陶洁
- 作品数：72 被引量：168H指数：7
- 供职机构：上海市农业科学院更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目引进国际先进农业科技计划江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 上海地区猪星状病毒流行监测及病原生物学特性研究
- 李本强陶洁程靖华马玉飞刘雷刘惠莉
- 猪7种腹泻相关病毒的临床检测及猪嵴病毒的遗传进化分析被引量：20
- 2017年
- 为了解引起猪腹泻疫病的病毒性病原种类及感染现状,本研究首先针对7种报道较少但可引起猪腹泻的病毒性病原建立了多重RT-PCR检测方法,包括猪捷申病毒(PTV)、猪萨佩罗病毒(PSV)、猪丁型冠状病毒(PDCo V)、猪嵴病毒(PKV)、猪札幌病毒(PSa V)、猪星状病毒(PAst V)和猪环曲病毒(PTo V)。利用该方法对419份临床腹泻粪便样品进行筛检,结果显示PKV检出率最高,阳性率达26.98%–45.79%;PKV和其他病原混合感染率达9.52%–18.54%。基于PKV的高检出率及其可能在猪腹泻疾病中发挥的作用,本试验进一步选取3个PKV阳性样品进行全基因组序列测定及遗传进化分析。结果表明,这3个阳性样品PKV均归属于猪嵴病毒属,且与其他动物嵴病毒遗传距离较远,分别标记为CM-PKV、JS-PKV和PD-PKV;它们的全基因组同源性为88.1%–89.1%;CM-PKV与2013年报道的中国株JS-02a-CHN/2013同源性最高,而JS-PKV和PD-PKV则与2008年报道的匈牙利株K-30-HUN/2008/HUN同源性最高。表明上海不同地区猪群中存在的PKV有明显的遗传差异,但毒株遗传特性的差异与其致病力的相关性需进一步研究。本研究为深入了解PKV的流行现状及探讨其在猪腹泻疫情中的作用提供了参考。
- 孟丽陶洁李本强马玉飞程靖华张春玲刘惠莉
- 关键词：多重RT-PCR全基因组序列遗传进化分析
- 猪流行性腹泻病毒S2蛋白间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：3
- 2021年
- 本研究基于猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S2截短蛋白,建立了特异性Ig G抗体的间接ELISA检测方法,用于临床PEDV特异性抗体水平的监测。前期筛选了富含中和表位的S2截短基因,体外表达后作为ELISA包被抗原,用于捕获PEDV Ig G抗体,以山羊抗猪HRP-Ig G作为二抗,通过条件优化,建立了检测猪血清中PEDV Ig G抗体的间接ELISA方法。最佳反应条件为:S2抗原蛋白的最佳包被浓度为2μg/m L,临床血清样品和酶标二抗的最佳稀释倍数分别为1∶400和1∶20000。该方法的批内和批间重复变异系数(CV)分别为1.81%~8.52%和1.18%~7.41%,重复性较好;该方法检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性血清时结果均为阴性,特异性较强。该方法与商品化PEDV抗体检测试剂盒相比较,阳性符合率为95.18%,阴性符合率为91.43%,说明该方法可用于临床血清抗体筛查。进一步利用此方法对324份猪的临床血清样品进行检测,发现PEDV抗体阳性血清占62.96%,与临床现状基本吻合。上述结果表明,该方法适用于临床猪群中PEDV Ig G抗体水平普查,为PEDV的疫病防控及灭活疫苗评价提供了有效的技术支持。
- 王亚涛王亚涛陶洁程靖华李本强刘惠莉
- 关键词：猪流行性腹泻病毒间接ELISAIGG
- 猪流感病毒NS1蛋白关键磷酸化位点对其拮抗干扰素的影响
- 程靖华陶洁李本强张春玲刘惠莉
- 不同动物源大肠杆菌gapA看家基因的克隆及序列比较被引量：4
- 2013年
- 3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH/G3PDH)是糖酵解反应的关键酶,为生命体的各种生命活动提供能量。在大肠杆菌中,GAPDH由看家基因gapA编码。本研究对不同动物源的大肠杆菌菌株(包括禽源致病性大肠杆菌(APEC)分离株O1和CE129、人源肠致病性大肠杆菌(EPEC)菌株738、人源益生菌Nissle1917和猪源表达F18菌毛大肠杆菌标准株F107/86的gapA基因进行PCR扩增、克隆测序,并与GenBank中8株菌株序列比较,发现其核酸序列虽有少数位点的突变,但是氨基酸序列仍保持完全一致,从分子基础上保证了GAPDH的酶活性。本研究验证了原核病原微生物,尤其是大肠杆菌gapA基因转录翻译的GAPDH蛋白的高度保守性,为制备大肠杆菌专用内参蛋白抗体提供可能,并进一步为对致病性大肠杆菌的蛋白代谢通路和合成生物学研究提供了基础材料。
