胡柳
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
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- A549细胞线粒体DNA缺失模型建立及其放射敏感性变化被引量：2
- 2014年
- 目的建立肺癌A549细胞线粒体DNA（mtDNA）缺失模型（p°细胞），观察其放射敏感性变化。方法用含微量溴化乙锭（EB）的特殊培养液持续培养正常的A549细胞（p°细胞）以获得mtDNA完全缺失的p°细胞，利用生长缺陷及PCR鉴定该细胞模型。利用克隆形成实验分别检测两种细胞的放射敏感性，利用碘化丙啶（PI）染色法及二氯荧光素双醋酸盐（DCFH．DA）染色法，分析两种细胞在6MVX射线照射后的细胞周期及活性氧簇（ROS）变化情况。结果成功建立A549P”细胞。p°细胞较p°细胞放射敏感性降低（t=12．57，P〈0．01）。放射照射8Gy后，p°细胞较p°细胞G：期阻滞时间延长，G：期细胞比例降低（t=6．82，P〈0．01），p°细胞ROS升高水平明显低于p°细胞（t=14．51，P〈0．01）。结论p°细胞较p‘细胞放射敏感性降低，其机制可能与放射照射后ROS产量降低及G2期阻滞延长有关。
- 何为周福祥徐会江换钢胡柳谢丛华周云峰
- 关键词：MTDNAA549
- 大分割剂量照射内皮细胞持续表达细胞因子模型的建立
- 2014年
- 目的:通过大分割剂量的X线照射人脐静脉血内皮细胞ECV-304,构建放射反应相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)持续表达模型,为探讨晚期放射反应中的分子靶点及干预策略提供基础。方法:大分割剂量的X线[5Gy/(次·周),连续6周,总计30Gy]照射指数生长期的ECV-304,在第一次照射后1,3,24,72h和后续每次照射后第5天及末次照射后第5,6,7,8周提取mRNA,采用qRT-PCR检测TNF-α、TGF-β1 mRNA水平的变化。于第一次照射后第1,3,24小时和后续每次照射后第5天,及末次照射后第4,6,8周收集细胞上清液,采用ELISA法测定其蛋白水平的表达情况。结果:正常ECV-304低表达TNF-α和TGF-β1。ECV-304细胞受到连续多次5Gy剂量照射后,于不同时间点,TNF-α和TGF-β1mRNA的表达均呈现先升高后降低的趋势,但始终高于正常水平。其中,TNF-αmRNA于末次照射后的第8周,表达量最高,为未照射时的(8.05±1.28)倍(P<0.05);而TGF-β1mRNA于末次照射后第5周升至高峰[为对照组(7.3±0.39)倍,P<0.05]。ECV-304细胞于单次照射后24h,TNF-α、TGF-β1蛋白表达量即开始升高,和mRNA趋势一致,TNF-α蛋白至第6次分割剂量照射后第5天表达量最高[(479.10±21.94)pg/ml(P<0.01)]。而TGF-β1蛋白于末次照射后6周升至高峰,蛋白含量为(2 335.93±126.18)pg/ml(P<0.01)。结论:TNF-α,TGF-β1在大分割剂量照射后,在mRNA和蛋白水平均明显升高,照射后8周仍持续升高,结果表明放射反应相关因子TNF-α、TGF-β1持续表达细胞模型构建成功。
- 李白羽周福祥梁辰何为杨军平胡柳韦静妮谢丛华周云峰
- 关键词：电离辐射TNF-ΑTGF-Β1
- 单核苷酸多态性与鼻咽癌IMRT急性皮肤放射损伤的相关性
- 目的 :通过对DNA损伤修复基因XRCCI rs25487,内源性氧化应激基因MnSOD rs4880,MPO rs2333227,GSTP1 rs1695,炎性因子基因TGF-β1 rs1800469,COX-2 rs...
- 江换钢周福祥武雪勤胡柳周云峰
- 关键词：鼻咽癌
- 文献传递
- 端粒酶阴性肿瘤细胞株U20S中Ku80表达抑制模型的建立及其对放射敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨Ku80在端粒酶阴性肿瘤细胞中与端粒和放射敏感性的关系。方法构建重组表达质粒pshRNA—Ku80，转染U20S细胞，并筛选稳定表达的转化克隆。RT—PCR和Westernblot分别在基因和蛋白水平检测干扰前后Ku80表达量的变化。定时PCR检测干扰前后端粒长度的变化。克隆形成实验分析pshRNA—Ku80干扰对U20S细胞放射敏感性的影响。结果流式细胞仪检测重组质粒稳定转染细胞株的转染效率为（83．23±7．63）％。PCR结果显示，重组质粒组Ku80基因抑制率为（68．09±1．16）％。Westernblot结果表明，重组质粒组Ku80蛋白抑制率达到（11．03±2．45）％。端粒长度检测结果显示，重组质粒组的端粒长度（1．07±0．07）明显短于空白组（4．42±1．30）（F=38．58，P〈0．05），而空质粒组端粒长度（4．1l±0．84）与空白组无明显变化。克隆形成实验结果显示，重组质粒组细胞株SF。值较空白组降低显著（F=1089．61，P〈0．05），放射增敏比（SER）为1．47。结论运用RNAi技术所建立的Ku80表达抑制的细胞模型，可用于以后的基因功能研究；在U20S中，特异性地沉默Ku80会引起端粒长度的缩短，并增加U20S细胞的放射敏感性，推测pshRNA—Ku80引起端粒缩短很可能是其放射增敏的机制之一。
- 吴琴琴周福祥胡柳江换钢何为李白羽谢丛华周云峰
- 关键词：KU80稳定转染端粒
- 利用比较蛋白质组学分析筛选并确认线粒体DNA单链结合蛋白(mtSSB)为一种新型的辐射抗拒相关蛋白
- 目的:放疗是很多肿瘤的常规治疗方法之一,但是肿瘤细胞的放射抗拒是这种治疗方式的重要制约因素,在前期工作中,我们已经建立了Hep-2的防抗株Hep-2R.本实验通过比较蛋白质组学和蛋白质谱分析发现放射抵抗相关蛋白线粒体DN...
