王方
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ApoE4在U87细胞中可增加GSK-3β的表达及Tau的磷酸化
- 2016年
- 目的探讨Apo E4与GSK-3β及Tau蛋白超磷酸化之间的关系,为研究Apo E4在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制提供实验依据。方法分别将对照质粒载体p IRES-EGFP、重组质粒Apo E4/p IRES-EGFP和Apo E3/p IRES-EGFP转染U87脑星形胶质细胞系,用免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白水平的变化。在U87细胞中转入干扰Apo E表达的si RNA(Apo E-si RNA)及对照si RNA,检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白的改变情况。将质粒转染前后及si RNA干扰前后目标蛋白的含量或磷酸化水平的改变进行统计学比较。结果与对照组相比,GSK-3β蛋白水平的相对值分别为:Apo E4组(1.819±0.130,P<0.01,n=3)和Apo E3组(1.336±0.130,P<0.01,n=3),差异具显著差异,且Apo E4和Apo E3组比较也具有显著性差异(P<0.01)。同样,相对于对照组,Apo E4和Apo E3组的磷酸化Tau蛋白(p-Tau)的相对值分别为1.587±0.027(P<0.01,n=3)和1.436±0.026(P<0.01,n=3),均具显著差异;且Apo E4组较Apo E3组的促进作用更强,两组间具显著差异(P<0.01)。此外,用Apo E-si RNA干扰后,U87细胞中GSK-3β的表达和p-Tau水平均较对照组显著降低,分别为0.544±0.058(P<0.001,n=3)和0.474±0.060(P<0.01,n=3)。结论 AD危险因子Apo E4可能通过上调GSK-3β的表达而促进Tau的磷酸化。
- 何颜结卫佩如伍巧燕张馨宇张兴梅刘晓加王方
- 关键词：TAU蛋白糖原合酶激酶3Β
- 肿瘤科护士化疗相关性恶心呕吐知信行现状的调查研究
- 2024年
- 目的调查肿瘤科护士对化疗相关性恶心呕吐(CINV)知识、态度和行为的现状。方法采用便利抽样方法,于2021年7月21日至2021年8月31日对广东省3所三甲医院(中山大学肿瘤防治中心、广东省人民医院及广东省第二人民医院)共218名肿瘤科护士进行问卷调查,问卷内容包括一般人口学资料(医院性质、性别、年龄、学历、职称、工作年限等)和CINV知信行得分。采用独立样本t检验、F检验。结果肿瘤科护士对CINV知信行得分结果显示:工作年限与护士CINV知识得分有关,是否接受CINV相关教育与护士CINV知识及行为得分有关,年龄、职称与护士CINV态度得分有关,差异均有统计学意义(均P<0.05);肿瘤科护士对CINV的知识得分为(7.75±3.11)分,态度得分为(34.40±4.07)分,行为得分为(36.11±8.73)分。结论护士对CINV的知识和实践水平有待提高,鼓励和促进护士使用国际指南指导CINV评估和护理实践,为构建科学的CINV课程和实践培训体系提供有利依据。
- 黄敏清庄文行王影邱丽欢王方
- 关键词：护士知信行
- 利用噬菌体七肽库筛选获得阿尔茨海默病β-分泌酶特异性结合肽的研究
- 2019年
- 目的利用Ph.D.-C7C噬菌体七肽库进行体外筛选(biopanning),从而获得阿尔茨海默病β-分泌酶表面特异性结合肽,并鉴定其与β-分泌酶(BACE1)的结合能力。方法以BACE1(Sigma company)为包被抗原,利用噬菌体展示技术,经过连续4轮生物淘洗,随机挑选噬菌体阳性单克隆进行DNA测序并合成七肽,利用ELISA法鉴定所选七肽与BACE1结合的特异性。结果筛选出的噬菌体LPLDSPL与BACE1有较高的亲和性及特异性。结论阳性噬菌体表面展示的多肽LPLDSPL可能对阿尔茨海默病β-分泌酶产生抑制作用,为阿尔茨海默病提供新的治疗药物。
- 朱瑞刘莉金丽娟高小芳王方
- 关键词：阿尔茨海默病Β-分泌酶噬菌体展示技术多肽
