聂燕芳
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人表皮组织蛋白质组双向电泳技术的建立被引量：5
- 2007年
- 目的：建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术，为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础。方法：组织匀浆法制备表皮组织总蛋白，采用固相pH梯度胶条进行双向电泳，凝胶银染后用PDQuest7．4软件对电泳图谱进行分析。结果：人表皮组织蛋白质组在7cm pH5～8 IPG胶条的最佳上样量为200μg，平均蛋白斑点数为414±19，平均匹配斑点数为346±31，匹配率达83．6％。结论：通过优化双向电泳条件，获得了分辨率高、重复性好的人表皮组织蛋白质组双向电泳图谱。
- 聂燕芳曾耀英刘钧澄吴晓萍
- 关键词：双向电泳蛋白质组
- 适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术
- 2008年
- 【目的】建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析。【方法】利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白、固相pH梯度胶条进行双向电泳、PDQuest7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点。【结果】成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱。人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100ku之间。银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase14前体和27ku热激蛋白1。【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础。
- 聂燕芳曾耀英吴晓萍刘钧澄黄秀艳
- 关键词：双向电泳蛋白质组肽质量指纹图谱
- 体外培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响
- 2010年
- 目的:探讨体外长期培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响。方法:制备原代和第7代体外培养的人皮肤角质形成细胞的总蛋白样品进行双向凝胶电泳。采用PDQuest图像分析软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行分析。串联飞行时间质谱鉴定选取的差异表达蛋白质点。半定量RT-PCR对差异表达蛋白质的mRNA水平进行确证。结果:获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,串联飞行时间质谱鉴定选取的2个在第7代角质形成细胞中表达显著下调的蛋白质分别为PA-FABP(psoriasis-associated fatty acidbinding protein5)和Galectin-7,半定量RT-PCR确证第7代角质形成细胞中PA-FABP和Galectin-7的基因转录水平较原代角质形成细胞相应的基因转录水平显著降低。结论:体外长期培养人皮肤角质形成细胞可能影响一些与细胞的脂肪酸代谢及细胞凋亡相关蛋白的表达。
- 吴晓萍曾耀英聂燕芳刘钧澄
- 关键词：人皮肤角质形成细胞质谱RT-PCR
- rhFGF-7对体外培养人皮肤角质形成细胞增殖的影响被引量：1
- 2009年
- 目的建立一种人皮肤角质形成细胞分离和培养的方法,研究重组人成纤维细胞生长因子7(rhFGF-7)对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。方法取环切术后包皮,分别用胰酶和dispaseⅡ酶消化法分离表皮,用无血清培养基进行无滋养层培养,采用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定,并用细胞计数法测定细胞的生长曲线,MTT法检测rhFGF-7对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。结果与胰酶消化分离表皮相比,dispaseⅡ酶消化获得的表皮,其细胞贴壁率高,增殖速度快,且成纤维细胞污染少;荧光显微镜下细胞胞浆呈黄绿色,为角蛋白阳性染色;培养的角质形成细胞可持续增殖至第8代,10ng/mL的rhFGF-7促角质形成细胞增殖作用最显著。结论所建立的人皮肤角质形成细胞分离和培养方法,可获得高纯度的人皮肤角质形成细胞,rhFGF-7可促进体外培养人皮肤角质形成细胞的增殖。
- 朱国兴吴晓萍曾耀英刘钧澄聂燕芳黄秀艳
- 关键词：人皮肤角质形成细胞细胞培养细胞增殖
- 骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳技术的建立与优化被引量：6
- 2008年
- 本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示:通过优化样品制备和电泳中的实验环节,获得了蛋白点分离清晰的图谱,平均蛋白点数为780±73,重复实验所得蛋白点匹配率为82±5%。结论:成功建立了人骨髓白血病细胞的蛋白质组双向电泳分析方法,该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。
- 肖平曾耀英聂燕芳林蔚吴晓萍
- 关键词：白血病双向电泳蛋白质组
- bFGF特异性结合噬菌体的活性研究
- 2009年
- 研究从噬菌体随机7肽库中筛选的bFGF特异性结合噬菌体的活性。采用ELISA检测3轮淘选后得到的阳性噬菌体克隆对bFGF的结合曲线。通过竞争抑制实验,分析bFGF结合噬菌体与bFGF的竞争结合活性。采用MTT法检测bFGF结合噬菌体对由bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的影响。从噬菌体肽库中淘选获得的阳性噬菌体克隆能够特异地与bFGF结合,并呈剂量依赖性,其与固相bFGF的结合能被游离的bFGF竞争抑制,并可抑制由bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖。bFGF特异性噬菌体可拮抗bFGF的活性,为开发针对bFGF的抗肿瘤短肽类新药提供基础。
- 颜秋霞吴晓萍黄慧贤聂昌君聂燕芳柯实肖健李校堃
- 关键词：噬菌体展示肽库碱性成纤维细胞生长因子
- 药物阻断结肠癌细胞MAPK信号通路的蛋白质组学研究
- 丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)信号通路的异常活化是引起结肠癌细胞增殖失控的主要原因之一，但目前对于其调控结肠癌细胞增殖的相关蛋白缺乏整体的认识，对其机理也并不...
- 聂燕芳
- 关键词：丝裂原激活蛋白激酶结肠癌蛋白质组学
- 急性髓系白血病与急性淋巴系白血病的蛋白质组比较研究被引量：2
- 2011年
- 本研究通过对急性髓系白血病(AML)与急性淋巴系白血病(ALL)细胞比较蛋白质组分析,寻找亚型特异性的蛋白质表达谱。应用双向电泳分别分离AML不同亚型(M1、M2、M3)、ALL患者骨髓白血病细胞蛋白质,利用PDQuest 7.4软件分析双向电泳图谱差异蛋白质点,基质辅助的激光解析飞行时间质谱和生物信息学鉴定差异蛋白质。结果显示:经过电泳图谱分析得到21个差异蛋白质点,质谱鉴定提示15种蛋白有统计学意义。在AML中高表达的蛋白质包括髓过氧化物酶(MPO)、硫氧还蛋白依赖的过氧化物还原酶(PRDX3),钙网蛋白(CALR)、烯酰辅酶A水合酶ECH1等7种,在ALL中高表达的蛋白质包括ARHGDIB、肌动蛋白抑制蛋白1(PFN1)、肌动蛋白(ACTG1)等8种。结论:AML与ALL细胞存在差异蛋白质表达谱,这将有助于发现早期诊断的分子标志物及特异性治疗靶标。
- 肖平曾耀英聂燕芳林蔚
- 关键词：急性髓系白血病蛋白质组
