马琳娜
- 作品数：12 被引量：48H指数：5
- 供职机构：宁夏医科大学检验学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MMP-9 DNA甲基化变化在ApoE^(-/-)小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响被引量：3
- 2012年
- 目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)DNA甲基化变化在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)C57BL/6J小鼠肾脏中的作用及高蛋氨酸饮食的影响。方法将ApoE-/-小鼠随机分成模型组、高蛋氨酸组和叶酸及维生素B12治疗组,并设正常C57BL/6J小鼠为正常对照组,喂养14周后采血,分离肾脏。全自动生化分析仪检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、尿素(Urea)和肌酐(Cr)水平;免疫组织化学法分析肾脏MMP-9蛋白表达;荧光定量RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)和降落式PCR检测MMP-9 DNA甲基化变化程度。结果模型组血清Hcy、Urea、Cr浓度均明显升高,MMP-9甲基化程度降低,mRNA和蛋白表达增强(均P<0.05),与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高蛋氨酸组各项指标变化较模型组更为明显(均P<0.05);而叶酸及维生素B12治疗组MMP-9 mRNA和蛋白表达减少,甲基化程度升高(P<0.05)。结论 MMP-9 DNA甲基化变化可能是ApoE-/-小鼠高蛋氨酸饮食致肾功能损伤的重要机制之一。
- 梁宇马琳娜杨晓玲王菊巩慧慧姜怡邓
- 关键词：基质金属蛋白酶-9DNA甲基化
- 小鼠组织SAM和SAH在动脉粥样硬化评价中的应用被引量：1
- 2012年
- 目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl Homocysteine,SAH)和S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosyl-methionine,SAM)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)评价中的应用。方法采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测各组ApoE-/-小鼠(模型对照组、高蛋氨酸饮食组、叶酸和维生素B12治疗组)心脏、肝脏、肾脏组织中SAM和SAH含量的变化,并与正常对照组比较。HE染色光镜观察各组主动脉病理学改变。结果 HPLC实验数据表明,正常对照组、模型对照组、高蛋氨酸饮食组的小鼠心脏、肝脏、肾脏组织中SAM、SAH的含量依次增加,治疗组小鼠心脏、肝脏、肾脏组织中SAM、SAH的含量则有所降低,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,肾脏高蛋氨酸饮食组SAM、SAH含量差异有统计学意义(P<0.05),治疗组肝脏、肾脏SAM、SAH含量差异有统计学意义(P<0.01)。与高蛋氨酸饮食组比较,肝脏、肾脏治疗组SAM、SAH含量有明显差异(P<0.01)。同时,HE染色显示高蛋氨酸饮食组主动脉AS的病理改变明显。结论 SAM、SAH含量升高可能是高蛋氨酸饮食促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化发生的重要机制之一。
- 梁宇廖国玲马琳娜曹成建姜怡邓
- 关键词：S-腺苷同型半胱氨酸S-腺苷甲硫氨酸APOE-/-小鼠
- 基因组DNA甲基化在同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的作用机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨基因组DNA甲基化变化在Hcy致VSMCs增殖的作用机制。方法原代培养VSMCs并鉴定,用0、50、100、200、500μM浓度Hcy干预,MTT法检测VSMCs活性;SssI甲基转移酶法分析基因组DNA甲基接受能力,甲基化敏感性限制性内切酶法分析基因组DNA甲基接受能力及DNA甲基转移酶活性。结果 MTT法表明在50μM Hcy时,VSMCs活性明显增加,其余活性下降,与各浓度组并不呈量效依赖关系;Hcy可增加DNA甲基接受能力,以50μM Hcy组效应最显著(P<0.05);HpalI限制核酸内切酶消化,与对照组比较,基因组DNA甲基化接受能力减少了50.1%、41.7%、46.1%和25.5%(50、100、200、500μM Hcy组),BssHII限制核酸内切酶消化后,基因组DNA甲基化接受能力减少了约25.5%、18.1%、17.4%和18.0%(50、100、200、500μM Hcy组)。结论 Hcy引起VSMCs基因组DNA去甲基化是平滑肌细胞增殖的重要机制之一,其效应偏重发生于CpG二核苷酸序列,CpG岛所受影响相对较小,其最大效应在50μMHcy组,且无明显的量-效依赖关系。
- 姜怡邓马琳娜韩学波王菊徐支芳于海娇
- 关键词：同型半胱氨酸平滑肌细胞增殖
- 同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞周期及P27和CyclinA表达的影响被引量：6
