辛颖
- 作品数：11 被引量：8H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生水利工程更多>>
- TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用
- 本发明TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述四聚体库的构建包括构建TALE单个重复单元、构建TALE单体质粒以及在T4DNA连接酶缓冲液中加入TALE单体质粒...
- 张智英张志强李铎辛颖麻丽霞王昕张涛徐华荣
- 文献传递
- 慢病毒活体介导精原干细胞生产转基因小鼠被引量：2
- 2014年
- 【目的】用慢病毒在体内感染精原干细胞,建立转基因动物生产技术平台。【方法】用三质粒慢病毒载体系统转染293T细胞包装慢病毒,转染后裂解细胞,收集携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒。将慢病毒液注射到小鼠曲细精管,获得F0代小鼠,制备小鼠睾丸组织切片,进行免疫双荧光检测。将F0代小鼠与野生型母鼠交配,获得F1代小鼠,PCR检测F1代是否为转基因小鼠。【结果】通过裂解细胞的方法成功制得慢病毒,将其注射到小鼠曲细精管,获得了10只F0代小鼠,经免疫双荧光检测,发现慢病毒可在活体上感染精原干细胞。8只F0代小鼠与野生型母鼠交配后共获得了41只F1代小鼠,经PCR检测,21只携带慢病毒基因片段,转基成功率为51.22%,表明慢病毒介导的基因改造是可遗传的。【结论】建立了一种操作简单、花费少、易于实施的慢病毒活体介导精原干细胞生产转基因小鼠的技术体系,该技术也可以推广到其他动物上,对于加速功能基因鉴定、疾病模型构建和家畜转基因育种等领域的研究有促进作用。
- 辛颖张涛张涛张优优
- 关键词：慢病毒活体精原干细胞转基因小鼠
- 一种由PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体、其构建方法及其应用
- 本发明是一种由PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体、其构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述载体为PB-rtTA-NIT-STP，是通过下述方法构建：LoxP-SV40P nco-IRES-tk-P...
- 张智英张婷婷辛颖杨涵江张志强徐坤王令
- 文献传递
- PiggyBac转基因载体的构建及检测
- 本研究应用重叠PCR技术，以小鼠胚胎干细胞CESC)为研究材料，制备转基因小鼠，研究在转基因过程中多基因表达及标记基因删除的可行性。
- 张婷婷辛颖张志强杨涵江张智英
- 关键词：基因载体胚胎干细胞转基因技术
- 文献传递
- 一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法被引量：2
- 2012年
- 尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。
- 冉竞超曹文广孙红艳王令辛颖张智英
- 关键词：成年小鼠精原干细胞支持细胞间质细胞
- 大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA与orfC重组腺病毒的制备及应用
- 2012年
- 【目的】扩增大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC,制备orfA和orfC重组腺病毒,并感染Hela229和SPC-A-1细胞,以检测orfA和orfC对肿瘤细胞的影响。【方法】从pWDSV全长表达载体中扩增WDSV辅助基因orfA和orfC,构建orfA和orfC基因的重组腺病毒载体以及对照空载体,采用脂质体介导法转染HEK293细胞进行包装和扩增,用绿色荧光蛋白法测定重组腺病毒的滴度;将重组腺病毒转染肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1,采用Weastern Blot方法检测基因orfA和orfC的表达情况,并用MTT法检测其对肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的影响。【结果】PCR扩增获得了891bp的orfA基因和360bp的orfC基因,成功构建了对照空载体pAdEasy-l-CK和含有orfA和orfC基因的腺病毒载体pAdEasy-l-orfA和pAdEasy-l-orfC,转染HEK293细胞并进行包装后获得了重组腺病毒Ad-CK、Ad-orfA和Ad-orfC,用Hela229细胞测得其滴度分别为5.67×109,2.00×109和7.33×108 GFU/mL。重组腺病毒对肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的生长具有抑制作用。【结论】初步证明了orfA和orfC基因对人类肿瘤细胞Hela229和SPC-A-1的生长具有抑制作用,为进一步研究WDSV辅助基因对人类肿瘤的影响以及肿瘤萎缩的分子机理奠定了基础。
- 张优优徐坤王亮亮张婷婷辛颖任充华闫强张智英
- 关键词：重组腺病毒肿瘤
- 施钾对塿土土壤质量演变及作物产量的影响
- 不施或少施钾肥是西北旱地富钾农田习惯施肥模式,但势必加剧区域土壤钾素赤字,影响农田可持续利用。针对当前不同钾肥管理下土壤质量演变特征不明及作物产量变化不清等问题,本研究依托国家黄土肥力与肥料效益监测基地长期定位试验（不施...
- 辛颖
- 关键词：酶活性PLFA
- PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测
- 2012年
- 【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。
- 张婷婷辛颖张志强任充华杨涵江王令张智英
- 关键词：SV40PIGGYBAC转座子
- 小鼠精原干细胞不同转染方法效率的比较被引量：2
- 2014年
- 本研究采用腺病毒感染、慢病毒感染、脂质体转染和电穿孔转化方法将含有绿色荧光蛋白(GFP)的质粒转入经过差异贴壁法初步分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)中,转染48 h后通过流式细胞仪检测GFP阳性细胞比例比较4种方法在体外转染精原干细胞的效率.结果显示,脂质体转染效率最高仅为8.64%,不能满足对精原干细胞进一步实验的要求;电穿孔法效率最高达到25.27%,但转化后细胞大量死亡;腺病毒转染细胞的效率达到了32.4%;慢病毒转染效率最高,达到74.25%.因此,慢病毒转染法是体外转染小鼠精原干细胞的有效方法.
- 辛颖张志强安宁张涛张建峰张智英
- 关键词：转染效率
- 一种开源方式筛选靶向结合人DYRK1A基因靶位点的锌指蛋白的方法
- 本发明一种开源方式筛选靶向结合人DYRK1A基因靶位点的锌指蛋白的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：(1)3个锌指蛋白库的构建；(2)报告载体和报告菌株的构建；(3)有效锌指库的筛选；(4)有效锌指库的连接、组装；...
- 张智英李战伟杨涵江任刚王令张存芳张婷婷王瑞贾杰只雷洁李亚明支旭勃韩新艳辛颖
- 文献传递
