浦永
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：天津医科大学基础医学院天津市生命科学中心实验室更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- PIWIL4的克隆及其抗体制备和初步应用
- 2010年
- 目的制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体，鉴定其特异性，并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法构建原核表达质粒pGEX-5X-1．PIWIL4，转化大肠杆菌BL21，PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清。以间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗体效价，Westernblot鉴定抗体特异性及检测PIWIL4在各细胞系中的表达差异，免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位。结果成功构建原核表达质粒，表达并纯化PIWIL4蛋白。免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体，ELISA检测抗体效价为1：20000，Westernblot和免疫组化确定抗体具有高度特异性，并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位。结论PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备，为进一步研究PIWIL4的生物学功能奠定了基础。
- 苏畅浦永孔鹏洲王萌刘民汤华
- 关键词：原核表达抗体肿瘤
- 人Argonaute2蛋白多克隆抗体制备及初步应用被引量：2
- 2010年
- 目的:制备人Argonaute2(Ago2)的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法:用DNAstar软件寻找抗原性高的Ago2序列区域(命名为k-Ago2),构建k-Ago2的表达质粒,转化大肠杆菌并诱导表达。融合蛋白经切胶回收纯化后免疫大白兔制备抗体。以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性及检测Ago2在细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察Ago2的细胞定位。结果:成功构建表达质粒,继而k-Ago2得以表达与纯化,免疫大白兔后得到Ago2多克隆抗体。ELISA检测抗体效价为1∶19 000,Western blot确定抗体具有高度特异性,并成功地用该抗体检测到Ago2在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。结论:Ago2多克隆抗体的成功制备,对RNAi机制的深入研究及其进一步的临床应用均具有重要价值。
- 李海芳浦永汤石明强冉汤华
- 关键词：多克隆抗体RNA干扰
- 利用基因芯片技术筛选原发性肺癌顺铂耐药与敏感相关基因
- 目的：用基因芯片技术研究原发性非小细胞肺癌中与顺铂耐药和敏感相关的基因.方法：以临床上未经化疗的原发性非小细胞肺癌标本为研究对象，应用MTT琼脂法检测化疗药物DDP对非小细胞肺癌的体外抑制率，筛选出对DDP耐药和敏感的标...
- 浦永
- 关键词：非小细胞肺癌顺铂基因芯片
- 文献传递
- RNA干扰敲减PIWIL1表达对人结肠癌细胞SW620增殖,粘附及侵袭能力影响被引量：1
- 2010年
- PIWIL1为AGO蛋白(Argonaute proteins)PIWI亚家族的成员之一,在睾丸中特异表达.其在干细胞自我更新、RNA干扰和翻译调节中起着重要的作用.本文采用实时PCR方法检测PIWI基因家族中PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4在人结肠癌SW620细胞中mRNA表达水平,首次证实了在SW620细胞中,PIWIL1相对PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4,其表达水平最高(P(0.05).构建表达针对PIWIL1的小发卡结构干扰RNA的重组质粒,并用Western印迹验证其达到较高的干扰效率.用脂质体将重组质粒转染入SW620细胞中,通过MTT实验、集落形成实验、细胞聚集实验及细胞侵袭转移实验,分别观察到其可抑制SW620细胞的生长、增殖、侵袭转移能力,增强了SW620细胞的粘附能力.提示PIWIL1可能在结肠癌发生、发展过程中发挥作用.
- 任超逸吴海东浦永汤石明李欣刘民汤华
- 关键词：结肠癌SW620细胞RNA干扰
- 人高迁移率族B1蛋白原核表达、纯化及抗体制备和初步应用
- 2008年
- 目的:原核表达并纯化人高迁移率族B1蛋白(HMGB1)免疫日本大耳白兔制备其抗体。方法:构建原核表达质粒pRsetA2-HMGB1,转化大肠杆菌BL21(DE3),HMGB1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过Ni2+-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清。以间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果:成功构建原核表达质粒,表达并纯化HMGB1蛋白。ELISA检测抗体效价为1∶16000以上,Western blot和免疫荧光染色确定抗体具有高度特异性。结论:HMGB1蛋白和抗体的成功制备,为下一步研究将HMGB1作为肿瘤等疾病治疗的新靶点奠定基础。
- 田爽刘民李欣浦永吴海东汤华
- 关键词：HMGB1原核表达抗体癌症