- 2011年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)生长周期的变化特点及P27和细胞周期素A(CyclinA)表达的影响。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、200、500 uM)、叶酸治疗组(Hcyl00 uM+叶酸30 uM),总计6组。以MTT检测VSMCs的增殖率,流式细胞仪测定细胞周期,R T-PCR和Western blotting测定P27和CyclinA基因mR NA及蛋白水平。结果不同浓度Hcy干预的VSMCs与空白对照组和叶酸治疗组相比:随着Hcy浓度的增加VSMCs增殖率增加,处于S及G0/M期的VSMCs比例亦逐渐增加;RT-PCR和Western blotting显示CyclinA mR NA与蛋白表达逐渐增加,P27 mRNA与蛋白表达逐渐降低;叶酸治疗组与空白对照组比所有结果均无明显变化。结论Hcy可通过调节P27和CyclinA mR NA水平,影响细胞周期各时相分布,从而促进VSMCs的增殖;叶酸对Hcy有拮抗作用。
- 于海娇马琳娜徐支芳孙炜炜巩慧慧马长剑姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸平滑肌细胞细胞周期P27CYCLINA
- HHcy对ApoE^(-/-)鼠动脉粥样硬化的影响及叶酸、VB_(12)的干预效应被引量：3
- 2011年
- 目的探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对ApoE-/-鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响及叶酸、维生素B1(2VB12)的干预效应。方法健康5周龄雄鼠(SPF级C57BL/6J)作为对照组,饲以普通饮食。另选5周龄雄性纯合子ApoE-/-鼠(SPF级近交系C57BL/6J)36只,随机平均分为高脂血症组、HHcy组、干预组。喂养14周后,取血测定血清Hcy及血脂水平,取主动脉进行石蜡包埋并切片,HE染色后检测主动脉斑块面积及内中膜厚度。结果 HHcy组血清同型半胱氨酸(Hcy)水平明显高于对照组与干预组(P<0.001),与对照组比较,其血脂LDL、TG、CHOL分别升高约2.2、7.6、7.2倍,HDL下降约63%(P<0.001)。HE染色可见三组ApoE-/-鼠均有AS斑块形成,HHcy组主动脉斑块面积6.21×105μm2明显大于高脂血症组3.99×105μm2与干预组4.41×105μm(2P<0.05)。AS斑块面积与其血清Hcy水平呈正相关(r=0.4898,P<0.001)。结论 HHcy导致ApoE-/-鼠AS病变形成,且病变程度依赖血清Hcy水平,叶酸和VB12的干预可有效缓解HHcy引起的血管损伤。
- 巩慧慧王菊孙炜炜马胜超马琳娜姜怡邓
- 关键词：叶酸维生素B12动脉粥样硬化
- 同型半胱氨酸致内皮细胞、平滑肌细胞和泡沫细胞低密度脂蛋白受体DNA甲基化的比较研究被引量：2
- 2011年
- 目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞、平滑肌细胞以及泡沫细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化的影响。方法原代培养内皮细胞、人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和单核细胞源性泡沫细胞,用0、50、100、200和500μM Hcy干预后培养72 h,提取基因组DNA,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法分别检测3种细胞中LDLR DNA甲基化修饰状态的变化,以观察Hcy对不同细胞LDLR的作用和影响。结果内皮细胞、VSMCs与不同浓度Hcy培养72 h后,LDLR基因启动子区DNA呈高甲基化改变,泡沫细胞LDLR启动子区DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且以50或100μM Hcy组最明显。结论 Hcy对不同细胞LDLR启动子区DNA甲基化的影响有差异性,提示可能存在更深层次的机制。
- 孙炜炜马琳娜徐支芳马长剑王菊巩慧慧姜怡邓
- 关键词：低密度脂蛋白受体DNA甲基化同型半胱氨酸
- 同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响及叶酸的拮抗作用被引量：15
- 2012年
- 目的探讨不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和细胞周期分布的影响及叶酸对Hcy的拮抗作用。方法正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为6组:空白对照组、不同浓度Hcy干预组(50、100、2005、00μmol.L-1)和叶酸治疗组(Hcy100μmol.L-1+叶酸30μmol.L-1)。应用MTT法及流式细胞仪检测各组VSMCs增殖率及细胞周期。结果随着Hcy浓度的增加VSMCs的增殖率增加;Hcy作用后VSMCs G0/G1期细胞数降低;S期和G2/M期细胞数增加,处于DNA合成期的细胞数明显增加,而叶酸治疗组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),叶酸治疗组与Hcy 100μmol.L-1组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hcy可通过对细胞周期的影响促进VSMCs的增殖,并在一定时间和浓度范围内呈明显的剂量依赖关系;叶酸对Hcy有拮抗作用。
- 于海娇徐支芳马琳娜吴梦莹姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸血管平滑肌细胞细胞周期
