孙雯雯
- 作品数：18 被引量：54H指数：4
- 供职机构：天津市第四中心医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市自然科学基金天津市卫生局科技基金更多>>
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- 负载结肠癌干细胞热休克蛋白96的树突状细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞对同源肿瘤干细胞的杀伤研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究结肠癌干细胞来源的gp96冲击树突细胞(Dendritic cell,DC),与细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine killer cell,CIK)共培养,探讨其对结肠癌干细胞的杀伤效果。方法用无血清悬浮培养法从结肠癌细胞HT29中富集结肠癌干细胞,肿瘤干细胞可以通过其表面的特异性标记分子进行鉴定,结肠癌肿瘤通常选用人类白细胞分化抗原44(CD44)、人类白细胞分化抗原133(CD133)、乙醛脱氢酶-1(ALDH1)等分子。本研究选取CD133对HT29肿瘤细胞球进行肿瘤干细胞的鉴定。然后,将从结肠癌细胞HT29微球中提取的总蛋白通过硫酸铵分级盐析、Con A亲和层析、DEAE离子交换层析纯化出热休克蛋白96(gp96),所得蛋白经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(10%SDS-PAGE)和蛋白质印记(Western Blot)进行分子量及纯度的鉴定,并用二喹啉甲酸(BCA)法测其蛋白浓度。然后用gp96-肽复合物冲击DC,与CIK共培养,采用乳酸脱氢酶(LDH)法检测gp96冲击DC-CIK细胞对结肠癌干细胞(CSCs)的杀伤活性。结果流式细胞术检测第5代左右HT29微球中CD133+阳性的细胞比例为(73.92±2.76)%,明显高于HT29细胞(30.45±4.50)%。每克(湿重)肿瘤细胞可纯化出30μg左右的gp96。负载结肠癌干细胞gp96的DC-CIK对结肠癌干细胞的杀伤率高于DC-CIK组的杀伤率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论负载结肠癌干细胞gp96的DC-CIK可以更有效地杀伤结肠癌干细胞,临床应用的可能性尚需深入研究。
- 时珊珊郭虎林庞华孙雯雯崔晓旭冯青青杨景婷司玉玲
- 关键词：结肠癌干细胞树突细胞杀伤细胞
- 负载干细胞抗原的DC联合CIK细胞对乳腺癌荷瘤鼠肿瘤杀伤研究被引量：11
- 2014年
- 目的研究不同乳腺癌细胞抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合培养后对乳腺癌荷瘤鼠体内肿瘤的杀伤效果。方法分离乳腺癌细胞系MCF-7/ADR中的乳腺癌干细胞并制备冻融抗原,以此冲击由正常人外周血提取的单个核细胞诱导培养的DC和CIK,注入乳腺癌荷瘤鼠模型中,以此为实验组(BCSC-AP-DC+CIK组),并与普通抗原冲击的DC联合CIK组(AP-DC+CIK组)、DC+CIK组、CIK组及生理盐水组(NS组)建立对照实验。观察各组中小鼠肿瘤生长情况,采用免疫组化法检测bcl-2、bax表达,原位末端标记法(TUNEL)检测各组肿瘤组织凋亡。结果各组小鼠肿瘤体积在治疗前后及各组小鼠肿瘤体积在治疗后差异均有统计学意义(P<0.05),NS组小鼠治疗后肿瘤体积最大(3.625±0.093)cm3,BCSC-AP-DC+CIK组肿瘤体积最小(1.234±0.131)cm3。BCSC-AP-DC+CIK组bax强阳性表达,较其他组强;bcl-2弱阳性或不表达,较其他组弱。凋亡指数BCSC-AP-DC+CIK组>AP-DC+CIK组>DC+CIK组>CIK组>NS组。结论经乳腺癌干细胞抗原冲击的DC与CIK作用后诱导同种乳腺癌细胞凋亡强于经普通乳腺癌细胞抗原冲击的DC联合CIK、单纯DC与CIK共同作用后及单独CIK的治疗效果。
- 庞春淼吕艳孙雯雯司玉玲庞华
- 关键词：杀伤细胞基因,BCL-2
- CD133质粒的新用途
- 本发明提供了CD133质粒的新用途，所述CD133质粒可有效用于增强DC-CIK对乳腺癌干细胞的体外杀伤作用。
- 孙雯雯
- 文献传递
