王玉霞
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 呋喃C-30对变异链球菌生物膜早期形成的影响
- 2012年
- 目的:探讨密度感应拮抗剂呋喃C-30对变异链球菌生物膜早期形成的影响。方法:将体外合成的密度感应拮抗剂呋喃C-30按终浓度10、100μmol/L分别配制于含变异链球菌的牛心脑浸液培养基,37℃微需氧培养24h,形成生物膜后,用生物膜定量分析仪检测生物膜形成的量。结果:100μmol/L呋喃C-30组变异链球菌生物膜的形成受到显著抑制,磁珠成像开始减弱和完全消失的时间均迟于对照组;生物膜开始形成后,其生物膜形成指数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:呋喃C-30在100μmol/L浓度时能有效抑制变异链球菌生物膜的形成,其应用可能为龋病防治提供新的思路。
- 王玉霞王倩胡曰健马瑞唐子圣朱彩莲何智妍黄正蔚
- 关键词：变异链球菌生物膜
- 粪肠球菌luxS基因缺陷菌株的构建
- 目的：通过同源重组方法构建粪肠球菌密度感应调控基因luxS基因缺陷突变菌株.方法：利用PCR扩增粪肠球菌luxS基因的上下游片段(up、dn)口红霉素抗性基因片段(erm),通过1％琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物,用胶...
- 何智妍周薇程岚王玉霞黄正蔚
- 关键词：粪肠球菌生物膜LUXS基因
- 粪肠球菌luxS基因缺陷菌株的构建
- 2015年
- 目的 :通过同源重组方法构建粪肠球菌密度感应调控基因luxS基因缺陷突变菌株。方法 :利用PCR扩增粪肠球菌luxS基因的上、下游片段(up、dn)和红霉素抗性基因片段(erm),依次采用相应的双酶切反应,将这些片段连接入载体pUC18,以构建目的质粒Puemrd重组载体。采用同源重组方法,将红霉素耐药基因erm置换粪肠球菌基因组中的luxS基因,并在含抗性标记的选择性培养基中筛选出阳性克隆。结果:经酶切鉴定,目的质粒各片段插入无误,插入片段的测序报告也显示碱基无错配,成功构建粪肠球菌luxS基因缺陷株。结论:本研究成功构建的粪肠球菌luxS基因突变株,为进一步研究该基因在生物膜中的作用及其调控机制提供了技术平台。
- 何智妍程岚王玉霞黄正蔚
- 关键词：粪肠球菌生物膜LUXS基因
- 变异链球菌LuxS缺陷株甲基循环通路的恢复构建被引量：2
- 2014年
- 目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株。方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建。通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证目的蛋白的表达。采用SAS8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Western印迹检测2种蛋白在大肠杆菌中均得到正确表达,验证了克隆载体的正常表达能力;反转录PCR验证了变异链球菌LuxS缺陷株中luxS及sahH mRNA的存在;发光实验证实LuxS阳性表达对照株AI-2的分泌能力恢复。结论:成功构建变异链球菌LuxS缺陷的代谢恢复株,为探讨LuxS的调控机制提供了分子生物学工具及实验对照。
- 王玉霞高丽江文欣马瑞唐子圣朱彩莲何智妍黄正蔚
- 关键词：变异链球菌生物膜密度感应LUXS
- 基于LuxS缺陷的变异链球菌AMC代谢恢复株
- 本发明公开一种基于LuxS缺陷的变异链球菌AMC代谢恢复株，所述AMC代谢恢复株为StreptococcusmutansKO-SUA159：：△luxS,pIB-sahH，保藏编号为CCTCCM2013699。本发明通过...
