赵国栋
- 作品数：17 被引量：56H指数：5
- 供职机构：苏州大学医学部基础医学与生物科学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家重点基础研究发展计划江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 野桑蚕谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)基因的诱导表达定量分析被引量：6
- 2010年
- 谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为了从分子水平上探究野桑蚕Bombyx mandarina对杀虫剂抗性的产生机理,本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法,对GSTs基因在正常饲养野桑蚕5龄幼虫及用敌敌畏和溴氰菊酯处理5龄幼虫不同组织中的转录水平进行检测,并采用Actin3内源参照基因对检测结果进行归一化处理。结果表明:用敌敌畏和溴氰菊酯处理5龄幼虫24h后,GSTs基因在各组织中的诱导转录水平存在差异,但GSTs基因在脂肪体中的诱导转录水平最高,其次为中肠,可能与这2种组织是野桑蚕主要的解毒器官有关。其中,GSTe2和GSTe5基因诱导转录水平相对较高,推测这2个基因可能主要参与野桑蚕对外源物质的解毒代谢。
- 赵国栋卫正国张轶岭高瑞娜王瑞娴张婷李兵沈卫德
- 关键词：野桑蚕实时荧光定量PCR
- 芸香苷对家蚕谷胱甘肽-S-转移酶部分基因的诱导表达被引量：5
- 2011年
- 谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferases,GSTs)是对一种机体的解毒代谢起重要作用并可以被诱导的酶系。为了从分子水平上探究家蚕Bombyx mori GSTs基因与植物次生物质芸香苷代谢的关系,本实验采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,用5×10^(-1),5×10^(-2),5×10^(-3) ng/μL 3个浓度芸香苷溶液处理家蚕5龄幼虫,并对各组织中GSTs Epsilon家族不同基因的转录水平进行检测。结果显示,浓度为5×10^(-2) ng/μL的芸香苷溶液能诱导GSTs基因的转录水平发生显著变化。在中肠中,BmGSTe1,BmGSTe2和BmGSTe6的诱导转录水平较高,在诱导后24 h达到最大值;在脂肪体中BmGSTe1,BmGSTe6和BmGSTe7的转录水平相对较高且分别在诱导后2 h,2 h和4 h达到最大值;而GSTs基因在马氏管中表达量均很低或者检测不到表达。与5×10^(-2) ng/μL浓度相比,5×10^(-1)ng/μL的芸香苷溶液诱导后各基因的转录水平上升的幅度较小并且达到峰值的时间不同,而5×10^(-3) ng/μL浓度的芸香苷溶液并不能使GSTs基因的诱导转录水平发生变化。结果提示,家蚕GSTs Epsilon家族基因对芸香苷的代谢具有重要作用。
- 张婷卫正国高瑞娜王瑞娴赵国栋李兵沈卫德
- 关键词：家蚕芸香苷
- 芸香苷诱导的家蚕基因BmGSTd1基因转录水平
- 荧光定量PCR ( real-time quantitative PCR, qPCR )因灵敏度高，定量准确等特点， 已广泛应用于基因表达分析。利用合适的参照基因对qPCR 数据进行校正处理是确保该方 法分析准确性的关键...
- 卫正国张婷高瑞娜王瑞娴赵国栋李兵沈卫德
- 关键词：实时荧光定量PCR家蚕芸香苷
- 家蚕解毒酶基因表达调控研究
- 在自然界中，生物体不断地与外界环境进行物质交换，以满足自身的生长、发育和生存需要。在这些物质中，有些是为了满足生物体营养所需，对生物体是有益的;有些却对生物体的生命有危害。为了生存，生物体必须具备一定的生理、生化，甚至是...
- 赵国栋
- 关键词：家蚕生理功能
- 文献传递
- 家蚕蜕皮激素受体基因EcR-A的启动子活性区域分析
- 2014年
- 昆虫蜕皮激素(20-羟基蜕皮酮)与蜕皮激素受体(EcR)和超气门蛋白(USP)相互作用启动蜕皮级联反应过程,由EcR和USP组成的复合物是蜕皮激素的作用靶标。为研究家蚕EcR-A基因(Bm EcR-A)的转录调控机制,利用双荧光素酶报告系统和Bac-to-Bac表达系统制备含5'端长度不同Bm EcR-A基因启动子片段的重组杆状病毒,分别将重组杆状病毒感染家蚕后检测启动子的活性。结果表明,在Bm EcR-A启动子的-637^-518 bp和-278^-177 bp区域存在正调控元件,并且能被0.002 g/L 20E诱导。通过构建含5'端长度不同Bm EcR-A启动子片段的荧光素酶报告质粒,在细胞水平上进一步分析Bm EcR-A启动子活性区域,结果显示:在-637^-612 bp和-278^-177 bp区域包含Bm EcR-A基因启动子转录调控必需的重要调控元件;当删除-197^-177 bp区域后,启动子活性明显增强,推测在该区域可能含有一个转录抑制因子结合位点。研究结果提示:上述启动子区域包含有转录调控元件的结合位点,是进一步研究Bm EcR-A启动子核心区域的重要线索。
- 杜杰黄明霞刘云垒赵国栋卫正国沈卫德
- 关键词：家蚕启动子活性
- 蜕皮激素诱导下家蚕CYP3基因家族的表达变化被引量：3
- 2010年
- 为了研究家蚕Bombyxmori CYP3家族基因经蜕皮激素诱导后的表达变化,用蜕皮激素溶液(2×10-3μg/μL)浸泡的桑叶喂食家蚕B.mori5龄幼虫,以不用蜕皮激素处理的桑叶喂食家蚕为对照,采用双跟踪标定定量PCR(dual-spike-in qPCR)方法,检测在蜕皮激素诱导下家蚕中肠和脂肪体内CYP3基因家族的转录水平。结果表明:与对照相比,在蜕皮激素诱导下家蚕幼虫体内脂肪体中CYP302,CYP306和CYP339的转录水平分别上升了191.4,7.4和421倍,在中肠中变化不显著;其余基因转录水平变化不明显或检测不到转录活性。结果说明CYP339基因有可能参与家蚕蜕皮激素的代谢,这为进一步研究P450基因与内源物质的关系提供理论基础。
- 高瑞娜卫正国张婷王瑞娴赵国栋李兵沈卫德
- 关键词：家蚕蜕皮激素转录水平
- 家蚕内参基因表达稳定性的分析
- 基因组时代，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT - PCR）已经成为快速，灵敏检 测基因表达水平的优质方法。为了去除不同标本在RNA的产量、质量以及逆转录效率上可 能存在的差别而导致目标基因特异性表达的差异,通常选择一定的...
