黄荣忠
- 作品数：18 被引量：13H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人EBLN-1基因cDNA全长核苷酸序列及其克隆方法
- 本发明公开了人EBLN-1基因的cDNA全长序列及其克隆方法。本发明通过5’RACE和3’RACE技术分别扩增了人EBLN-1基因cDNA的5’端片段和3’端片段并测序，再根据3’端序列、5’端序列及已知cDNA部分序列...
- 谢鹏张亮杨德雨雷阳黄荣忠
- 文献传递
- 一种触发型超声造影剂及其制备方法
- 本发明属于生物医药领域，涉及一种造影剂，具体涉及一种触发型超声造影剂及其制备方法。本发明的超声造影剂包括核壳型微粒，核壳型微粒包括外壳和核心；外壳包括成膜材料形成的壳膜，壳膜上镶嵌有金纳米颗粒，核心为液态氟碳。该触发型超...
- 孙阳王志刚黄荣忠冉海涛宫玉萍李攀任建丽邓黎明
- 文献传递
- 抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的制备并鉴定鼠抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体。方法重组核蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤并进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单克隆抗体并进行效价测定和特异性鉴定。结果建立了1株能稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F6E8,重链为IgG2a,轻链为κ。ELISA法测得腹水的效价高达1∶32 000以上。Western-blot和间接免疫荧光实验证实该单克隆抗体能特异性结合重组核蛋白及天然核蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的抗核蛋白单克隆抗体,为建立博尔纳病病毒血清免疫学检测方法奠定了基础。
- 徐晓艳金戈张亮李文娟邓婧马丽华黄荣忠房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体
- 乙酰化生物学研究进展
- 2014年
- 自从可逆性蛋白质乙酰化修饰发现以来,前30年的研究多局限于探索组蛋白乙酰化修饰参与染色质重塑和基因转录的调控,并发现了作用于组蛋白的乙酰转移酶(histone acetyltransferase,HAT)、去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)及去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACI)。近十年来,随着在细胞核外的细胞成分中发现乙酰化的非组蛋白及其相关的修饰酶,可逆性的乙酰化修饰在多种细胞生命过程中存在调控潜能逐渐得到认识。然而,复杂的生物学过程涉及到的蛋白质乙酰化修饰谱还不明确。由于技术的发展,目前已经可以在全蛋白质组学水平对乙酰化修饰进行鉴定和定量分析。这些研究结果揭示了乙酰化组学的复杂性,提出乙酰化修饰可能与磷酸化修饰一样普遍存在,并在生物学过程的调控中发挥着重要作用。全面的蛋白质乙酰化鉴定是一个有待继续探索的领域,将会提供更全面更有价值的蛋白质乙酰化修饰谱信息。
- 刘霞张亮黄荣忠王啸王明菊杨柳张陆军陈世刚谢鹏
- 关键词：乙酰转移酶去乙酰化酶去乙酰化酶抑制剂
- 抗博尔纳病病毒磷蛋白多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的制备抗博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)重组磷蛋白(p24)多克隆抗体,并对其进行鉴定,为BDV血清免疫学检测方法的建立奠定基础。方法用本课题组前期制备的重组BDVp24蛋白经背腿部多点皮下注射免疫新西兰大白兔,共免疫4次,末次免疫后第7天采血,分离血清,采用抗原亲和纯化法纯化抗血清,ELISA法测定抗血清效价;Western blot和免疫荧光鉴定其特异性。结果制备的抗BDV p24多克隆抗体的纯度为98%,ELISA效价达1∶128 000,该抗体与重组p24蛋白和BDV感染OL细胞表达的p24蛋白均能发生特异性反应。结论成功制备了灵敏性和特异性良好的抗BDV p24多克隆抗体,为研发相关的诊断试剂和研究该病毒的感染发病机制奠定了基础。
- 马丽华黄荣忠张亮徐晓艳曾粒刘钊邓婧李文娟谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类多克隆抗体
- 博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达及纯化
- 2011年
- 目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(p24蛋白)基因重组表达质粒,原核表达p24蛋白,并进行纯化。方法通过RT-PCR法从BDV感染的少突胶质细胞株(Oligodendrocyte,OL)中扩增p24基因片段,构建重组表达质粒pET-41a-p24,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达的重组蛋白进行亲和层析纯化。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET-41a-p24构建正确;表达的重组p24蛋白相对分子质量约24 000,表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式表达;纯化的重组蛋白纯度达85%左右,可与鼠抗BDV p24单克隆抗体特异性结合。结论已成功原核表达并纯化了重组BDV p24蛋白,为进一步建立BDV相关免疫学检测方法奠定了基础。
