董建宝
- 作品数：12 被引量：102H指数：6
- 供职机构：广西兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 应用二温式PCR检测诊断爱德华氏菌病被引量：3
- 2010年
- 根据爱德华氏菌(Edwardsiella)的16S rDNA基因序列设计一对特异性引物,用二温式PCR对6株爱德华氏菌均扩增出与预期大小相一致的576 bp产物,而对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、荧光假单胞菌(Pseudcmonas fluoroscercs)、柱状屈挠杆菌(Cytophaga columnaris)、链球菌(Streptococcus)、葡萄球菌(Staphylococci)、弧菌(Vibrio)、大肠杆菌(Escherichia colibacillus)和沙门氏菌(Salmonella)等10种病原体的扩增,结果全为阴性。该二温式PCR可以检测到1 pg的爱德华氏菌DNA模板和48个菌体。本实验建立的二温式PCR为爱德华氏菌病的早期诊断与有效的防治提供了快速检测方法,对水产品的食品安全有重要的意义。
- 邓显文谢芝勋刘加波庞耀珊谢志勤谢丽基董建宝
- 关键词：二温式PCR
- 真核表达质粒pTracer-CMV2FIL2在鸡体组织中表达及分布规律
- 2009年
- 将3周龄的三黄鸡肌肉接种200μg真核表达质粒pTraeer-CMV2FIL2，巢式PCR法检测血清、心、脾脏、肺脏、法氏囊、脑、骨髓、胸腺和肌肉接种部位中pTracer-CMV2FIL2出现和存留的时间；荧光定量PCR法检测其在血液中的动态变化；RT-巢式PCR法检测其在上述部位的表达情况。结果显示，接种后2-3h血清中可检测到pTracer-CMV2FIL2，6h时在血液中的含量最高，7d时已经检测不到；4h后在上述器官中可陆续检测到pTracer-cMV2FIL2的出现，13d后陆续消失；1d后可陆续检测到质粒所转录的mRNA，13d后陆续消失；接种后2h可在接种部位肌肉的细胞中检测到pTracer-CMV2FII。2的出现，10h可检测到mRNA，150d时仍然可以在肌肉接种部位的细胞中检测到质粒和mRNA存在。
- 董建宝谢芝勋刘加波庞耀珊邓显文谢丽基
- 关键词：DNA疫苗
- 鸡IFN-γ基因的原核表达及其表达产物的抗NDV活性被引量：4
- 2007年
- 设计了1对特异性引物,从含有广西三黄鸡IFN-γ基因的重组质粒pMD18-ChIFN-γ中扩增出鸡的IFN-γ基因,将该基因插入到原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达质粒pGEX-ChIFN-γ,并将其转入到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达的融合蛋白经SDS-PAGE和Western-blot分析,其分子质量约为42.4 ku,表明鸡IFN-γ基因在原核细胞中得到了表达。采用NDV国内参考强毒株F48E9对复性后的IFN-γ进行了活性测定;结果显示,IFN-γ的抗病毒活性为1.33×104U/mL。
- 董建宝黄溢泓谢芝勋孙建华刘加波庞耀珊邓显文谢丽基
- 关键词：Γ-干扰素基因原核表达抗病毒活性
- 广西斑点叉尾鮰爱德华氏菌的分离鉴定被引量：34
- 2008年
- 在广西2处网箱和2处池塘发病斑点叉尾鮰中分离到4株呈β溶血的革兰氏阴性杆菌,经细菌形态、培养特征、生理生化特性鉴定3株为钻鱼爱德华氏菌、1株为迟钝爱德华氏菌,通过PCR检测、PCR产物核苷酸序列测序及Blast比对,进一步确定3株为钻鱼爱德华氏菌、1株为迟钝爱德华氏菌;致病性试验结果显示,这4株分离菌株具有较强的致病性,能引起斑点叉尾鮰发生爱德华氏菌病;药敏试验结果显示,4株分离菌株对氧氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、氟哌酸等高度敏感。
- 邓显文谢芝勋刘加波谢丽基庞耀珊谢志勤董建宝黄伟德刘远新
- 关键词：迟钝爱德华氏菌
- 禽腺病毒1型和4型六邻体蛋白抗原表位和密码子偏爱性分析被引量：15
- 2007年
- 为了研究禽腺病毒1型和4型(AAV-1和AAV-4)六邻体抗原表位和同义密码子的使用情况,运用生物学软件Antheprot5.0和EMBOSS的CHIPS、CUSP程序分别对AAV-1和AAV-4六邻体进行了分析,并将分析结果与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性进行比较。结果显示,AAV-1、AAV-4六邻体的抗原表位区都主要集中在前段、中段,推测具有型和群特异性表位,可作为诊断型和群的首选蛋白。AAV-1和AAV-4六邻体的Enc值分别为43.553和38.475,在编码密码子使用频率上都存在明显差异,与大肠埃希菌、酵母及人的密码子偏爱性也不同,其表达系统选择大肠埃希菌较为合适。
- 文艳玲谢芝勋黄琦童桂香刘加波庞耀珊邓显文谢丽基董建宝
- 关键词：抗原表位同义密码子
- 广西PRRSV、PCV、CSF的混合感染及PRRSV分子病原学研究被引量：8
- 2008年