- 胡柳张喜梅赵红江换钢王文博杨垒谢丛华周云峰周福祥
- RNA干扰抑制端粒酶反转录酶联合γ射线对人喉癌细胞的作用被引量：1
- 2009年
- 目的观察人端粒酶反转录酶特异性干扰载体（pshRNA-hTERT）联合放射线在细胞和动物模型水平上对人喉鳞癌Hep-2细胞株的生长抑制作用，研究抑制hTERT在放射增敏中的作用。方法细胞水平：联合pshRNA-hTERT和γ射线作用于人喉癌细胞Hep-2，用TRAP-PCR，ELISA法检测端粒酶活性，彗星电泳检测DNA损伤；动物水平：建立Hep-2和Hep-2R移植瘤模型，瘤内注射pshRNA-hTERT并联合放射线观察对移植瘤的抑制作用，TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡，免疫组织化学法检测肿瘤内hTERT蛋白的表达。结果转染pshRNA-hTERT后Hep-2细胞hTERT的mRNA表达抑制率为60.78％；pshRNA-hTERT不仅能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，而且抑制照射后DNA损伤的修复；在移植瘤模型中，pshRNA-hTERT与放射线有协同抑制移植瘤生长的作用（Hep-2：EPO=1.79；Hep-2R：EPO=2.01）。结论pshRNA-hTERT在细胞和动物实验水平均具有放射增敏作用，表明抑制端粒酶及其亚单位可以增加在体肿瘤的放射敏感性，这为喉癌的基因放疗研究提供了依据。
- 胡柳周福祥雷晗张喜梅邱慧兵戴静黄成虎谢丛华刘诗权周云峰
- 关键词：DNA损伤修复移植瘤
- 辐射诱导放射抗拒鳞癌细胞株的蛋白组学分析
- 胡柳周福祥张喜梅戴静雷晗谢丛华刘诗权周云峰
- 辐射诱导放射抗拒鳞癌细胞株的蛋白质组学差异分析被引量：2
- 2011年
- 放射抗拒是肿瘤放射治疗失败的重要原因之一，寻找放射增敏靶点和放射敏感性预测因子具有重要意义。本实验室成功建立辐射诱导放射抗拒株的人喉鳞癌细胞株（Hep2R），以基因芯片初步分析出放射抗拒株基因表达谱的改变，并证实了在Hep-2R中高表达的人端粒保护蛋白之一的蛋白质hPOT1对放射敏感性的影响。基因芯片技术虽然能够反映基因表达的相关信息，但并不能够完全准确反映蛋白质合成的情况。本研究立足于蛋白质实际表达水平，运用双向电泳和质谱分析寻找与放射敏感性相关的蛋白质，为研究新的放射增敏靶点奠定基础。
- 张喜梅周福祥胡柳张治国雷晗廖正凯周云峰
- 关键词：蛋白质组学放射抗拒癌细胞株基因芯片技术人端粒保护蛋白
- 辐射诱导放射抗拒的鳞癌细胞株的蛋白组学差异分析
- 目的在成功建立的辐射诱导放射抗拒鳞癌细胞株的基础上,以蛋白质组学分析方法筛选出放射抗拒与放射敏感鳞癌细胞株的差异蛋白蛋白质,探讨放射敏感性的调控机制,寻找新的放射增敏靶点。方法以双向电泳建立同一遗传背景的人喉鳞癌细胞株(...
- 胡柳张喜梅周福祥周云峰
- 关键词：放射抗拒蛋白组学
- 文献传递
- 人喉癌细胞Hep2线粒体DNA缺失模型建立及放射生物学观察
- 2014年
- 放疗主要机制是放射线直接或间接造成细胞DNA损伤，而线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）比核DNA（nuclearDNA）缺少组蛋白保护，位于氧化呼吸链附近，更易受到损伤且损伤后缺乏有效修复。笔者通过构建Hep：mtDNA缺失的P。细胞模型，观察其放射敏感性、增殖、周期、ATP及活性氧族（reactiveoxygenspecies，ROS）变化，探讨mtDNA与放射敏感性的关系及可能机制。
- 徐会周福祥何为江换钢胡柳谢丛华周云峰
- 关键词：线粒体DNA缺失人喉癌细胞细胞DNA损伤MTDNA缺失