- 卫正国万小玲彭然高瑞娜王瑞娴赵国栋李兵沈卫德
- 关键词：实时荧光定量PCR家蚕
- 家蚕幼虫不同龄期体内主要解毒酶及其基因表达的性别差异被引量：10
- 2010年
- 为了研究家蚕Bombyx mori性别与抗性的关系,本研究采用Thermo酶活性测定法和实时荧光定量PCR法,比较不同龄期雌雄家蚕起蚕体内解毒酶活性及其基因的表达差异。结果表明:解毒酶及其基因在雌雄个体之间均存在明显差异,谷胱甘肽S-转移酶活性及其基因BmGSTe5的表达量在1～3龄表现为雌蚕高于雄蚕,4龄和5龄则表现相反,其中4龄雄蚕酶活性和基因表达量分别是雌蚕的3.65倍和5.11倍,推测与雄蚕精巢在4龄初迅速发育有关。雄蚕乙酰胆碱酯酶活性在2～4龄分别是雌蚕的1.48,1.34和1.40倍;乙酰胆碱酯酶基因Bm-ace1在2龄和3龄性别差异不明显,Bm-ace2在2～4龄为雄性高于雌性,雄性分别是雌性的1.75,2.17和2.40倍,提示Bm-ace2对性别间该酶活性的差异影响较大。羧酸酯酶活性在2龄和3龄雄蚕较高,分别是雌蚕的1.23和1.87倍,4～5龄雌蚕较高,分别是雄蚕的1.23和1.22倍;羧酸酯酶基因BmCarE-5和BmCarE-10在性别间的差异规律均与酶活性相反,即羧酸酯酶表现为较高的基因表达量对应较低的酶活性,推测在家蚕体内可能存在"羧酸酯酶突变"现象。结果为研究基因表达产物的修饰方式及其功能开辟了新的研究路径,为家蚕性别与抗药性的研究提供了重要参考。
- 刘海涛李兵赵国栋张婷高瑞娜卫正国沈卫德
- 关键词：家蚕解毒酶基因表达
- 家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)的诱导表达定量分析被引量：8
- 2010年
- 谷胱甘肽-S-转移酶(GST)在机体的解毒代谢和抗氧化中起重要作用。为探究家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)在家蚕体内的解毒和抗性功能,采用实时荧光定量PCR方法,对BmGSTd1基因在正常饲养及添食NaF家蚕5龄幼虫不同组织中的转录水平进行检测,并采用家蚕Actin3、GAPDH、28S rRNA 3种内参照基因对检测结果进行归一化处理。BmGSTd1基因在家蚕5龄幼虫各组织的转录水平存在差异,且采用不同内参照基因结果不一致:分别以家蚕Actin3、GAPDH、28S rRNA基因为内参照,该基因转录水平最高的组织分别为中肠、丝腺、脂肪体。5龄第2天幼虫添食NaF对体内各组织中BmGSTd1基因的转录水平具有诱导作用,且在不同组织中诱导表达的情况不同,采用以上3种内参照基因进行归一化处理的结果数据表明,中肠和脂肪体组织中的诱导转录水平最高,可能与这2种组织是家蚕主要的解毒器官有关。研究认为,检测基因在不同组织中的转录水平,采用合适的内参照基因对保证检测结果的可靠性非常重要。
- 赵国栋卫正国李兵沈卫德
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 家蚕羧酸酯酶基因BmCarE-9的鉴定与表达分析
- 2011年
- 羧酸酯酶是一个多功能超家族酶类,为研究羧酸酯酶基因在家蚕Bombyxmori组织中的功能,利用5′/3′RACE和RT-PCR方法克隆了一个家蚕羧酸酯酶基因BmCarE-9,其GenBank登录号为EU523534。该基因含有一个1 680 bp的ORF,编码559个氨基酸。BmCarE-9预测的分子量64.2 kD,等电点7.13,结构分析表明BmCarE-9存在一个类似的催化三联体,其中两个残基发生改变。利用实时荧光定量PCR方法研究了该基因在家蚕5龄第3天幼虫不同组织以及在5龄期各日龄幼虫丝腺组织中的表达水平。结果表明,该基因在丝腺中特异性高表达,且主要在中部和后部丝腺中表达。该基因在5龄期随着丝腺的生长发育表达量逐渐增高,到末期表达水平逐渐降低。据此推测该基因可能与丝腺的生长发育或丝蛋白的合成相关。
- 林超李兵王东赵国栋卫正国陈玉华沈卫德
- 关键词：家蚕丝腺实时荧光定量PCR
