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肺癌抑癌基因1对人前列腺癌T_3B细胞增殖的抑制效应被引量：3: 2009年; 背景与目的:肺癌抑癌基因1(tumor suppressor in lung cancer1,TSLC1)是新近发现的一种肿瘤抑制基因,它在包括前列腺癌在内的多种恶性肿瘤中是失活的。本研究通过将TSLC1转染至人前列腺癌T3B细胞来观察T3B细胞增殖的受抑情况。方法:将克隆有TSLC1全长cDNA的真核重组载体pCI-TSLC1稳定转染至前列腺癌T3B细胞中(实验组)。以转染空质粒pCI-neo的T3B细胞为对照组,野生型T3B细胞为空白组。四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,FACSort流式细胞仪检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:实验建立了高表达TSLC1蛋白的稳定细胞株。与对照组和空白组相比,实验组细胞生长速度减慢,增殖受到明显抑制,G0/G1期细胞为(80±3)%,高于对照组(66±4)%和空白组(64.2±0.9)%;S期细胞为(11.1±1.3)%,低于对照组(24.0±2.4)%和空白组(26.2±0.6)%,组间差异有显著性(P<0.01),实验组细胞周期发生了明显的G0/G1期阻滞。实验组细胞早期凋亡率,晚期凋亡率和总凋亡率分别为(11.9±0.4)%,(10.2±0.4)%和(22.1±0.6)%,与对照组和空白组细胞相比均明显升高(P<0.01)。结论:TSLC1基因明显抑制T3B细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡。; 袁林陈安民郭风劲祝文涛王江廖晖; 关键词：前列腺肿瘤抑癌基因 TSLC1

结肠造瘘口术后造瘘口周围癌一例: 2013年; 患者男，26岁，以“结肠造瘘口术后25年，发现造瘘口旁新生物半年”于2012-03-28入院。患者于1987年因臀部烧伤后行预防性结肠造瘘术后（具体不详），于2012年9月无明显诱因发现造瘘口旁绿豆大小新生物，淡红色，约1个月前新生物间断出现针刺样疼痛，触之时有鲜红色出血，无明显腹痛、发热等不适，来我院诊治，既往体健。; 袁林姜云翰曹志新; 关键词：结肠造瘘口瘘口周围术后新生物烧伤后

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用: 2008年; 背景与目的:肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(cyclinE1)的过表达与预后密切相关。为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cyclinE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用。方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclinE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.88±0.04)及未转染组(0.90±0.03)(P<0.05)。经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.15±4.00)%(P<0.05)。生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:肾癌cyclinE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据。; 王江陈安民郭风劲祝文涛袁林陈剑峰; 关键词：RNA干扰细胞增殖凋亡

全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的诱导作用被引量：3: 2007年; 目的研究全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法在培养液体系中加入不同浓度的全反式维甲酸（ATRA）进行不同时间长度的诱导，以MTT法，流式细胞术，TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果1～50μmol／LATRA均能抑制骨肉瘤细胞增殖。5、10、50μmol／LATRA作用细胞4d后的凋亡率分别为（12．46±2．37）％、（18．36±1．32）％、（27．15±2．17）％，与对照组[（4．09±1．18）％]比较差异均有显著性意义（均P＜0．05）。ATRA浓度越高，抑制作用越明显，呈明显的剂量依赖效应。50μmol／LATRA作用细胞1、2、3、4d后的凋亡率分别为（7．35±1．28）％、（10．72±1．68）％、（17．65±2．14）％、（27．15±2．17）％，与对照组[（4．09±1．18）％]比较差异均有显著性意义（均P〈0．05）。ATRA作用时间越长，抑制作用也越明显，呈明显的时间依赖效应。结论ATRA能够诱导人骨肉瘤细胞发生凋亡，呈时间和剂量依赖效应。; 袁林郭风劲陈安民; 关键词：全反式维甲酸人骨肉瘤细胞细胞凋亡

