曾宁
- 作品数：9 被引量：38H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 输注脾细胞建立输血相关的移植物抗宿主模型被引量：3
- 2006年
- 目的探讨输注同种脾细胞建立小鼠输血相关的移植物抗宿主(TA-GVHD)模型及其特点。方法分离C57BL/6(H-2b)脾细胞,分别经静脉输注给Balb/c(H-2d)裸鼠与F1代(C57BL/6×Balb/c H-2b/d),建立输血相关的移植物抗宿主模型。活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(5,6-carboxyfluorescein diacetate succini midyl ester,CFSE)标记供者脾细胞,通过流式细胞仪分析供者细胞在受者体内的增殖;免疫组化分析供者脾细胞survivin的表达;检测Balb/c裸鼠体内抗供者抗体及IL-10浓度;分析皮肤、小肠、肝脏的病理变化。结果输注同种脾细胞成功建立急性TA-GVHD模型。受者脾脏及外周可以检测到标记后增殖的供者细胞。小鼠的病理改变主要出现在肝脏,浸润细胞早期表达survivin。小肠及皮肤未见明显的病理改变。TA-GVHD裸鼠第7天IL-10、抗-Balb/c显著升高。结论输注同种脾细胞可以建立TA-GVHD模型,并具有简单、快速、稳定的特性,为诊断、治疗GVHD提供了良好的模型。
- 陈必成昌盛向芙莉郭晖唐莉金昊曾宁陈忠华
- 关键词：淋巴细胞
- 全耳再造手术方式的选择与思考
- 目的探讨耳部扩张皮瓣覆盖肋软骨支架全耳再造及颞浅筋膜瓣翻转覆盖Medpor支架全耳再造的临床效果及并发症情况。方法 2000-2010年我科全耳再造术598例,其中肋软骨支架再造(肋软骨组)525例,Medpor支架再造...
- 邓裴叶子荣黄立曾宁徐逸唐泓波曹玮吴毅平
- 文献传递
- 新型器官保存液抗脐静脉内皮细胞凋亡作用的研究
- 2007年
- 由于供者器官在获取、保存和移植过程中难以避免的会遭遇冷缺血、热缺血及缺血再灌注损伤，这将影响供者血管内皮细胞的生存状态。缺血时间过长及器官保存液都会启动血管内皮细胞凋亡基因，引起血管内皮的损伤，从而导致移植物功能恢复延迟，甚至原发性移植物无功能，并目可缩短移植物的存活时间，引起慢性移植物功能丧失。
- 曾宁徐逸胡涛左利群周鸿敏陈忠华
- 关键词：器官保存液凋亡作用细胞凋亡基因慢性移植物
- 含人p27基因的重组腺病毒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的:构建并鉴定含有人p27基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP;酶切、PCR鉴定重组腺病毒质粒;利用293细胞包装重组腺病毒载体PAd-p27-EGFP,通过荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:经酶切和PCR鉴定,成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP,利用脂质体转染人293细胞后,转染腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP可见EGFP表达和细胞致病效应(CPE)。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的Flag-p27和EGFP基因的腺病毒载体,为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功之间的关系,并为寻找慢性移植物失功的基因治疗的途径奠定基础。
- 徐逸朱舟吴柯陈曦林何文涛曾宁陈忠华
- 关键词：P27腺病毒细胞周期慢性移植肾失功
- 转化生长因子β_1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响被引量：11
- 2007年
- 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。方法:以丝裂霉素处理的Balb/C(H-2d)小鼠脾细胞为刺激细胞,羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记的C57BL/6(H-2b)小鼠T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养(MLC)。分别设立对照组(TGF-β10 ng/ml)、低浓度组(TGF-β11ng/ml)、中浓度组(TGF-β15 ng/ml)和高浓度组(TGF-β120 ng/ml)。MLC结束后利用Alamar Blue检测T细胞增殖活性,流式细胞仪检测CD3、CD25表达水平。同时设立白细胞介素-2(IL-2)组(TGF-β15ng/ml+IL-2 100U/ml),以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。结果:TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度,而且随着TGF-β1剂量加大,免疫抑制能力增强。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时,也可使CD25+T细胞比例上调,但并无明显的剂量依赖性。加入外源性IL-2后,T细胞增殖活性增强,同时CD25+T细胞比例降低。结论:TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖,并使CD25+T细胞比例增加,而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能,下调CD25+T细胞比例,说明外源性IL-2可以影响TGF-β1的生物学效应。
