0．711、0．871、0．794和0．812（P〈0．01）。结论抵抗素与AP的发生、发展有关，其检测结果可能是评估AP严重程度的有价值的指标之一.
- 徐克群沈云志龚燕芳满晓华吴洪玉金晶
- 关键词：胰腺炎抵抗素C反应蛋白TNF-ΑIL-1Β
- ^125Ⅰ粒子短时低剂量率照射对胰腺癌Capan-2细胞神经浸润的影响被引量：1
- 2013年
- 目的 观察^125I粒子短时低剂量率照射对胰腺癌Capan-2细胞神经浸润的影响,并探讨其分子机制.方法 建立胰腺癌Capan-2细胞和大鼠背根神经节（DRG）共培养及Capan-2或DRG单培养模型.通过125I粒子低剂量率照射平板对3种模型进行照射,以相应未照射模型作为对照.倒置显微镜下观察癌细胞、DRG的生长,图像分析软件计算神经突和癌细胞集落占据的表面积,ELISA法检测细胞培养上清液和基质胶溶解液中神经生长因子（NGF）及转化生长因子α（TGF-α）浓度,RT-PCR法检测胰腺癌Capan-2细胞神经营养因子-3（NT-3）mRNA表达.结果 共培养模型中DRG发出的神经突向癌细胞定向、集中生长,而癌细胞沿神经突的方向生长.经125I粒子照射后这种定向、集中和互逆的生长受到一定程度的抑制.共培养组第5天所增加的神经突表面积为290.15±12.08,较DRG单培养组的124.83±6.96显著增加（P＜0.01）,经照射后的神经突表面积减少到201.53±12.20（P ＜0.01）;所增加的Capan-2细胞表面积为300.47±12.99,较Capan-2细胞单培养组的199.30±8.60显著增加（P＜0.01）,经照射后的Capan-2细胞表面积减少到202.35±7.97 （P ＜0.01）.共培养组不表达NT-3mRNA,经照射后NT-3mRNA表达量为0.68±0.04（P ＜0.05）.共培养组培养上清液中NGF及TGF-α浓度分别为（27.56 ±13.73）、（40.86±20.73） ng/ml,经照射后分别升高到（94.98±33.80）、（157.54±83.76） ng/ml,差异有统计学意义（P＜0.05或＜0.01）.共培养组基质胶溶解液中NGF及TGF-α浓度分别为（60.42 ±33.03）、（64.39±21.52） ng/ml,经照射后分别升高到（132.52±53.01）、（138.38±83.58） ng/ml,其中NGF的差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 125I粒子短时低剂量率照射可以抑制胰腺癌和神经的交互作用,其机制可能与癌细胞促神经浸润介质NGF、TGF-α和NT-3等表达上调有关.
- 司佩任路筝刘岩马建霞吴洪玉李兆申
- 关键词：胰腺肿瘤碘同位素小剂量照射肿瘤浸润
- Snail基因沉默对胰腺癌PANC1细胞侵袭和增殖的影响
- 2017年
- 目的观察Snail基因沉默后对胰腺癌PANC1细胞侵袭和增殖能力的影响。方法构建针对Snail的小发卡RNA（shRNA-Snail）的慢病毒载体和不针对任何已知mRNA序列的shRNA（shRNA-NC）慢病毒载体，分别感染PANC1细胞，以未感染细胞作为对照组。应用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测Snail、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及E-钙黏素（E-cadherin）mRNA和蛋白的表达；Transwell小室检测细胞体外侵袭能力，CCK-8法检测细胞增殖能力。结果与shRNA-NC组比较，shRNA-Snail组细胞Snail mRNA和蛋白表达水平显著下降[（0.27±0.02）比（0.92±0.03），（0.26±0.02）比（0.80±0.02）]，α-SMA mRNA和蛋白表达水平亦显著下降[（0.33±0.04）比（0.97±0.07），（0.31±0.04）比（0.74±0.06）]，E-cadherin mRNA和蛋白表达水平则显著升高[（1.57±0.45）比（0.95±0.08），（0.86±0.03）比（0.20±0.03）]，穿膜细胞数显著减少[（6.80±0.73）比（26.80±2.52）个/400倍视野]，细胞增殖明显被抑制[（0.74±0.05）比（1.47±0.04）]，差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。shRNA-NC组与对照组细胞各指标的差异均无统计学意义。结论沉默Snail基因表达可在一定程度上抑制胰腺癌PANC1细胞的侵袭和增殖能力。
- 杨静吴洪玉李理想任洪波
- 关键词：胰腺肿瘤小分子干扰
- 罗格列酮在急性坏死性胰腺炎中对抵抗素的影响被引量：3
- 2010年
- 随着社会的发展，人们生活水平的提高，肥胖和高脂血症的人群越来越多，由高三酰甘油血症引起急性胰腺炎（AP）的发病率随之增高；而三酰甘油的调节由脂肪细胞分泌的脂肪激素调节。因此，脂肪激素在AP发病中的作用越来越引起人们的重视。抵抗素（resistin）是新近发现的由脂肪细胞特异分泌的一种多肽类激素，与胰岛素抵抗有关，
- 徐克群薛乐宁龚燕芳吴洪玉金晶
- 关键词：急性坏死性胰腺炎抵抗素罗格列酮脂肪细胞分泌高三酰甘油血症多肽类激素
- 肽核酸钳制-PCR/K-ras突变检测方法在结直肠癌组织中的诊断应用
- 2013年
- 目的确定本实验室建立的肽核酸钳制(PNA)-PCR/K-ras突变检测方法的阳性判断标准,并评价其对结直肠癌组织的诊断价值。方法将含K-ras基因12密码子突变的质粒和野生质粒以不同比例(突变/总体:0,1/3 200,1/1600,1/800,1/400,1/200,1/100)混合作为标准样品,独立配制6个批次并分别进行PNA-PCR/K-ras突变检测,收集Kras突变CT值及K-ras总体CT值,计算ΔCT值(突变CT值-总体CT值),采用ROC曲线分析突变CT值和ΔCT值诊断K-ras突变的最适Cut-off值,联合两者最适Cut-off值,设定该方法的最终阳性判断标准。分别采用该方法和直接测序法对35例结直肠癌组织及对应癌旁组织进行K-ras突变检测并比较分析。结果突变模板浓度为1/800及以上的标准样品突变CT值和ΔCT值与阴性标准品之间差异存在统计学意义(P<0.05);突变CT值和ΔCT值的最适Cut-off值分别为41.7和15.4。最终阳性判断标准为突变CT值≤41.7或ΔCT值≤15.4,对应的ROC曲线下面积为0.955(P=0.001),以此判断标准,各标准样品(0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100)的阳性检测率分别为0%、66.7%、83.3%、100%、100%、100%、100%,检测下限为1/800。在结直肠癌及癌旁组织标本中,该方法阳性检测率为45.7%(32/70),与直接测序法(18.6%,13/70)比较差异具有统计学意义(P=0.000)。结论 PNA-PCR/K-ras突变检测方法具有较高的检测灵敏度,在结直肠癌组织样本中具有较直接测序法更高的阳性检出率。
- 李泉江胡佳佳金晶吴洪玉满晓华朱玲高军李兆申
- 关键词：K-RAS基因突变