- 同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中ABCA1、ACAT1表达的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中三磷酸腺苷-结合转运子A1(ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT1)表达的影响。方法将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,并分别用50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+叶酸+维生素B12(Vit B12)干预72 h,并设对照组(不加入Hcy)。采用油红O染色检测泡沫细胞的形成。采用酶终点法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞CE流出的影响。采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ABCA1、ACAT1 mRNA表达;免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白表达。结果油红O染色显示Hcy加剧了泡沫细胞的形成,但不呈量效关系。实验组(加入50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+叶酸+Vit B12)泡沫细胞阳性百分率均高于对照组(P<0.05、P<0.01),以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01)。在Hcy的干预下,泡沫细胞胞内TC、FC、CE流出减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01)。100μmol/L Hcy+叶酸+VitB12组与100μmol/L Hcy组比较,前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多。RT-PCR结果显示ABCA1 mRNA表达下调,ACAT1 mRNA表达上调,均以100μmol/L Hcy组效应最为明显(P<0.01);免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白的表达与其mRNA表达一致。结论 Hcy下调了ABCA1的表达,上调了ACAT1的表达,促使了泡沫细胞形成。
- 马琳娜梁宇于海娇徐支芳王艳华姜怡邓
- 关键词：同型半胱氨酸
- LDLR DNA甲基化在Hcy致泡沫细胞形成中作用机制的研究被引量：2
- 2011年
- 目的探讨低密度脂蛋白受体(LDLR)DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞形成中的作用机制。方法原代培养单核细胞,采用佛波酯(PMA)和ox-LDL刺激复制泡沫细胞模型,用50、100、200、500μM Hcy干预72h,油红O染色半定量分析泡沫细胞数量,酶免法检测泡沫细胞中ox-LDL含量;同位素法测定LDLR活性,分析Hcy对LDLR的影响,巢式降落式PCR(nMS-PCR)法检测LDLR甲基化的变化,观察Hcy对LDLR的作用。结果泡沫细胞与0、50、100、200、500μM Hcy培养72h后,泡沫细胞数量明显增加,细胞中ox-LDL含量和LDLR活性明显增加,LDLR DNA呈低甲基化改变,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 Hcy引起泡沫细胞形成除了氧化应激外,LDLR DNA甲基化异常也可能是泡沫细胞形成和Hcy引起AS的又一重要机制。
- 姜怡邓马琳娜孙炜炜王菊梁宇
- 关键词：氧化低密度脂蛋白受体同型半胱氨酸
- TLR4/NF-κB信号通路在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用研究被引量：7
- 2011年
- 目的:Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)/核因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)在同型半胱氨酸(Homo-cysteine,Hcy)致动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)过程中损伤内皮细胞的作用机制。方法:体外培养原代人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),用0、50、100、200、500μmol/L Hcy和100μmol/L Hcy+30μmol/L(维生素B12+叶酸)分别与HUVECs培养72 h后,采用MTT法观察Hcy对HUVECs活性的影响;用分光光度比色法检测各组HUVECs中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD);酶免法检测NF-κB;荧光定量PCR和Westernblot分别测TLR4 mRNA和蛋白表达。结果:Hcy可抑制HUVECs的活性,各Hcy干预组与对照组比较细胞活性均降低,其中100、200、500μmol/L Hcy组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而其他组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);随Hcy浓度增加MDA和NF-κB含量和TLR4 mRNA和蛋白表达明显增加,而各实验组SOD活性明显降低,其中,100、200、500μmol/L Hcy组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其他组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TLR4/NF-κB可能是Hcy致HUVECs损伤的重要机制之一,其中MDA和SOD起了重要的作用。
- 徐支芳于海娇马琳娜巩慧慧梁宇姜怡邓
- 关键词：人脐静脉内皮细胞同型半胱氨酸TOLL样受体4核因子-ΚB
