张馨宇
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生一般工业技术更多>>
- 一种实用的β-分泌酶表达、纯化和活性鉴定方法
- 2015年
- 目的 探讨一种在常用真核细胞系中表达、纯化和鉴定阿尔茨海默病（AD）相关蛋白-β-分泌酶（BACE1）的方法. 方法 在从人脑基因库中获取BA CE1序列并成功扩增的基础上,将其插入带有增强绿色荧光蛋白（EGFP）的表达载体pEGFP-c3中.将BACE1/pEGFP-c3重组质粒用脂质体转染至HEK293细胞中表达,再通过TALON亲和色谱法分离纯化及酶切得到BACE1蛋白.用Western blotting及荧光共振能量共振转移（FRET）法鉴定BACE1的表达和体外活性.同时将BACE1/pEGFP-c3质粒与表达淀粉样前体蛋白（APP）的重组质粒（APP/pDsRed-Monomer-N1）共转染HEK293细胞,再以Western blotting法检测BACE1切割底物APP的效果. 结果 （1）实验获得的BA CE1基因与GenBank中的序列一致.（2）活性测定表明,空白对照组、标准BACE1阳性对照组、纯化的BACE1实验组的荧光强度分别为55.013 ±3.597、2639.548±207.190和1836.629±154.195,差异有统计学意义（F=78.681,P=0.000）,其中后2组差异无统计学意义（P＞0.05）.（3）Western blotting结果显示转染的BACE1在细胞内可切割底物APP并产生CTF-APP条带. 结论 本实验方法可成功获取BA CE1基因片段并在HEK293细胞中高效表达,同时具备生物学活性,可为AD临床药物的开发提供物质基础.
- 朱瑞伍巧燕张兴梅高小芳卫佩如张馨宇王方
- 关键词：阿尔茨海默病Β-分泌酶真核细胞
- ApoE4在U87细胞中可增加GSK-3β的表达及Tau的磷酸化
- 2016年
- 目的探讨Apo E4与GSK-3β及Tau蛋白超磷酸化之间的关系,为研究Apo E4在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制提供实验依据。方法分别将对照质粒载体p IRES-EGFP、重组质粒Apo E4/p IRES-EGFP和Apo E3/p IRES-EGFP转染U87脑星形胶质细胞系,用免疫蛋白印迹法(Western blotting)检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白水平的变化。在U87细胞中转入干扰Apo E表达的si RNA(Apo E-si RNA)及对照si RNA,检测p-Tau/Tau及GSK-3β蛋白的改变情况。将质粒转染前后及si RNA干扰前后目标蛋白的含量或磷酸化水平的改变进行统计学比较。结果与对照组相比,GSK-3β蛋白水平的相对值分别为:Apo E4组(1.819±0.130,P<0.01,n=3)和Apo E3组(1.336±0.130,P<0.01,n=3),差异具显著差异,且Apo E4和Apo E3组比较也具有显著性差异(P<0.01)。同样,相对于对照组,Apo E4和Apo E3组的磷酸化Tau蛋白(p-Tau)的相对值分别为1.587±0.027(P<0.01,n=3)和1.436±0.026(P<0.01,n=3),均具显著差异;且Apo E4组较Apo E3组的促进作用更强,两组间具显著差异(P<0.01)。此外,用Apo E-si RNA干扰后,U87细胞中GSK-3β的表达和p-Tau水平均较对照组显著降低,分别为0.544±0.058(P<0.001,n=3)和0.474±0.060(P<0.01,n=3)。结论 AD危险因子Apo E4可能通过上调GSK-3β的表达而促进Tau的磷酸化。
- 何颜结卫佩如伍巧燕张馨宇张兴梅刘晓加王方
- 关键词：TAU蛋白糖原合酶激酶3Β
- 脱细胞胎盘水凝胶对人头皮毛乳头细胞生物学特性的维持及毛囊重建的研究
- 背景毛囊是具有高度再生功能的皮肤附属器官,持续经历着生长期、静止期、退行期的循环生长过程,毛发的生长依赖于毛囊的这种周期性活动。毛囊所生长出的毛发除了调节体温、分泌与排泄等基本功能外,还有影响外貌的美观作用。所以由衰老、...
- 张馨宇
- 关键词：毛乳头细胞外基质水凝胶
- 基于层层自组装技术构建毛乳头细胞三维培养模型的研究
- 目的：本实验通过采用具备生物相容性、生物降解性及仿生性质的生物材料---明胶和海藻酸钠,基于层层自组装(Layer-by-Layer self-assembly,LbL)技术包裹单个鼠毛乳头细胞(DPC),通过化学交联构...
- 王瑾苗勇杜本军刘小敏肖顺娥张馨宇王雪冯传波胡志奇
