鲍文娜
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 供职机构：浙江大学生命科学学院生物化学研究所更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- Bordetella sp.BK-52顺式环氧琥珀酸水解酶催化作用的分子机制研究
- D(-)-酒石酸主要应用于化工和制药行业,是重要的手性辅助剂、医药拆分剂、手性食品添加剂和手性营养物质添加剂。D(-)-酒石酸的传统生产方法是化学拆分法,近年来,采用经济环保的微生物转化法已逐步成为D(-)-酒石酸生产技...
- 鲍文娜
- 关键词：顺式环氧琥珀酸水解酶同源建模分子对接定点突变
- 文献传递
- 葡萄糖酸氧化杆菌木糖醇脱氢酶基因的克隆与表达(英文)被引量：1
- 2012年
- 【目的】获得葡萄糖酸氧化杆菌(Gluconobacter oxydans CGMCC 1.637)的木糖醇脱氢酶基因,研究其酶学性质及碳源特别是D-阿拉伯醇和木糖醇对该酶活性的影响。【方法】通过已报道序列的木糖醇脱氢酶的保守区设计引物,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增获得目的基因片段。根据获得的片段序列设计引物克隆目的基因的5'和3'片段,将所获得的片段拼接,获得完整的木糖醇脱氢酶基因。通过构建工程菌获得重组蛋白,并利用氧化还原反应测定重组酶的活性。用含不同碳源的培养基培养G.oxydans CGMCC 1.637,并测定其破胞上清液木糖醇脱氢酶氧化木糖醇的活性;用不同碳源培养的G.oxydans CGMCC 1.637转化木酮糖,用高效液相色谱法测定木糖醇的产量。【结果】获得一个新的798bp的木糖醇脱氢酶基因,所编码的木糖醇脱氢酶含265个氨基酸,属于短链脱氢酶家族。酶学性质研究发现,该木糖醇脱氢酶催化木糖醇氧化的最适合条件为35℃、pH 10.0,最高活性为23.27 U/mg,催化木酮糖还原为木糖醇的最适条件为30℃、pH 6.0。最高活性为255.55 U/mg;该木糖醇脱氢酶的对木糖醇的Km和Vmax分别为78.97 mmol/L和40.17 U/mg。碳源诱导实验表明,d-山梨醇对G.oxydans CGMCC 1.637木糖醇脱氢酶的活性有明显的促进作用,而葡萄糖、果糖、木糖、木糖醇、D-阿拉伯醇对木糖醇脱氢酶活性有明显的抑制作用。而在转化实验中,用d-甘露糖培养的G.oxydans CGMCC 1.637的转化能力明显高于其他碳源培养的G.oxydans CGMCC 1.637的转化能力,其中,用阿拉伯醇培养的G.oxydans CGMCC 1.637的转化能力最低,仅为对照的35%。【结论】克隆自G.oxydans CGMCC 1.637的木糖醇脱氢酶基因是一个新的基因,用阿拉伯醇培养的G.oxydans CGMCC 1.637破胞液木糖醇脱氢酶活性低;且阿拉伯醇对G.oxydans CGMCC 1.637木酮糖的还原能力具有抑制作用。
- 林燕清谢志鹏张建国鲍文娜潘海峰李博义
- 关键词：木糖醇脱氢酶木糖醇克隆
- 根瘤菌BK-20固定化细胞生产L(+)-酒石酸被引量：1
- 2014年
- 顺式环氧琥珀酸水解酶(CESH)是根瘤菌BK-20生产L(+)-酒石酸的关键酶。为提高其生产效率和生产稳定性,首先优化根瘤菌BK-20的产酶条件,然后利用固定化细胞连续生产L(+)-酒石酸。结果显示,优化后游离细胞酶活达(3 498.0±142.6)U/g,较优化前提高643%。固定化细胞酶活达(2 817.2±226.7)U/g,其最适包埋剂、菌体浓度和凝胶浓度分别为海藻酸钠,10%(W/V)和1.5%(W/V)。固定化细胞连续反应10批后,其形状和酶活均无明显改变,单批次转化率达98%以上,具有良好的生产稳定性。
- 兰翔鲍文娜潘海峰谢志鹏张建国
- 关键词：顺式环氧琥珀酸水解酶根瘤菌细胞固定化
- 乙醇脱氢酶的克隆表达及生物活性分析
- 人乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH，EC 1.1.1.1）是含锌原子NAD依赖的胞质二聚体酶，能可逆氧化各种醇为相应的醛酮，是乙醇代谢的关键酶。它可分成五大类，共七个基因，具有基因多态性、种...
- 鲍文娜
- 关键词：乙醇脱氢酶原核表达组氨酸标签
- 文献传递
- 人乙醇脱氢酶ADH1B2在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：1
- 2012年
- 根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物,以人肝脏总RNA为模板,反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接,测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115;重组毕赤酵母工程菌经0.5%(v/v)甲醇诱导72h后目的蛋白以可溶形式表达,经DEAE-Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8 000U.mg-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADH1B2转染HepG2人肝癌细胞,发现细胞内ROS/GSH水平降低,Akt磷酸化水平降低,细胞活性下降.为临床酒精中毒预防和治疗药物的研发以及ADH在肝脏肿瘤方面的研究提供了理论基础.
- 汤甜甜周亮吉鹏飞鲍文娜龚兴国
- 关键词：乙醇脱氢酶毕赤酵母AKT