- 金戈张亮徐晓艳黄荣忠马丽华邓婧李文娟房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类原核细胞纯化
- 博尔纳病病毒对人少突胶质细胞增殖与凋亡的影响被引量：5
- 2012年
- 目的探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)感染对人少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)增殖与凋亡的影响。方法用BDV感染OL细胞,免疫荧光检测OL细胞中博尔纳病病毒P40蛋白的表达,CCK8测定法观察细胞的生长增殖情况,用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和周期变化,Western blot检测凋亡指标Bax、Bcl-2的相对表达量。结果与阴性对照组细胞比较,感染组在博尔纳病病毒感染少突胶质细胞第3天时,免疫荧光能够检测到P40蛋白的表达。随着感染时间的增加,BDV感染的OL细胞增殖能力下降(P<0.05),且通过流式细胞仪检测到病毒感染3 d后,细胞出现凋亡增多。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,感染细胞周期G2期延迟(P<0.05),细胞增殖指数降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,感染细胞促凋亡蛋白Bax表达量增加(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2表达量下降(P<0.05)。结论 BDV感染可以抑制OL细胞增殖,并能通过上调Bax蛋白及下调Bcl-2蛋白表达量,诱导细胞凋亡的发生。
- 邓婧李丹张亮黄荣忠李文娟马丽华房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞细胞增殖细胞凋亡
- 博尔纳病病毒p24和p40基因星形胶质细胞特异表达重组质粒的构建
- 2012年
- 目的构建星形胶质细胞特异性表达的博尔纳病病毒磷蛋白和核蛋白基因重组质粒,以供后续实验研究使用。方法用PCR方法扩增BDV p24和p40基因完整序列同时加入Nhe I和EcoR I酶切位点,将所得目的片段克隆至pMD18-T载体,再通过酶切连接将其连接至pCMvie-GFAP质粒中的GFAP启动子的下游,分别得到p24和p40重组质粒。用酶切、PCR以及测序3种方法鉴定重组质粒,并将质粒转染人胶质瘤细胞株(U251),采用免疫细胞化学方法检测目的蛋白表达。结果 pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带位置与预期相符,经测序可见插入序列正确,质粒转染U251细胞后,经免疫细胞化学检测到目的蛋白表达。结论成功构建了pCMvie-GFAP-BDVp24和pCMvie-GFAP-BDVp40星形胶质细胞特异性表达质粒,为研究这两种病毒蛋白的致病机制及其对星形胶质细胞的影响提供了工具。
- 李文娟张亮邓婧金戈黄荣忠房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒核蛋白磷蛋白星形胶质细胞
- 人内源性博尔纳样核蛋白-1的原核表达及纯化
- 2014年
- 目的原核表达人内源性博尔纳样核蛋白-1(endogenous Borna-like N element-1,EBLN-1),并进行纯化及鉴定。方法以人工合成的EBLN-1基因为模板,PCR扩增EBLN-1基因,克隆至载体pET-41a中,构建重组表达质粒pET-41aEBLN-1,转化大肠埃希菌BL21(DE3)和Rosetta中,分别于18℃和37℃下进行IPTG诱导表达。采用包涵体稀释复性法对表达蛋白进行复性,经His亲和层析纯化后,SDS-GAGE和Western blot法鉴定纯化产物。结果重组表达质粒pET-41a-EBLN-1经菌落PCR及测序鉴定构建正确。重组表达蛋白相对分子质量约48 000,以包涵体形式表达。在大肠埃希菌Rosetta中37℃诱导时表达量最高,占菌体总蛋白的30%以上,纯化后蛋白纯度可达90%,可与HRP标记的His探针特异性结合。结论成功表达并纯化了重组EBLN-1蛋白,为后续深入研究EBLN-1在人体中的生理作用及其与精神疾病的相关性奠定了基础。
- 吴迪金戈刘钊张亮黄荣忠杨德雨谢鹏
- 关键词：原核细胞基因表达纯化
- 两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型的建立被引量：3
- 2011年
- 目的构建两种博尔纳病病毒株持续感染的PC-12细胞模型,为研究博尔纳病病毒感染致病机制及比较两种病毒株致病特点的差别提供工具。方法将BDV Strain V株和Hu株分别感染PC-12细胞系,并进行传代培养,最后通过Real time FQ RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光方法进行病毒核酸和蛋白的检测。结果在培养传代6代后,两种病毒株感染的PC-12细胞均可检测到BDV核酸及蛋白。结论 BDV Strain V株和Hu株均可在PC-12细胞中复制和表达,两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型构建成功。
- 张亮刘霞黄荣忠马丽华金戈徐晓艳邓靖李文娟房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒病毒株细胞模型