- 负载抗原DC与CIK共培养对富集培养乳腺癌CTCs杀伤作用研究被引量：6
- 2013年
- 目的观察负载抗原的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对富集培养乳腺癌循环肿瘤细胞(CTCs)的细胞毒作用。方法将有CTCs的乳腺癌患者外周血单个核细胞,磁珠分选富集表皮细胞黏附分子(EpCAM)+乳腺癌CTCs体外培养,并用巢式PCR、细胞免疫荧光成像(CK8/18)、细胞免疫组化(CK8/18、CK19)方法进行鉴定,分选后EpCAM-细胞常规诱导DC及CIK;制备乳腺癌CTCs全冻融抗原(Ag)冲击DC,分Ag-DC-CIK组、DC-CIK组、DC组、CIK组。台盼蓝拒染法动态监测CIK细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞免疫表型,MTT法检测对乳腺癌CTCs的杀伤活性,流式细胞术检测诱导乳腺癌CTCs的早期凋亡率,光镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构。结果磁珠分选富集后EpCAM+细胞巢式PCR可见CK19 mRNA条带表达,经体外培养后胞浆染色CK8/18+、CK19+,CK-FITC/DAPI免疫荧光染色见胞浆蓝荧光/核绿荧光的CK8/18阳性细胞。DC与CIK共培养细胞增殖活性明显大于单独培养的CIK(P<0.001),DC免疫表型CD1α、CD83+CD86+、CD83+CD11C+、CD86+CD11C+及CIK免疫表型CD3+CD8+、CD3+CD56+的表达率Ag-DC-CIK组高于DC-CIK组、DC组及CIK组(P<0.05)。Ag-DC-CIK、DC-CIK、CIK3组均可诱导乳腺癌CTCs凋亡,凋亡率为(56.83±3.07)%、(31.43±1.77)%、(24.70±1.51)%,两两比较差异有统计学意义,透射电镜可见诱导凋亡乳腺癌CTCs的典型微结构。结论磁珠分选联合细胞免疫学方法可以提高乳腺癌CTCs的检测灵敏度;经抗原冲击DC明显增加CIK细胞的增殖能力和细胞毒活性,有可能作为一种临床有效的抗乳腺癌复发与转移的免疫治疗手段。
- 吕艳庞华庞春淼司玉玲孙雯雯
- 关键词：树突细胞
- 自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞对结肠癌HT29细胞干细胞的体外杀伤实验研究被引量：4
- 2015年
- 目的研究自然杀伤细胞(NK细胞)和自然杀伤T细胞(NKT细胞)对结肠癌HT29细胞干细胞的体外杀伤作用,为结肠癌的治疗提供依据。方法培养NK和NKT细胞,检测该细胞的细胞表型(包括CD3-、CD3+、CD56+、CD16+和CD336+的比例),并检测该细胞分泌的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)以及分泌的穿孔素和颗粒酶的量及该细胞对HT29细胞及其干细胞的杀伤效果。用SPSS 13.0统计软件对数据进行处理。结果 NK和NKT细胞中的CD3-、CD3+、CD56+、CD16+和CD336+的比例分别为65.60%±5.56%、34.40%±3.54%、97.96%±4.57%、46.64%±3.03%和24.03%±2.34%,分泌TNF-α、IFN-γ、穿孔素和颗粒酶含量分别为(1 194.25±46.7)pg、(202.51±26.1)ng、(92.57±20.1)pg和(856.72±54.6)ng。NK和NKT细胞作为效应细胞,效靶比为10∶1、20∶1、40∶1、80∶1,对结肠癌HT29细胞及其干细胞的杀伤率分别为36.37%±3.45%、44.86%±4.97%、56.65%±5.31%、62.57%±5.89%和24.33%±2.03%、31.78%±3.11%、40.41%±3.54%、49.51%±4.31%。结论培养NK和NKT细胞是切实可行、有效的简单方法,为肿瘤患者的免疫治疗提供了一种新方法。
- 孙雯雯沈娜窦金霞刘子艳梁佩芬高文远
- 关键词：自然杀伤细胞自然杀伤T细胞体外杀伤作用
- 结肠癌HT29细胞干细胞诱导的树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对结肠癌干细胞的体外杀伤实验研究被引量：1
- 2015年
