何为
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：武汉大学中南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大分割剂量照射内皮细胞持续表达细胞因子模型的建立
- 2014年
- 目的:通过大分割剂量的X线照射人脐静脉血内皮细胞ECV-304,构建放射反应相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)持续表达模型,为探讨晚期放射反应中的分子靶点及干预策略提供基础。方法:大分割剂量的X线[5Gy/(次·周),连续6周,总计30Gy]照射指数生长期的ECV-304,在第一次照射后1,3,24,72h和后续每次照射后第5天及末次照射后第5,6,7,8周提取mRNA,采用qRT-PCR检测TNF-α、TGF-β1 mRNA水平的变化。于第一次照射后第1,3,24小时和后续每次照射后第5天,及末次照射后第4,6,8周收集细胞上清液,采用ELISA法测定其蛋白水平的表达情况。结果:正常ECV-304低表达TNF-α和TGF-β1。ECV-304细胞受到连续多次5Gy剂量照射后,于不同时间点,TNF-α和TGF-β1mRNA的表达均呈现先升高后降低的趋势,但始终高于正常水平。其中,TNF-αmRNA于末次照射后的第8周,表达量最高,为未照射时的(8.05±1.28)倍(P<0.05);而TGF-β1mRNA于末次照射后第5周升至高峰[为对照组(7.3±0.39)倍,P<0.05]。ECV-304细胞于单次照射后24h,TNF-α、TGF-β1蛋白表达量即开始升高,和mRNA趋势一致,TNF-α蛋白至第6次分割剂量照射后第5天表达量最高[(479.10±21.94)pg/ml(P<0.01)]。而TGF-β1蛋白于末次照射后6周升至高峰,蛋白含量为(2 335.93±126.18)pg/ml(P<0.01)。结论:TNF-α,TGF-β1在大分割剂量照射后,在mRNA和蛋白水平均明显升高,照射后8周仍持续升高,结果表明放射反应相关因子TNF-α、TGF-β1持续表达细胞模型构建成功。
- 李白羽周福祥梁辰何为杨军平胡柳韦静妮谢丛华周云峰
- 关键词：电离辐射TNF-ΑTGF-Β1
- A549细胞线粒体DNA缺失模型建立及其放射敏感性变化被引量：2
- 2014年
- 目的建立肺癌A549细胞线粒体DNA（mtDNA）缺失模型（p°细胞），观察其放射敏感性变化。方法用含微量溴化乙锭（EB）的特殊培养液持续培养正常的A549细胞（p°细胞）以获得mtDNA完全缺失的p°细胞，利用生长缺陷及PCR鉴定该细胞模型。利用克隆形成实验分别检测两种细胞的放射敏感性，利用碘化丙啶（PI）染色法及二氯荧光素双醋酸盐（DCFH．DA）染色法，分析两种细胞在6MVX射线照射后的细胞周期及活性氧簇（ROS）变化情况。结果成功建立A549P”细胞。p°细胞较p°细胞放射敏感性降低（t=12．57，P〈0．01）。放射照射8Gy后，p°细胞较p°细胞G：期阻滞时间延长，G：期细胞比例降低（t=6．82，P〈0．01），p°细胞ROS升高水平明显低于p°细胞（t=14．51，P〈0．01）。结论p°细胞较p‘细胞放射敏感性降低，其机制可能与放射照射后ROS产量降低及G2期阻滞延长有关。
- 何为周福祥徐会江换钢胡柳谢丛华周云峰
- 关键词：MTDNAA549
- 端粒酶阴性肿瘤细胞株U20S中Ku80表达抑制模型的建立及其对放射敏感性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨Ku80在端粒酶阴性肿瘤细胞中与端粒和放射敏感性的关系。方法构建重组表达质粒pshRNA—Ku80，转染U20S细胞，并筛选稳定表达的转化克隆。RT—PCR和Westernblot分别在基因和蛋白水平检测干扰前后Ku80表达量的变化。定时PCR检测干扰前后端粒长度的变化。克隆形成实验分析pshRNA—Ku80干扰对U20S细胞放射敏感性的影响。结果流式细胞仪检测重组质粒稳定转染细胞株的转染效率为（83．23±7．63）％。PCR结果显示，重组质粒组Ku80基因抑制率为（68．09±1．16）％。Westernblot结果表明，重组质粒组Ku80蛋白抑制率达到（11．03±2．45）％。端粒长度检测结果显示，重组质粒组的端粒长度（1．07±0．07）明显短于空白组（4．42±1．30）（F=38．58，P〈0．05），而空质粒组端粒长度（4．1l±0．84）与空白组无明显变化。克隆形成实验结果显示，重组质粒组细胞株SF。值较空白组降低显著（F=1089．61，P〈0．05），放射增敏比（SER）为1．47。结论运用RNAi技术所建立的Ku80表达抑制的细胞模型，可用于以后的基因功能研究；在U20S中，特异性地沉默Ku80会引起端粒长度的缩短，并增加U20S细胞的放射敏感性，推测pshRNA—Ku80引起端粒缩短很可能是其放射增敏的机制之一。
- 吴琴琴周福祥胡柳江换钢何为李白羽谢丛华周云峰
- 关键词：KU80稳定转染端粒
- 非小细胞肺癌患者组织线粒体DNA含量及G10398A多态性的预后价值
- 目的:非小细胞肺癌(NSCLC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一.线粒体是真核细胞内一种重要而独特的细胞器,其结构和功能异常与肿瘤发生发展密切相关.NSCLC患者组织线粒体DNA(mtDNA)含量联合G10398A多态性...
- 徐会何为江换钢谢丛华梁辰钟亚华张弓邓涤周云峰周福祥
- 人喉癌细胞Hep2线粒体DNA缺失模型建立及放射生物学观察
- 2014年
- 放疗主要机制是放射线直接或间接造成细胞DNA损伤，而线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）比核DNA（nuclearDNA）缺少组蛋白保护，位于氧化呼吸链附近，更易受到损伤且损伤后缺乏有效修复。笔者通过构建Hep：mtDNA缺失的P。细胞模型，观察其放射敏感性、增殖、周期、ATP及活性氧族（reactiveoxygenspecies，ROS）变化，探讨mtDNA与放射敏感性的关系及可能机制。
- 徐会周福祥何为江换钢胡柳谢丛华周云峰
- 关键词：线粒体DNA缺失人喉癌细胞细胞DNA损伤MTDNA缺失