不同转移潜能MG63骨肉瘤细胞亚株裸鼠肺转移模型的建立被引量：3: 2008年; 目的建立不同转移潜能的骨肉瘤MG63细胞亚株裸鼠肺转移模型,为探讨骨肉瘤发生发展机制奠定实验基础。方法MTT法检测不同转移潜能的人骨肉瘤MG63细胞亚株M8、M6细胞增殖情况,将生长良好的细胞制成2×107/ml细胞悬液注射裸鼠尾静脉,第4周起处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织经过石蜡包埋切片后行苏木精-伊红染色观察病理变化,并采用免疫组化方法检测肿瘤相关指标Cyclin E1和Bcl-2的表达。结果高转移潜能细胞M8组细胞增殖能力强于M6组。尾静脉注射瘤细胞后,M8组20只裸鼠除2只死亡外,有17只发生肺转移;低转移潜能M6组20只裸鼠仅1只发生肺转移。免疫组化结果显示M8组裸鼠肺组织Cyclin E1和Bcl-2表达呈阳性,而M6组未见阳性细胞表达。结论采用尾静脉注射人骨肉瘤细胞亚株M8、M6可成功建立高、低转移潜能的骨肉瘤裸鼠肺转移模型,为深入研究骨肉瘤侵袭和转移机制及寻求有效治疗方法提供了实验平台。; 祝文涛袁林郭风劲许涛陈安民; 关键词：骨肉瘤动物模型

肺癌抑癌基因1对前列腺癌T_3B细胞侵袭、成瘤和转移能力的影响: 2009年; [目的]研究肺癌抑癌基因1(TSLC1)对人前列腺癌T3B细胞侵袭、成瘤和转移能力的影响。[方法]将克隆有TSLC1全长cDNA的真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至前列腺癌T3B细胞中。实验组T3B细胞转染pCI-TSLC1质粒,以转染空质粒pCI-neo的T3B细胞为对照组,未加任何处理的T3B细胞为空白组。Transwell法检测体细胞体外侵袭能力,将三组细胞分别以4.0×106/200μl浓度注入裸鼠皮下,观察各组成瘤情况,将三组细胞分别以2.0×106/10μl进行骨原位注射建立骨转移瘤模型,观察各组骨转移率。[结果]与对照组和空白组相比,实验组细胞株细胞体外侵袭能力受到显著抑制(P<0.01);实验组皮下瘤出现明显晚于对照组和空白组,而且瘤体也明显小于对照组和空白组(P<0.01);实验组骨转移率为20%,明显低于对照组(100%)和空白组(100%)(P<0.05)。[结论]TSLC1基因明显抑制T3B细胞的侵袭、成瘤和转移能力。; 袁林陈安民郭风劲祝文涛王江廖晖; 关键词：前列腺肿瘤抑癌基因

Cyclin D_1基因沉默诱发肾癌ACHN细胞增殖受抑的研究: 2010年; 目的证实Cyclin D1基因作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性及发卡环RNA(shRNA)表达载体介导该基因沉默的有效性。方法设计合成Cyclin D1-shRNA模板片段,与Pgenesil-1-U6载体连接,构建shRNA真核表达载体;将Pgenesil-Cyclin D1-shRNA转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western blot分析Cyclin D1基因mRNA及蛋白表达;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞凋亡率;Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭。结果Pgene-sil-Cyclin D1-shRNA构建成功。Cyclin D1-shRNA实验组Cyclin D1mRNA抑制效果显著(0.10±0.04),明显高于Pgenesil-NC阴性对照组(0.92±0.03)及ACHN空白对照组(0.94±0.04)(均P<0.05)。同样,实验组Cyclin D1蛋白表达明显下调。流式细胞术分析提示,Cyclin D1-shRNA组细胞早期及晚期凋亡细胞均较Pgenesil-NC组和ACHN组显著增高。生长曲线显示Cyclin D1-shRNA组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell实验同样发现该组细胞侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论Cyclin D1可作为肾癌ACHN细胞生物学行为的评判标准。经载体介导shRNA干扰的高效性为肾癌基因治疗提供了实验依据。; 王江郭风劲陈安民袁林杨彩虹; 关键词：RNA干扰细胞周期蛋白D1 增殖

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袁林

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