张崇文
- 作品数：7 被引量：38H指数：4
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- 大黄鱼主要弧菌病的免疫预防研究
- 于涟毛芝娟张崇文钱荣华褚武英魏永伟吴雄飞
- 2008年3月29日，浙江大学在杭州组织有关专家对动物科学学院承担的浙江省科技厅重点项目《大黄鱼弧菌病的免疫预防研究》进行了鉴定。鉴定委员会听取了该项目的工作总结报告、技术总结报告、科技查新报告等，审阅了项目相关技术资料...
- 关键词：
- 关键词：大黄鱼
- 大黄鱼三种病原弧菌外膜蛋白交叉保护性抗原筛选被引量：5
- 2012年
- 弧菌是海水养殖环境中常见的条件性致病菌,弧菌病的暴发给水产养殖业造成了严重损失。鉴于水生动物尤其是鱼类弧菌病的发生常常是多种(血清型或亚种)弧菌的混合感染,筛选具有潜在的交叉保护性蛋白抗原,作为制备多价疫苗或联合疫苗的侯选成分具有重要意义。文中从患病大黄鱼中分离到8株弧菌,经生理生化和分子生物学鉴定分别为6株哈维氏弧菌Vibrio harveyi,1株溶藻弧菌Vibrio alginolyticus和1株副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus。选择典型的不同种的弧菌为代表,提取其外膜蛋白,经SDS-PAGE和Westernblotting分析,确定它们大约在45 kDa、35 kDa、22 kDa处出现了3条共同的免疫印迹条带,表明它们很有可能含有共同的能够彼此交叉保护的抗原。利用双向电泳和免疫印迹相结合的方法,借助于MALDI-TOF-MS质谱分析技术,发现溶藻弧菌V.alginolyticus的一种功能未知的孔蛋白(Porin,GenBank Accession No.ZP_01260407)和副溶血弧菌V.parahaemolyticus的一种麦芽糖孔蛋白的前体蛋白(Maltoporin precursor,GenBank AccessionNo.NP_801154)能够和哈维氏弧菌V.harveyi全菌多抗产生免疫反应,表明这两种蛋白可以作为3种弧菌的交叉保护性抗原,以此制备的疫苗可望对3种弧菌的感染产生交叉保护作用。
- 张崇文毛芝娟于涟
- 关键词：弧菌外膜蛋白
- 大黄鱼α-珠蛋白cDNA的克隆及其特性分析被引量：5
- 2005年
- 采用3'末端快速扩增法,首次从大黄鱼中克隆到564bp的血红蛋白α亚基cDNA。该序列包含435bp的开放读码框和126bp的3'末端非编码区,编码144个氨基酸的多肽。计算其可能的相对分子质量为15 930D,等电点为9.27,推导的氨基酸序列与其它13种鱼及人血红蛋白α亚基进行同源性比较,其同源性在35.7%￣70.3%之间,它与同属真口鱼纲的草鱼、大西洋鲑鱼、金鱼、虹鳟、金枪鱼、电鳗等的同源性较高,而与肉鳍鱼纲的肺鱼及板鳃纲的鲨鱼的同源性较低,而且发现该序列在CD5(第48位)处插入了一个独特的甘氨酸残基,在近端与血红素结合的F8(第90位)的组氨酸高度保守。
- 褚武英于涟毛芝娟张崇文钱荣华
- 关键词：大黄鱼珠蛋白克隆
- 大黄鱼哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆与序列分析
- 目的克隆大黄鱼哈维氏弧菌(Vibrio hatveeyi)外膜蛋白基因OmpK,对其进行序列分析鉴定,为进一步研究其在大黄鱼弧菌病免疫预防中的作用奠定基础。材料哈维氏弧菌由宁波市水产研究所毛芝娟分离自象山港海水网箱养殖患...
- 张崇文于涟毛芝娟
- 文献传递
- 溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析被引量：4
- 2007年
- 铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。
- 钱荣华于涟毛芝娟褚武英张崇文
- 关键词：溶藻弧菌克隆
- 哈维氏弧菌外膜蛋白（OmpK和GAPDH）免疫原性研究及主要海水病原弧菌外膜蛋白交叉保护性抗原筛选
- 海洋弧菌是海水环境中普遍存在的一种革兰氏阴性细菌，其中某些种类是大黄鱼等海水养殖动物细菌性溃疡病的主要病原菌。鉴于滥用抗生素所造成的药物残留、细菌耐药性等不良后果，大黄鱼弧菌病的防治不得不从以化学药物治疗为主转向免疫预防...
- 张崇文
- 关键词：哈维氏弧菌溶藻弧菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶
- 文献传递
- 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达被引量：21
- 2006年
- 根据哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计一对引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,从分离自患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约800bp的序列。将其克隆到pGEMTeasy载体,测序结果证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因。用PCR方法去除其信号肽序列,定向克隆到原核表达载体pGEX4T2构建重组表达质粒pGEX4TOmpK。IPTG诱导后能够在大肠杆菌BL21中高效表达分子量约为53kD的GSTOmpK融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清。Westernblotting分析表明,它与从哈维氏弧菌中提取的约27kD的外膜蛋白能够发生特异反应,提示外膜蛋白OmpK可能是哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一。
- 张崇文于涟毛芝娟褚武英钱荣华
- 关键词：哈维氏弧菌外膜蛋白原核表达