- 胰高血糖素样多肽-1改善2型糖尿病大鼠的学习和记忆能力被引量：6
- 2016年
- 目的观察糖尿病治疗药物胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对糖尿病大鼠学习与记忆功能障碍的改善作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组(Normal),糖尿病模型组组(DM)和GLP-1治疗组(GLP-1)。采用高脂高糖喂养合并链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病模型。将糖尿病大鼠模型随机分为糖尿病组和GLP-1组,糖尿病组大鼠不进行治疗,GLP-1组大鼠于糖尿病成型后第25天,以经皮下埋缓释泵方式给予GLP-1(30 pmol/kg/min)治疗7 d。治疗结束后先使用Morris水迷宫实验评估各组大鼠的学习及认知能力,然后或获取大鼠大脑海马区组织,用实时定量PCR(Real-time PCR)检测认知相关基因的转录,蛋白印迹法(Western blotting)检测认知相关蛋白的表达,免疫组化检测认知相关蛋白的表达和细胞定位。结果 Morris水迷宫实验显示糖尿病组大鼠的学习和记忆功能显著下降(P<0.05),荧光定量PCR结果发现糖尿病大鼠脑内APP,BACE1,Arc,ERK1/2,PKA,PKC的基因转录升高(P<0.05),Western Blotting和免疫组化结果显示Arc蛋白分子在糖尿病大鼠中表达升高。而GLP-1处理组大鼠的学习和记忆功能比糖尿病组有显著改善(P<0.05),脑内APP,BACE1,Arc,ERK1/2,PKA,PKC基因转录表达明显减少(P<0.05),Arc表达降低。结论 GLP-1治疗能够显著改善2型糖尿病大鼠的学习与记忆功能障碍,其效果可能是通过调控细胞的PKC,PKA,ERK1/2通路,抑制Arc的表达而实现的。
- 谭照光高维鸿蔡祥胜蔡祥胜王方
- 关键词：糖尿病ARC
- 遗传密码轮——遗传密码表的另一表达方式
- 2006年
- 给出以树木年轮的方式来描述“三联体”密码子的组成以及遗传密码与氨基酸之间、氨基酸三字母代号与单字母代号之间的对应关系,被称为“遗传密码轮”。同时还提供了E.coli在蛋白质翻译过程中某些氨基酸的“偏爱”密码子。与既往使用的遗传密码表相比,遗传密码轮具有简捷、利于查看的特点,制成的电脑课件能明显提高课堂教学效果。
- 方振伟王方
- 关键词：密码子氨基酸
- 一种实用的β-分泌酶表达、纯化和活性鉴定方法
- 2015年
- 目的 探讨一种在常用真核细胞系中表达、纯化和鉴定阿尔茨海默病（AD）相关蛋白-β-分泌酶（BACE1）的方法. 方法 在从人脑基因库中获取BA CE1序列并成功扩增的基础上,将其插入带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）的表达载体pEGFP-c3中.将BACE1/pEGFP-c3重组质粒用脂质体转染至HEK293细胞中表达,再通过TALON亲和色谱法分离纯化及酶切得到BACE1蛋白.用Western blotting及荧光共振能量共振转移（FRET）法鉴定BACE1的表达和体外活性.同时将BACE1/pEGFP-c3质粒与表达淀粉样前体蛋白（APP）的重组质粒（APP/pDsRed-Monomer-N1）共转染HEK293细胞,再以Western blotting法检测BACE1切割底物APP的效果. 结果 （1）实验获得的BA CE1基因与GenBank中的序列一致.（2）活性测定表明,空白对照组、标准BACE1阳性对照组、纯化的BACE1实验组的荧光强度分别为55.013 ±3.597、2639.548±207.190和1836.629±154.195,差异有统计学意义（F=78.681,P=0.000）,其中后2组差异无统计学意义（P＞0.05）.（3）Western blotting结果显示转染的BACE1在细胞内可切割底物APP并产生CTF-APP条带. 结论 本实验方法可成功获取BA CE1基因片段并在HEK293细胞中高效表达,同时具备生物学活性,可为AD临床药物的开发提供物质基础.