- 黄正蔚王玉霞
- 文献传递
- 变形链球菌LuxS调控功能的甲基代谢机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的 研究甲基代谢通路在变形链球菌LuxS相关调控功能中的作用,为探讨变形链球菌LuxS调控机制及临床生物膜防龋策略的制定提供依据.方法 以构建的变形链球菌代谢SmUA159野生株（WT）及LuxS缺陷株（KO）、甲基代谢恢复株（KO-S）、空质粒对照株（KO-P）为研究模型,实时PCR观察生物膜及耐酸相关基因转录水平;甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法和共聚焦显微镜分别观察生物膜数量和结构;以不同pH环境下变形链球菌生物膜量的变化为指标,观察不同生物膜状态下各菌株的耐酸能力.结果 实时PCR结果发现,4种被检测基因smu.44、smu.46、smu.238及gtfD在野生株WT的表达水平分别为1.289±0.051、1.694±0.140、1.565±0.107及1.667±0.196,在缺陷株KO中的表达水平分别为1.001±0.045、1.007±0.151、1.000±0.021及1.012±0.196,4种基因在KO中的表达均显著下调（P＜0.05）;4种基因在KO-S中的表达水平分别为4.662±0.091、5.019±0.258、3.462± 0.029及3.071 ±0.136,均显著高于KO及WT中的表达水平（P＜0.05）.4种菌株形成的生物膜数量（A值）分别为WT：1.592±0.213、KO：0.939±0.029、KO-S：2.177±0.226、KO-P：1.020±0.093,KO及KO-P的生物膜数量均显著小于WT （P＜0.05）,KO-S的生物膜数量显著高于其他3种菌株（P＜0.05）.WT生物膜结构均匀致密,KO、KO-S的生物膜可见大量较大团块及宽而长的沟裂,KO-S生物膜中大团块消失,代之以致密小颗粒,沟裂数量变少且较窄而短.耐酸实验显示,pH=4.3时KO及KO-P的生物膜减少量大于WT及KO-S.结论 与野生株相比,变形链球菌LuxS缺陷株生物膜形成及耐酸能力在基因及生理水平均存在异常;甲基代谢循环恢复后,被检测基因变化恢复,生物膜数量完全恢复,生物结构部分恢复,耐酸能力得到恢复;甲基代谢循环通路在LuxS对变形链球菌生物膜及耐酸能力的调控中发挥重要作用.
- 王玉霞高丽江文欣朱彩莲何智妍黄正蔚
- 关键词：生物膜
- 转导hTERT基因致人牙髓干细胞永生化的研究被引量：2
- 2015年
- 目的 :建立永生化人牙髓干细胞系(human dental pulp stem cell,h DPSC),供口腔医学临床和基础研究使用。方法:原代培养人牙髓细胞并筛选牙髓干细胞,以慢病毒为载体,导入端粒酶反转录酶基因(h TERT)全长c DNA,经筛选得到阳性克隆。体外连续传代,应用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和蛋白质印迹技术(Western blot)检测h TERT的整合和表达情况。结果 :成功地将h TERT基因转入人牙髓干细胞,得到的转化细胞端粒酶表达阳性,增殖旺盛,至今已传至第35代。结论:转导外源性h TERT基因可以导致人牙髓干细胞永生化。
- 高丽王玉霞江文欣何智妍朱彩莲马瑞
- 关键词：牙髓干细胞永生化
- 变形链球菌luxS基因高表达对生物膜形成的影响被引量：6
- 2015年
- 目的 通过构建变形链球菌luxS基因高表达株,研究该菌的密度感应luxS基因对生物膜形成的影响.方法 PCR扩增变形链球菌luxS基因片段与双酶切的大肠杆菌-链球菌穿梭表达载体pIB169连接,构建pIB-luxS质粒;将其电击转化入变形链球菌,筛选出高表达株,经电泳、蛋白质印迹法鉴定构建成功.观察野生株和高表达株的生长曲线（A600值）;通过甲基噻唑基四唑法比较两种菌株在不同时间点及培养基中含不同质量分数（0、0.125％、0.25％、0.5％）蔗糖时的生物膜形成量（A590值）,激光扫描共聚焦显微镜观察生物膜结构,实时PCR检测相关基因的表达（以野生株为对照组）,实验均重复3次.结果 luxS片段插入正确,目的蛋白表达,高表达株成功构建,且体外稳定传代.变形链球菌野生株及高表达株在浮游模式的生长曲线无差异,但高表达株细菌在14和24 h时生物膜A590值分别为0.400±0.009和0.609±0.041,均显著高于相同时间点野生株（A590值分别为0.352±0.028和0.533±0.014）（P＜0.05）.当加入0.125％蔗糖时,变形链球菌高表达株A590值为1.041±0.038,显著高于野生株（0.831±0.020）（P＜0.05）;随着蔗糖质量分数增加,两菌株的生物膜量均增加,但两菌株间差异无统计学意义.高表达株在结构上集聚程度增加,形成团块,且其相关基因gtfB、ftf、gbpB、relA、brpA、smu630、comDE及vicR的相对表达量均显著高于对照组（P＜0.05）.结论 变形链球菌密度感应luxS基因促进细菌生物膜的形成.
- 何智妍王玉霞黄正蔚
- 关键词：生物膜基因表达
