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棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2002年; 根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物 ,以棉铃虫 (Helicoverpaarmigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板 ,利用RT PCR ,分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶 (HaT)基因的cDNA序列。分析表明该cDNA序列的开放阅读框为 6 96bp ,编码一个由 2 31个氨基酸残基组成的多肽 ,推测的氨基酸序列具有His57、Asp10 2 、Ser192 组成的电荷中继网 ,决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189,底物结合部位的Gly2 16和Gly2 2 6残基 ,及其它胰蛋白酶结构上的保守区域。氨基酸序列同源性比较表明 :HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性 ,同源性在 4 4 %～ 79%之间。为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因 (hat)编码产物的活性 ,将其插入原核表达载体 pGEX4T 3和 pET2 3b中 ,并在大肠杆菌中进行了诱导表达 ,结果表明 ,GST HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达 ,非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性。; 常团结陈蕾路子显陈宛新孟昆朱祯; 关键词：棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶酶活性

有效去除农杆菌和籼稻转化系统优化被引量：19: 2003年; 为了提高根农杆菌籼稻转化效率 ,将修饰的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因sck和潮霉素磷酸转移酶基因hpt分别置于紧密相连的 2个T -DNA上 ,构建载体 pCDMARUSCK -HPT ,电激法将表达载体转化农杆菌LBA4 40 4获得工程菌。比较了提门叮和国产噻孢霉素对工程菌LBA4 40 4的抑制效果 ,试验得出提门叮在 5 0 0mg/L以内比噻孢霉素能更有效地去除水稻细胞中的农杆菌 ,而且低浓度条件下 (2 5 0mg/L)就能有效地抑制工程菌LBA4 40 4 ,并且有利于水稻转化细胞成功地再生植株。确立了工程菌LBA4 40 4菌液浓度OD值 0 8,浸染时间 5min为明恢 86合适的转化参数。在此基础上 ,采用优化的农杆菌介导法转化杂交籼稻优良恢复系明恢 86 ,获得转基因植株 12 7个克隆 ,转化效率 4 5 %。; 曾千春李旭刚马炳田陈松彪徐鸿林孟昆魏晓丽朱祯; 关键词：籼稻农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因

cp基因的修饰引起转基因的沉默及其介导的PVX抗性被引量：8: 2003年; 将马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)外壳蛋白(coat protein,CP)基因(cp)编码序列中植物偏爱密码子替换成稀有同义密码子,并将此修饰的外壳蛋白基因(cpm)及未修饰外壳蛋白基因(cp)分别置于CaMV 35S启动子后,构建植物表达载体,并用农杆菌介导转化烟草。Northern杂交及Run on实验结果表明,转cpm基因烟草比转cp基因烟草发生转录后基因沉默(PTGS)的频率明显增高(从6.25％增至35％),并且对人工接种的PVX病毒抗性显著提高。以上结果表明,基因中密码子的替换可以明显提高转基因植株的病毒抗性。; 冯德江刘翔孟昆廖立力魏晓丽徐鸿林朱祯; 关键词：CP基因马铃薯X病毒外壳蛋白病毒抗性植物病毒

菊芋、水稻植物质体ATP/ADP转运蛋白基因的鉴定、表达行为及遗传转化: 淀粉生物合成途径中的限速步骤是由ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)催化1-磷酸葡萄糖与ATP生成ADP-葡萄糖的合成反应。质体ATP/ADP转运蛋白(AAT)是定位于质体内膜上反向转运ATP/ADP的跨膜蛋白，是为...; 孟昆; 关键词：菊芋水稻淀粉合成转运蛋白蛋白基因; 文献传递

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孟昆