- 为了弄清2007年发生于广西一些县市猪场的高致病性猪繁殖与呼吸综合征和其他疾病的混合感染情况，从广西7个县市发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征的猪场采集病料，进行猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒（PCV）及猪瘟病毒（CSF）检测，并对检测的PRRSV进行分子病原学分析。结果显示，经PCR检测，86份样品中有60份为PRRSV阳性，36份为PCV阳性，2份为CSF阳性，说明发生于广西猪群的PRRSV与PCV共感染情况比较严重。通过PRRSV ORF5基因序列比较分析发现，来自广西7个县市不同猪场的PRRSV高度同源，核苷酸序列同源性为98．5％-99．8％，推导编码的氨基酸序列同源性为98．0％～100．0％；与VR2332和LV株的核苷酸序列同源性分别为88．7％-89．7％和62．2％-63．1％，氨基酸序列同源性分别为88．6％～89．6％和60．5％～61．3％，表明7个县市不同毒株的ORF5基因区域变异不大，均属美洲型。
- 谢丽基谢芝勋庞耀珊刘加波邓显文谢志勤董建宝
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 3株H9N2亚型禽流感病毒广西分离株全基因组序列的测定与分析被引量：9
- 2007年
- 目的对3株H9N2亚型禽流感病毒进行全基因序列的测定与分析。方法根据GenBank公布的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计了8对引物,运用RT-PCR方法获取了3株H9N2亚型AIV广西地方分离株A/Chick-en/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/00的全基因序列,并对所得序列进行了比较分析。结果同源性分析及遗传进化分析发现,所分离的3个毒株的各基因与A/Chicken/Guangdong/4/00和A/Chicken/Jiangsu/1/00的相应基因的核苷酸序列有着较高的同源性和较近的亲缘关系,可能起源于同一种系。所分离毒株中每个毒株的8个基因,在遗传进化树上的分支不具有统一性,说明此3个毒株可能为不同基因亚系间发生自然重排的产物。氨基酸序列比较发现,A/Chicken/Guangxi/1/00、A/Chicken/Guangxi/14/00和A/Chicken/Guangxi/17/003株AIV的na基因核苷酸序列在开放性阅读框架的187～195位均缺失了ACAGAGATA共9个核苷酸,它们所编码的氨基酸为T、E、I。3个分离株的HA蛋白第226位氨基酸均为Gln,证明它们为人类非易感性的H9N2亚型AIV。结论此3株H9N2亚型流感病毒为基因自然重排的产物,其na基因均存在缺失,且从分子水平上证明它们对人类不具有易感性。
- 谢芝勋董建宝唐小飞刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：禽流感H9N2亚型全基因组
- 三株新城疫广西分离株全基因组序列的测定与分析被引量：6
- 2006年
- 根据GenBank上所公布的新城疫病毒（NDV）的全基因组序列，设计了8对引物，运用RT-PCR方法获取了3株广西地方强毒株GX7／02、GX9／03和GX11／03的全基因组序列，并对其进行了比较分析。此3株病毒的全基因组序列均由15192个碱基组成，与GenBank公布的ZJ1、U．S／Largo／71、Italy／2736／00等7个毒株的全基因组序列长度相同，比LaSota、Clone-30和B1的全基因组序列多出6个核苷酸，此6个核苷酸位于np基因的非编码区内，相对与NDV毒株LaSota、Clone-30和B1序列的1647～1648nt位。通过序列的比较分析，发现GX7／02、GX9／03和GX11／03与ZJ1毒株的同源性较高，而与LaSota、Clone-30和B1等毒株的同源性较低。
- 谢芝勋唐小飞董建宝刘加波庞耀珊邓显文谢志勤
- 关键词：全基因组
- 广西三黄鸡γ-干扰素基因真核表达载体的构建及表达被引量：5
- 2008年
- 设计1对特异性引物,采用PCR方法从pMD18-TCHIFN-γ重组载体中扩增得到广西三黄鸡γ-干扰素基因,然后将该基因克隆入含有绿色荧光报告基团EGFP的真核表达载体pEGFP-N1中,构建成pEGFP-N1CHIFN-γ重组质粒,PCR鉴定结果和测序结果均显示,γ-干扰素基因正确地插入到真核表达载体中。使用脂质体转染法将pEGFP-N1CHIFN-γ转染Vero细胞,荧光显微镜下成功地观察到绿色荧光,说明γ-干扰素基因成功表达。
- 董建宝谢芝勋孙建华刘加波庞耀珊邓显文谢志勤谢丽基
- 关键词：绿色荧光真核表达
- 罗非鱼迟缓爱德华氏菌的分离与鉴定被引量：27
- 2009年
- 从广西某鱼场的发病罗非鱼（Tilapianilotica）中分离到1株呈β溶血的革兰氏阴性杆菌，在普通琼脂平板上生长，菌落圆形，边缘整齐，灰白色，湿润菌落，直径为0．5～1．0mm，有动力，接触酶阳性，赖氨酸及鸟氨酸脱梭酶阳性，还原硝酸盐为亚硝酸盐，发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，经细菌形态、培养特征、生化特性测定结果均符合迟缓爱德华氏菌的特征。应用PCR技术扩增出576bp目的片段，通过PCR产物核苷酸序列测序及Blast比对结果，进一步确定为迟缓爱德华氏菌。致病性试验结果显示分离菌株具有致病性，对氧氟沙星、氯霉素、氟哌酸、恩诺沙星、先锋霉素等高度敏感。
- 邓显文谢芝勋刘加波庞耀珊董建宝谢志勤谢丽基
- 关键词：罗非鱼迟缓爱德华氏菌
