熊小芳
- 作品数：7 被引量：35H指数：3
- 供职机构：汕头大学医学院生殖医学研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 金黄地鼠睾丸与附睾中HBV感染精子细胞的研究
- 背景:流行病学调查表明,我国慢性无症状HBV携带者可能超过1.2亿,累计现行和既往资料,我国约有一半以上人口受HBV感染。HBV通过①输血,②体液(唾液、阴道分泌物、母乳、精液等),③宫内感染,④细胞、组织、器官移植等途...
- 熊小芳黄天华谢庆东
- 文献传递
- 金黄地鼠睾丸与附睾中HBV感染精子细胞的研究
- 流行病学调查表明,我国慢性无症状HBV携带者可能超过1.2亿,约有一半以上人口受HBV感染.笔者为进一步探讨HBV父缨间垂直传播的机制建立实验动物模型.
- 熊小芳黄天华谢庆东
- 关键词：HBV睾丸附睾
- 文献传递
- 精子携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达被引量：16
- 2005年
- 背景与目的:研究乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)DNA在早期胚胎中能否复制与表达,探讨HBV经雄性生殖细胞垂直传递的可能性。材料与方法:成熟雄鼠麻醉后双侧睾丸注射经脂质体DOSPER包裹的HBV质粒,手术后雄鼠与超排雌鼠合笼交配,用荧光原位杂变(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)分别检测单细胞胚和二细胞胚间期核中HBVDNA的存在与复制,用逆转录聚含酶链反应(Reversetranscriptase_polymerasechainreaction,RT_PCR)和免疫荧光方法检测HBV基因在二细胞胚胎中的表达。结果:在单细胞胚和二细胞胚间期核内发现HBVDNA阳性杂交信号,RT_PCR可以扩增出HBx基因的特异条带,免疫荧光也可见到HBsAg阳性信号。结论:HBVDNA进入雄性生殖细胞后,可以整合到宿主基因组内,通过自然受精随精子进入卵母细胞,并在早期胚胎中复制与表达。提示HBV有可能通过雄性生殖细胞进行垂直传递。
- 熊小芳黄天华谢庆东王晓梅陈桂兰
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA早期胚胎
- 卵母细胞携带的HBV DNA在小鼠早期胚胎中的复制与表达被引量：25
- 2005年
- 背景与目的:研究卵母细胞携带的乙肝病毒(HepatitisBvirus,HBV)DNA能否在小鼠早期胚胎中复制与表达,为HBV经卵垂直传播提供科学证据。材料与方法:手术暴露昆明小鼠卵巢,将pBR322_HBV重组质粒DNA注射到昆明小鼠卵巢内,1个动情周期(4d)后进行超排卵并与正常雄性小鼠合笼,收集二细胞胚,用荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)检测HBV在早期胚胎内的整合和复制;用逆转录聚含酶链反应(Reversetranscriptase_polymerasechainreaction,RT_PCR)和免疫荧光试验检测HBV基因在早期胚胎的表达。结果:FISH在小鼠二细胞胚细胞核上检测到HBVDNA阳性杂交信号,RT_PCR和免疫荧光试验在二细胞胚内检测到HBxmRNA和HBsAg。结论:HBVDNA进入雌性生殖细胞后,可以整合到宿主基因组内,通过自然受精随卵母细胞进入胚胎,并能在胚胎中复制与表达。提示HBV有可能通过雌性生殖细胞进行垂直传递。
- 陈桂兰黄天华谢庆东王晓梅熊小芳
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA卵母细胞小鼠胚胎
- 一种转导人原代肝细胞的LV-HBx诱导调控表达系统
- 2017年
- 目的:建立一种在人原代肝细胞中可诱导调控表达HBx的慢病毒表达系统,以便研究HBx生物学特性及其对人肝细胞功能的影响。方法:采用Tet-on系统构建四环素诱导调控的慢病毒-HBx表达系统,并用流式细胞术对其进行优化以达到较高的表达效率。应用该系统制备LV-HBx和LV-rtTA重组慢病毒共同转导肝癌细胞系HepG2和人原代肝细胞后,再加入强力霉素(Dox)诱导调控HBx表达,并采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测人原代肝细胞中肿瘤转移相关基因1(MTA1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、转化生长因子β1(TGFB1)、上皮型钙黏附素1(CDH1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)mRNA的表达水平。结果:重组慢病毒-HBx表达系统构建成功,LV-HBx和LV-rtTA重组慢病毒用量配比经过优化,采用1∶1或2∶1转导后可达到较高的表达效率,Dox诱导产生的表达HBx的阳性细胞率分别为67.3%和66.7%。应用该系统将HBx基因转导入肝癌细胞系HepG2和人原代肝细胞后,可用Dox进行诱导调控HBx的高效表达。其中人原代肝细胞中Dox诱导组的HBx表达水平约为对照组(不加Dox诱导)的45倍,经qPCR检测高表达HBx的人原代肝细胞中MTA1、VEGFA、TGFB1 mRNA的表达水平较对照组均显著升高(P均<0.05),而CDH1、IGFBP3 mRNA表达水平显著降低(P均<0.05)。结论:成功建立了转导人原代肝细胞的LV-HBx四环素诱导调控表达系统,该系统的建立为研究HBx等乙肝病毒基因对人原代肝细胞的影响打下了基础。
- 周小玲熊小芳谢庆东孙平楠
- 关键词：HBX慢病毒载体
- 脂质体介导的精原细胞基因转移被引量：3
- 2006年
- 背景与目的:研究脂质体介导pDsRed2-N1报告基因转染精原细胞的有效性。材料与方法:在体外、体内用脂质体(DOSPER)为载体,介导红色荧光蛋白(DsRed2)基因转染供体小鼠精原细胞,转染的精原细胞经分离、纯化后移植到经白消安处理耗尽生殖细胞的受体小鼠生精小管内。结果:体外转染精原细胞,DsRed2表达效率为20%,体内转染表达效率为8%,体外转染基因表达效率高于体内转染(P<0.01)。移植后6周,受体睾丸冰冻切片上可见表达红色荧光蛋白的精原细胞。结论:脂质体可介导外源基因转染小鼠精原细胞,结合被转染精原细胞移植有可能为研究精子发生机理和生产转基因动物提供一条简便的途径。
- 杨兴坤黄天华谢庆东熊小芳吴丛梅
- 关键词：精原细胞脂质体红色荧光蛋白转基因
- 精子介导的乙肝病毒基因在早期鼠胚中的复制与表达
- 【背景与目的】 乙型肝炎是危害人类健康的全球性疾病。我国是该病高发区,乙肝病 毒携带者约占全国人口的10%。由于该病危害性大,流行面广,因此其传播途径、发病 机理及诊疗手段的研究一直...
- 熊小芳
- 关键词：精子早期胚胎HBV
- 文献传递