- 目的研究结肠癌干细胞(CSC)经RNA转染或全细胞裂解诱导树突状(DC)细胞,与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养,对结肠癌HT29细胞及其CSC的杀伤作用,为结肠癌的治疗提供依据。方法提取健康人单个核细胞,培养DC和CIK细胞,用结肠癌HT29细胞干细胞的RNA转染或全细胞裂解诱导DC细胞,然后与CIK细胞共培养,形成CSC-RNA-DC-CIK、CSC-裂解物-DC-CIK以及HT29细胞RNA-DC-CIK、HT29细胞裂解物-DC-CIK,用LHD法检测其对HT29细胞及其干细胞的杀伤效果。用SPSS 18.0统计软件进行方差分析。结果 CSC-RNA-DC-CIK组、CSC-裂解物-DC-CIK组、HT29-RNA-DC-CIK组和HT29-裂解物-DC-CIK组的CIK免疫表型(CD3、CD8、CD56)和DC免疫表型(CD40、CD80、CD86、HLA-DR)成熟表达率均明显高于CIK组和DC-CIK组,差异均有统计学意义(P<0.05)。但CSCRNA-DC-CIK组、CSC-裂解物-DC-CIK组、HT29-RNA-DC-CIK组和HT29-裂解物-DC-CIK组之间,差异无统计学意义(P>0.05)。随着效靶比的增加,CIK、DC-CIK、CSC-RNA-DC-CIK、CSC-裂解物-DC-CIK、HT29-RNA-DC-CIK和HT29-裂解物-DC-CIK作为效应细胞对HT29细胞及其干细胞的杀伤作用也逐渐增强,各效靶比中,CSC-RNA-DC-CIK组、CSC-裂解物-DC-CIK组、HT29-RNA-DC-CIK组和HT29-裂解物-DC-CIK组的杀伤率高于CIK组和DC-CIK组,差异均有统计学意义(P<0.05);DC-CIK组高于CIK组,差异有统计学意义(P<0.05);但CSC-RNA-DC-CIK组、CSC-裂解物-DCCIK组、HT29-RNA-DC-CIK组和HT29-裂解物-DC-CIK组之间,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用CSC经RNA转染或全细胞裂解诱导DC细胞,与CIK细胞共培养,强于常规DC-CIK细胞对结肠癌HT29细胞及其CSC的杀伤作用,为今后的肿瘤患者提供了新免疫治疗的方法。
- 孙雯雯沈娜窦金霞刘子艳金健梁佩芬乔丽葵高文远
- 关键词：结肠癌干细胞树突状细胞
- 槐耳联合DC-CIK对荷结肠癌HT29干细胞瘤裸鼠的体内杀伤实验研究被引量：6
- 2018年
- 为了比较不同治疗方法对荷结肠癌HT29细胞干细胞瘤裸鼠的治疗效果。建立了Bal B/C裸鼠结肠癌干细胞模型,随机分为以下4组,每组8只裸鼠：空白对照组、DC-CIK组、槐耳组、槐耳联合DC-CIK组（联合治疗组）。其中DC-CIK组、联合治疗组裸鼠在肿瘤干细胞接种4 d后通过尾静脉注射1×10^6个DC-CIK细胞给予治疗,每周2次共3周;槐耳组和联合治疗组,按每60 kg体质量20 g给药,每天1次灌胃0.2 mL,共3周;对照组以等体积生理盐水代替。各组裸鼠在治疗3周期间每2d测量瘤体大小及裸鼠体重,治疗结束后处死裸鼠取出瘤体称重,观察对荷结肠癌HT29干细胞裸鼠的治疗后影响,RT-PCR法检测信号通路关键基因的表达水平。各组治疗结束后,槐耳组、DC-CIK组、联合治疗组荷结肠癌HT29干细胞裸鼠的瘤质量明显低于对照组,联合治疗组又明显低于槐耳组和DC-CIK组,其中,联合治疗组抑瘤率可达46.77%。在信号通路关键基因的表达水平变化方面,联合治疗组与DC-CIK组、槐耳组相比,PI3K/Akt通路中关键基因PI3KR1和Akt,Wnt/β-catenin通路中关键基因Wnt1,CTTNB1,Notch通路中关键基因Notch1,Notch2,Notch3的mRNA表达均有所下调。不同治疗方法对结肠癌HT29细胞干细胞瘤裸鼠治疗效果中,槐耳联合DC-CIK组效果最佳,为临床治疗结肠癌提供了新思路。
- 孙雯雯窦金霞张琳乔丽葵沈娜高文远
- 关键词：DC-CIK槐耳
- 不同方式诱导的树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对荷结肠癌HT29细胞干细胞瘤裸鼠免疫治疗的研究被引量：1
- 2016年