- 袁劲吴轲向芙莉曾宁周鸿敏陈忠华
- 关键词：转化生长因子Β1白细胞介素-2CD25
- NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析
- 2008年
- 目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。
- 徐逸朱舟吴轲曾宁田学俾陈忠华
- 关键词：双顺反子P27基因
- 沙利度胺对小鼠皮肤移植的影响
- 2006年
- 目的观察沙利度胺对小鼠皮肤移植物存活及生长情况的影响,探讨沙利度胺在抗同种异体排斥反应中的作用。方法建立Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠的皮肤移植模型,将模型小鼠随机分为3组,每组12只,对照组腹腔注射吐温-80溶液+0.9%氯化钠注射液(1∶999),200 mL.kg-1.d-1;环孢素A组腹腔注射环孢素A,10 mg.kg-1.d-1;沙利度胺组腹腔注射沙利度胺,200 mg.kg-1.d-1。分别于实验第7,9,11天取小鼠皮肤移植物进行病理检测,观察各组移植物平均存活时间。结果对照组小鼠移植物平均存活时间为8.2 d,环孢素A组平均为13.5 d,沙利度胺组平均为13.2 d,环孢素A组与沙利度胺组均明显高于对照组(P<0.05),环孢素A组与沙利度胺组之间差异无显著性(均P>0.05)。第7,9,11天各组移植皮片病理检测结果显示,随着时间的延长,各组均可见移植皮下淋巴细胞浸润,腺体及毛细血管破坏逐渐加重;其中对照组皮下组织破坏严重,沙利度胺组皮下组织破坏明显减轻,环孢素A组皮下组织破坏最轻。结论沙利度胺能延长Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠皮肤移植物的存活时间,具有一定的临床应用前景。
- 曾宁唐莉袁劲吴柯周洁胡涛陈忠华
- 关键词：沙利度胺排斥反应
- TGF-β1诱导CD4^+CD25^-T细胞分化为CD4^+CD25^+调节性T细胞被引量：20
- 2007年
- 目的研究TGF-β1诱导CD4+CD25+调节性T细胞分化的能力及其相关机理。方法①利用丝裂霉素处理的Balb/C裸鼠脾细胞(同种抗原)刺激C57BL/6小鼠T细胞,同时给予TGF-β1予以干预(按TGF-β1剂量不同设立4组:对照组,低浓度组,中浓度组和高浓度组),共同培养5天后,用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞比例;同时用RT-PCR检测培养细胞中Foxp3的表达水平。②在第一部分实验基础上,通过MACS分离获取C57BL/6小鼠CD4+CD25-T细胞,用同种抗原刺激后,给予TGF-β1干预,培养5d后分离CD4+CD25+T细胞,利用混合淋巴细胞培养系统检测其抑制淋巴细胞增殖的能力。结果T细胞经同种抗原刺激后,在中、高浓度TGF-β1诱导下CD4+CD25+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。TGF-β1可直接诱导CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+T细胞,转化后的CD4+CD25+T细胞可有效抑制淋巴细胞增殖。结论TGF-β1可诱导CD4+CD25-T细胞转化为CD4+CD25+Treg,促进其表达Foxp3,并能够抑制淋巴细胞增殖。
- 袁劲吴轲徐逸曾宁陈忠华
- 关键词：TGF-Β1FOXP3调节性T细胞
- 血清蛋白质指纹图谱构建及对慢性移植物肾病病人的早期诊断意义被引量：4
- 2006年
- 目的用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)检测慢性移植物肾病(CAN)患者血清蛋白质图谱,构建CAN血清蛋白质指纹图谱及其对该病的早期诊断作用。方法用SELDI-TOF-MS及弱阳离子交换芯片(CM10)检测24例移植肾功能完全正常的长期存活者(LS)和15例CAN患者的血清蛋白质图谱,并运用软件判别和分析处理数据,筛查特异的蛋白质分子标志物。结果对每份血清样本,质谱系统产生78个有意义的蛋白质峰,18个蛋白质的差异在两者间具有统计学意义(P<0．05),6个蛋白质(质荷比2476．0,3078．7,3190．5,4076．5,4506．0,6178．4)有极其显著差别(P<0．01),以质荷比3078．7为单一分子标志物可区别LS和CAN患者(P=0．0001),它在前者高表达,在后者低表达,其诊断CAN时的敏感性为87．5％,特异性为81．8％,其诊断作用绩效比为0．307。结论SELDI-TOF-MS构建的血清蛋白质指纹图谱在诊断CAN时具有较高的价值。
- 周绍棠阎冀焕杨成曾宁吴轲陈忠华
- 关键词：肾移植肾病血清蛋白质指纹图谱