- 朱瑞伍巧燕张兴梅高小芳卫佩如张馨宇王方
- 关键词：阿尔茨海默病Β-分泌酶真核细胞
- 尘螨主要变应原蛋白的IgE结合表位序列分析被引量：8
- 2011年
- 目的对屋尘螨主要变应原(Derp1)蛋白分子中与过敏病人血清特异性IgE相结合的表位序列的鉴定。进而获得基于串联表位的小分子低毒过敏原以作为新的免疫治疗剂。方法采用全蛋白序列重叠扫描法对Derp1蛋白进行全表位筛选,即合成了覆盖Derp1全蛋白222个氨基酸的31段各含15个氨基酸的多肽,且相邻肽段间有8个氨基酸的重叠。并将这些肽段按点状固相多肽合成法依顺序合成于纤维膜上。再将该膜与由数份过敏血清组成的血清池孵育,经抗人IgE-HRP二抗结合及X光片显影后对阳性点进行灰度比对及分析。结果经对X光片阳性点的比对及分析,我们确定出了Derp1过敏原蛋白中的3个强阳性表位序列。它们是位于第85～99位的氨基酸序列(表位1,Ep1),第106～120位的氨基酸序列(表位2,Ep2)及第190～204位的氨基酸序列(表位3,Ep3)。结论我们获得了Derp1中3个15肽的线性IgE结合表位(B细胞表位)序列。证实了Derp1分子中存在IgE结合的线性表位。为进一步构建T/B细胞串联表位的小分子低毒过敏原提供了物质基础。
- 钟志美郑传东王方
- 关键词：变应原屋尘螨
- 高可溶性Aβ融合蛋白的表达、纯化和鉴定
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中表达阿尔茨海默病(AD)相关肽段Aβ与具有强助溶作用的麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,从而经济有效地获得具有天然免疫原性的Aβ肽段,为深入研究AD的发病机理和治疗药物提供重要的物质基础。方法用PCR法扩增Aβ的基因片段,并将其插入到含有麦芽糖结合蛋白的融合表达载体pMAL-c2中,经测序后再将重组质粒转化入大肠杆菌TB1中进行诱导表达。经多聚麦芽糖亲和色谱的纯化获得MBP-Aβ融合蛋白。再用SDS-PAGE及Western blotting鉴定Aβ及其融合蛋白的表达和免疫原性。结果测序结果证实插入的DNA片段与Aβ序列一致。SDS-PAGE电泳显示Aβ融合蛋白被高效表达。Western blotting结果表明Aβ及其融合蛋白可被其特异性抗体识别。结论在大肠杆菌中高效表达了可溶性的Aβ融合蛋白并经纯化和酶解后获得了Aβ纯肽段,为AD病机理的研究及其病理模型的建立提供了物质基础。
- 朱瑞郑传东王方
- 关键词：阿尔茨海默病APPAΒ原核表达融合蛋白
- 多肽-2与阿尔茨海默病β-分泌酶特异性结合的研究
- 2018年
- 目的在细胞水平上鉴定多肽-2(Peptide-2)与阿尔茨海默病β-分泌酶(BACE1)结合的特异性。方法合成经过二硫键修饰的Peptide-2,采用激光扫描共聚焦显微镜术及流式细胞术鉴定Peptide-2对表达BACE1的人源胚胎肾293(HEK293)细胞的结合特异性。结果激光扫描共聚焦显微镜显示Peptide-2在表达BACE1的HEK293细胞上有高富集荧光亮点(红色荧光),流式细胞术鉴定出Peptide-2与HEK293细胞中BACE1结合的荧光强度值为102. 352,PBS对照组的荧光强度值为16. 29,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Peptide-2在细胞水平能特异结合至BACE1,为阿尔茨海默病β-分泌酶抑制剂的筛选提供了一个新的研究方向。
- 朱瑞金丽娟高小芳王方
- 关键词：阿尔茨海默病Β-分泌酶特异性结合肽