- 目的比较不同方式诱导的树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK细胞)对荷结肠癌HT29细胞干细胞瘤裸鼠的免疫治疗效果及其安全性的研究。方法建立BALB/c裸鼠结肠癌干细胞模型,随机分为6组,每组3只裸鼠:空白对照组、DC-CIK组(D组)、HT29细胞干细胞全细胞裂解液-DC-CIK组(L-D组)、HT29细胞干细胞RNA-DCCIK组(R-D组)、DC-CIK联合化疗5-Fu组(F-D组)和化疗5-Fu组。其中D组、L-D组、R-D组和F-D组裸鼠在肿瘤干细胞接种4 d后通过尾静脉注射1×106个DC-CIK细胞给予治疗,每周2次,共3周;5-Fu组和F-D组在裸鼠给予DC-CIK治疗前1天通过尾静脉注射50 mg/kg剂量的5-Fu化疗药物,每周1次,共3周;空白对照组以等体积生理盐水代替。各组裸鼠在治疗3周期间每2天测量瘤体大小及裸鼠体重,治疗结束后处死裸鼠取出瘤体称重,绘制裸鼠生长曲线,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测蛋白磷酸化(AKt)信号通路中关键原癌基因c-Myc表达水平。结果各组治疗结束后,比较各组瘤体生长速率,L-D组
- 孙雯雯崔晓旭窦金霞乔丽葵沈娜高文远
- 关键词：C-MYC
- CD133作为结肠癌HT29细胞系干细胞特异性生物标志的研究被引量：3
- 2016年
- 目的研究CD133作为结肠癌HT29细胞系干细胞特异性生物标志的可行性,为治疗结肠癌提供新的靶点及思路。方法克隆形成试验于6孔板中按浓度梯度各接种50、100、200个经磁珠分选的CD133＋或CD133-结肠癌HT29细胞,培养2~3周至肉眼可见的细胞克隆时计数克隆数并计算克隆形成率;经磁珠分选的CD133＋或CD133-HT29细胞接种于BALB/C裸鼠侧腹部皮下,观察裸鼠成瘤情况,绘制裸鼠生长曲线。HE染色观察病理学变化。提取瘤体组织RNA,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CD133表达。成瘤率的比较应用Fisher’s Exact Test。结果克隆形成试验中,CD133＋HT29细胞在各接种密度下的克隆形成率分别为65.32%±3.56%、78.01%±3.79%、91.23%±4.23%;CD133-分别为20.05%±2.51%、35.19%±2.94%、44.33%±3.03%;同一接种密度下CD133＋克隆形成率明显高于CD133-,差异均有统计学意义（P〈0.05）。成瘤试验中,CD133＋HT29细胞高剂量组于第4天观察到移植瘤全部形成,HE染色呈典型结肠癌组织,RT-PCR检测到CD133表达。而等剂量的HT29 CD133-细胞至第5周仍无明显移植瘤形成。结论在结肠癌HT29细胞系中CD133可以作为鉴定肿瘤干细胞的特异性生物标志,为后续试验研究奠定基础。
- 孙雯雯崔晓旭窦金霞刘子艳金健梁佩芬乔丽葵高文远
- 关键词：结肠癌干细胞生物标志物
- 悬浮培养法富集结肠癌肿瘤干细胞的研究被引量：4
- 2015年
- 目的采用悬浮培养法从人结肠癌细胞HT29中富集结肠癌干细胞,为进一步研究奠定基础。方法 HT29细胞悬浮培养使用添加多种因子的无血清培养基,显微镜下观察微球规则后,胰酶消化,制备单细胞悬液进行传代;用双苯酰亚胺33342荧光染料检测HT29细胞中侧群细胞的比例;采用流式细胞术检测CD133的表达;免疫印迹法(Western blotting)检测ALDH1A1的表达;克隆形成试验检测HT29微球的克隆形成能力。结果 HT29细胞中侧群细胞含量为3.45%±0.05%,经过维拉帕米阻断后,HT29中侧群细胞比例明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);具有CD133和ALDH1A1表达阳性的细胞,表明存在结肠癌干细胞亚群。HT29细胞悬浮培养24 h,单个细胞以出芽的方式分裂,72 h可见细胞微球体积逐渐增大,7 d细胞团致密微球形态规则,形成漂浮的球体。HT29细胞微球ALDH1A1蛋白表达水平(1.98±0.41)和CD133+表达(76.04%±4.73%)明显高于常规培养的HT29细胞(分别为1.09±0.32、45.38%±10.65%),差异均有统计学意义(P<0.05);HT29细胞微球的克隆形成率(66%±6%)明显高于常规培养的HT29细胞(18%±6%),差异有统计学意义(P<0.01),表明结肠癌干细胞富集率达70%左右。结论悬浮培养法富集结肠癌干细胞操作简便、相对成本较低、便于掌握,培养基组成和传代次数是影响富集效果的关键。
- 于杰崔晓旭孙雯雯庞华
- 关键词：结肠癌肿瘤干细胞