- 朱丛睿周明旭陶洁朱国强
- 关键词：3-磷酸甘油醛脱氢酶克隆
- 猪萨佩罗病毒VP1蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：2
- 2021年
- 为建立猪萨佩罗病毒(PSV)的快速检测方法,本试验以重组VP1蛋白为包被抗原建立了检测PSV Ig G的间接ELISA方法。RT-PCR从PSV分离株SHCM2019中扩增VP1基因,将其克隆到原核表达载体p ET28a,对重组质粒pET28a-VP1进行原核表达,经Western-blotting检测后,利用VP1重组蛋白建立检测猪血清中PSV Ig G抗体的间接ELISA方法。结果显示,表达的VP1蛋白分子质量约为40 ku,与预期大小相符,Western-blotting表明,重组蛋白与PSV抗体阳性血清具有良好反应原性。以VP1蛋白为抗原建立的ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的阳性血清均无交叉反应,特异性好;批内和批间的变异系数均小于10%,重复性好。利用建立的间接ELISA方法对95份猪临床血清样本进行检测,阳性率为44.21%。本研究建立的检测方法为PSV的血清学诊断提供了可靠手段。
- 李娜娜李娜娜陶洁李本强程靖华程靖华刘惠莉
- 关键词：VP1蛋白原核表达间接ELISA
- 猪源牛病毒性腹泻病毒SH-28分离株的全基因组序列及遗传进化分析被引量：3
- 2013年
- 为了解猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)与牛源BVDV在遗传特性上的差异,本试验对实验室分离保存的1株猪源BVDV(SH-28)进行了全基因组测序。利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分段扩增了SH-28分离株的18条cDNA片段,分别克隆于pGEM-T质粒载体并进行测序,用CLUSTX(1.8)和Lasergene软件进行序列的剪切和拼接,最终获得SH-28基因组序列全长为12 279个核苷酸(nt),开放阅读框(ORF)长11 685nt,编码3 895个氨基酸(aa),5′-UTR和3′-UTR分别长385nt和206nt。全基因组进化树结果表明,虽然SH-28与HLJ-10同处于一个分支上,但其与XJ-04的全基因组核苷酸同源性最高(92.3%),而与另外2株猪源BVDV-1(ZM-95、SD0806)的亲缘性较远(70.0%、70.1%)。5′-UTR进化树结果显示,SH-28分离株属于BVDV-2a2基因亚型,而HLJ-10和XJ-04株属于BVDV-2a1。由此,我们推测SH-28很有可能是由牛源BVDV-2进化而来的,但不同于已发表的BVDV-2分离株。
- 陶洁王银廖金虎杨颖羊扬朱国强
- 关键词：BVDV同源性
- 一种口服免疫喷枪
- 本实用新型公开了一种口服免疫喷枪，包括喷枪本体，所述喷枪本体的上端设有疫苗瓶，所述喷枪本体的正面设有显示窗，所述喷枪本体的右端固定连接有手柄，所述喷枪本体的正面右侧对称设有控制按钮，所述喷枪本体的上端右侧设有蓄电池，所述...
- 刘惠莉李本强陶洁程靖华石迎林鸷乔长涛
- 一种自带伸缩型棉签的一体化样品采集管
- 本发明提供一种自带伸缩型棉签的一体化样品采集管。所述自带伸缩型棉签的一体化样品采集管包括采样管，管盖，所述管盖安装在所述采样管上；支撑管，所述支撑管安装在所述管盖上，且所述支撑管贯穿所述管盖；连接杆，所述连接杆滑动密封安...
- 刘惠莉陶洁李本强程靖华石迎林鸷乔长涛
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白富含表位区域的原核表达与鉴定被引量：2
- 2017年
- 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是引起猪腹泻的重要病原之一,给世界养猪业带来严重危害。本研究对PEDV分离株JS-2纤突蛋白(S)进行抗原表位分析,选择3个富含表位片段的区域。通过RT-PCR扩增基因序列,克隆入p ET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中并进行诱导表达,SDS-PAGE电泳显示,成功表达了3个重组蛋白,分子质量与预期大小一致。将蛋白进行割胶回收,与油佐剂乳化后免疫小鼠,制备超免疫血清,利用PEDV包被抗原进行ELISA检测,结果免疫小鼠血清D450值达1.0左右,证实筛选制备的重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。
- 常宏赏陶洁张春玲李本强程靖华刘惠莉
- 关键词：猪流行性腹泻病毒免疫原性
