杨敏
- 作品数：23 被引量：50H指数：4
- 供职机构：江苏大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人T-bet基因转染U937探讨T-bet对白血病细胞的影响被引量：1
- 2007年
- 目的探讨人T-bet基因在白血病细胞株U937中的表达及其对IFN-γ分泌的影响,寻求通过免疫调节改善白血病患者机体免疫状态的可能性。方法采用电穿孔技术将重组人pIRES-eGFP-Tbet(pIRES-eGFP-hTbet)质粒转染U937细胞,RT-PCR检测转染前后U937细胞T-bet的mRNA水平;westen-blot检测表达的T-bet蛋白;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。试验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照。结果电穿孔转染U937细胞后,在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞(转染细胞),其荧光细胞阳性率80%左右,提示转染成功;转染T-bet的U937细胞,分别经RT-PCR及westen-blot检测到T-bet的mRNA和表达的蛋白,而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞,均未见目的基因的转录和蛋白表达;T-bet转染细胞的培养上清中含有较高水平的IFN-γ,而转染前及对照质粒转染的细胞IFN-γ的分泌水平极低。结论通过电穿孔方法成功将人T-bet基因转染到白血病细胞株U937中,并检测到大量IFN-γ的产生。T-bet是免疫应答调节的重要转录因子,对其研究将有助于进一步探讨T-bet基因或其表达产物作为Th1应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性。
- 许小朋王锁英杨敏邱谷风王胜军邵启祥许化溪
- 关键词：基因转染T-BET干扰素ΓU937
- 人T-bet基因克隆及其功能的初步研究
- 人类转录因子T-bet/(T-box expressed in T cells，T-bet/)基因，作为Th1细胞特异性的转录因子，在Th1细胞分化中诱导IFN-γ分泌，上调IL-12Rβ2的表达，同时抑制IL-4的表达...
- 杨敏
- 关键词：T-BET单克隆抗体基因克隆
- 文献传递
- 人GITR基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2007年
- 目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致。结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 仝佳王胜军毛朝明杨云良陈君杨敏
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞
- 小鼠FoxP3基因腺相关病毒的制备与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:构建携带小鼠FoxP3基因的重组腺相关病毒,并检测其在NIH3T3细胞的表达情况。方法:将FoxP3通过内部核糖体进入位点(IRES)与报告基因增强型绿色荧光蛋白连接,构建同时含有目的基因和报告基因的重组腺相关病毒(rAAV)表达质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染HEK293细胞,收获并通过肝素亲和层析法纯化病毒,并对病毒纯度和滴度进行鉴定。利用携带FoxP3基因的重组病毒体外感染小鼠NIH3T3细胞,体外观察感染效率和目的基因转录情况。结果:包装成功的rAAV/FoxP3经纯化后获得了高纯度的rAAV/FoxP3,实时定量PCR检测rAAV/FoxP3的病毒滴度达到5.0×1012vg/mL,体外感染NIH3T3细胞,流式细胞术测定感染效率可达92.88%,实时PCR测定细胞内存在高水平FoxP3mRNA。结论:获得携带FoxP3-IRES-EGFP的rAAV,并可有效感染NIH3T3细胞,为进一步研究FoxP3的生物学功能提供了有效工具。
- 王胜军马洁马斌毛朝明仝佳杨敏邵启祥许化溪
- 关键词：FOXP3腺相关病毒免疫调节
- 人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+-IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性。结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15kD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖。结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用。
- 毛朝明王胜军仝佳马洁杨敏许小朋邱谷风唐莉邵启祥李龙许化溪
- 关键词：基因克隆原核表达重组蛋白
- 未修饰纳米SiO_2和表面修饰型纳米SiO_2对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性研究被引量：6
- 2007年
- 目的:比较未修饰纳米SiO2和表面修饰型纳米SiO2对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性。方法:通过支气管肺泡灌洗分离雄性SD大鼠肺泡巨噬细胞。未修饰纳米SiO2(M-5型)及两种表面修饰型纳米SiO2(TS-610型,TS-720型)剂量分别为0,8,40,100,200μg/cm2,用MTT实验测定对细胞活性的影响,LDH实验测定对细胞膜的损伤,TBA法测定脂质过氧化作用的程度。结果:M-5型纳米SiO2在剂量大于100μg/cm2时,各指标与对照组相比有统计学意义(P<0.05),而两种表面修饰型纳米SiO2与对照组相比均无统计学意义。结论:未修饰纳米SiO2对大鼠肺泡巨噬细胞的毒性较强,颗粒表面被修饰后其毒性明显降低,表明颗粒表面反应性在毒性机制中发挥重要作用。
- 田晓雷陈敏杨敏王胜军姜旭淦李华明谢吉民
- 关键词：纳米SIO表面修饰肺泡巨噬细胞毒性
- 人T-bet基因的表达、纯化及其多克隆抗体的制备
- 目的:利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人T-bet基因全长序列,并对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体,为进一步研究T-bet的生物学功能奠定坚实的基础。方法:利用PCR技术从克隆载体pGEM-T...
- 杨敏王锁英许小朋马洁毛朝明仝佳邱谷风胡正军王胜军邵启祥许化溪
- 文献传递
- 人AITRL基因克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。
- 毛朝明王胜军蒋茜马洁杨敏仝佳许小朋邱谷风唐莉邵启祥许化溪
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR人脐静脉内皮细胞
- 人T-bet基因的克隆及序列分析被引量：5
- 2006年
- 目的:克隆人T-bet基因全长编码区的cDNA,并进行鉴定和测序分析,为从转录水平研究Th1/Th2平衡及其与免疫相关性疾病发生发展的关系奠定基础。方法:采用RT-PCR方法,从人外周血淋巴细胞获得T-bet基因的cDNA;连接至pGEM-Teasy载体,导入大肠杆菌DH5α并选择阳性克隆;应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。结果:扩增得到的T-bet基因cDNA全长1 670 bp,包括编码区1 607 bp,编码530个氨基酸残基,与Gen-bank中发表的序列完全一致。结论:获得了人T-bet基因的克隆,为进一步研究其生物学功能构建了基础平台,为寻找多种免疫性疾病的有效治疗提供新思路。
- 杨敏王锁英王胜军马洁毛朝明邱谷风许小朋邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET基因CDNA克隆RT-PCR
- 人T-bet基因的表达、纯化及其免疫原性分析
- 2007年
- 目的:利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人T-bet基因全长序列,并对表达产物进行纯化、免疫动物和制备多克隆抗体。方法:利用PCR技术从克隆载体pGEM-T/T-bet获得人T-bet的全长编码序列,并将其亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pT-bet;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌JM109,测序鉴定后转化M15,经IPTG 37℃诱导4 h后,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色判断以包涵体形式存在的带有6×His标签的融合蛋白(表达产物),用Ni2+-IMAC层析柱对融合蛋白进行纯化;将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备人T-bet的多克隆抗体。结果:成功表达和纯化了人T-bet,并制备了多克隆抗体,ELISA和Western blot结果显示了血清抗体的高效价(1∶100 000)和高度特异性。结论:成功构建了原核表达载体pT-bet,并在工程菌M15中获得大量表达,经纯化后获得高纯度的人T-bet蛋白,制备了效价和特异性良好的多克隆抗体,为进一步研究T-bet的生物学功能奠定了的基础。
- 杨敏王胜军王锁英许小朋邱谷风苏兆亮邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：原核表达蛋白纯化免疫原性
