李文娟
- 作品数：23 被引量：52H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划重庆市自然科学基金重庆市卫生局医学科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学自动化与计算机技术更多>>
- HPLC测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶活性及体外动力学研究被引量：3
- 2012年
- 目的建立一种测定1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)高效液相色谱分析方法,并以1-氯-2,4-二硝基苯为探针测定大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性并进行体外动力学分析。方法色谱条件:Welch Materials UltimateTMXB C18反相柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL.min-1,柱温30℃,检测波长238 nm。实验方法:1-氯-2,4-二硝基苯与大鼠肝微粒体在37℃温孵7 min后,冰乙腈终止反应。反应液离心取上清液过滤后进行HPLC分析,通过Sigma Plot软件作图求算Vmax、Km及代谢清除率(CLint)值。结果 1-氯-2,4-二硝基苯的Rt=6.0 min,峰形良好,且无内源性干扰。最低检测限为1.0μmol.L-1,线性范围:2.5～100.0μmol.L-1。日内、日间精密度均小于10%。5 d内于室温及-20℃下较稳定。方法回收率为99.38%～108%。动力学分析表明,不同浓度1-氯-2,4-二硝基苯在0.02 mg.mL-1蛋白浓度下孵育7 min,测得动力学参数:Vmax为85.45 nmol.min-1.(mg protein)-1;Km为15.09μmol.L-1;CLlint为5.66 mL.min-1.(mg protein)-1。结论该方法稳定可靠,灵敏度高,能准确快速测定谷胱甘肽硫转移酶活性,可用于其体外动力学研究。
- 张有金于超郭延垒张艳辉杨竹李文娟
- 关键词：高效液相色谱法大鼠肝微粒体谷胱甘肽硫转移酶
- 抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体的制备和鉴定被引量：5
- 2012年
- 目的制备并鉴定鼠抗博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体。方法重组核蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤并进行有限稀释法克隆和亚克隆,建立分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化单克隆抗体并进行效价测定和特异性鉴定。结果建立了1株能稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为2F6E8,重链为IgG2a,轻链为κ。ELISA法测得腹水的效价高达1∶32 000以上。Western-blot和间接免疫荧光实验证实该单克隆抗体能特异性结合重组核蛋白及天然核蛋白。结论成功制备了效价高、特异性好的抗核蛋白单克隆抗体,为建立博尔纳病病毒血清免疫学检测方法奠定了基础。
- 徐晓艳金戈张亮李文娟邓婧马丽华黄荣忠房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒核蛋白单克隆抗体
- 两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型的建立被引量：3
- 2011年
- 目的构建两种博尔纳病病毒株持续感染的PC-12细胞模型,为研究博尔纳病病毒感染致病机制及比较两种病毒株致病特点的差别提供工具。方法将BDV Strain V株和Hu株分别感染PC-12细胞系,并进行传代培养,最后通过Real time FQ RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光方法进行病毒核酸和蛋白的检测。结果在培养传代6代后,两种病毒株感染的PC-12细胞均可检测到BDV核酸及蛋白。结论 BDV Strain V株和Hu株均可在PC-12细胞中复制和表达,两种博尔纳病病毒株持续感染PC-12细胞模型构建成功。
- 张亮刘霞黄荣忠马丽华金戈徐晓艳邓靖李文娟房亮谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒病毒株细胞模型
- 小儿牛黄清心散对热性惊厥大鼠止惊疗效的观察
- 目的观察小儿牛黄清心散对热性惊厥大鼠的止惊效果。方法取21日龄SD大鼠70只,随机分为蒸馏水对照组、安定组(2.632mg/kg/d)、苯巴比妥组(30mg/kg/d)、丙戊酸组(250mg/kg/d)、小儿牛黄清心散低...
- 陈小璐李文娟蒋莉
- 基于“Click”反应耦合酶的高灵敏葡萄糖生物传感器的研究被引量：2
- 2012年
- 采用葡萄糖氧化酶(GOD)为模板,利用"Click"反应固定,构建了新型葡萄糖生物传感器。首先,将碳纳米管叠氮化,并将GOD炔基化;在Cu^+的催化作用下,两者发生"Click"反应;在Nafion的作用下固定在玻碳电极表面,制得葡萄糖生物传感器。采用傅里叶红外光谱(FTIR)法对碳纳米管"Click"反应前后的性质进行了表征。采用循环伏安法和计时电流法考察了电极的电化学行为,并对传感器的性能进行了详细研究。结果表明:在优化的实验条件下,此电极对葡萄糖有明显的催化作用,电流与葡萄糖的浓度在6.0×10-7～1.4×10-3 mol/L范围内呈现良好的线性关系,检出限达2.0×10^(-7)mol/L。此传感器具有良好的灵敏度、稳定性和重现性。对血清样品中的葡萄糖进行检测,结果令人满意。
- 李文娟于超王应雄杨竹
- 关键词：生物传感器
- 黄芪甲苷通过抑制大鼠体内CYP1A2酶活性影响药物相互作用被引量：10
- 2012年
- 目的研究黄芪甲苷对大鼠体内CYP1A2酶活性的影响,阐明由CYP1A2酶所引发的药物相互作用可能性。方法采用色谱柱为waters-symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm I.D.,5μm);流动相为甲醇和水(体积比17∶83);检测波长=274 nm;柱温=30℃;流速=1 ml/min的色谱条件。7只SD大鼠随机分为2组,实验组3只预给予黄芪甲苷1周,对照组4只给予0.1%DMSO水溶液,第8天分别给予茶碱,通过高效液相色谱法测定探针药物茶碱的血药浓度,比较2组的动力学参数的差异来考察黄芪甲苷对CYP1A2酶活性的影响。结果茶碱、内标对乙酰氨基酚二者分离良好且无内源性干扰,茶碱的最低检测限80 nmol/L,线性范围0.2～50μmol/L,日内日间精密度均小于10%,提取回收率大于91%,实验组的动力学参数药物浓度-时间曲线下面积AUC(0-∞)(131.16±3.22)明显高于对照组(97.51±6.40),而体内总体清除常数CL/F(0.12±0.01)明显低于对照组(0.17±0.02)(P<0.05)。结论黄芪甲苷对大鼠体内CYP1A2酶活性有明显的抑制作用,临床用药中应尽量避免与由CYP1A2所代谢的药物联合应用。
- 张艳辉于超郭延垒张有金李文娟杨竹王应雄
- 关键词：CYP1A2黄芪甲苷茶碱
- 抗博尔纳病病毒磷蛋白多克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的制备抗博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)重组磷蛋白(p24)多克隆抗体,并对其进行鉴定,为BDV血清免疫学检测方法的建立奠定基础。方法用本课题组前期制备的重组BDVp24蛋白经背腿部多点皮下注射免疫新西兰大白兔,共免疫4次,末次免疫后第7天采血,分离血清,采用抗原亲和纯化法纯化抗血清,ELISA法测定抗血清效价;Western blot和免疫荧光鉴定其特异性。结果制备的抗BDV p24多克隆抗体的纯度为98%,ELISA效价达1∶128 000,该抗体与重组p24蛋白和BDV感染OL细胞表达的p24蛋白均能发生特异性反应。结论成功制备了灵敏性和特异性良好的抗BDV p24多克隆抗体,为研发相关的诊断试剂和研究该病毒的感染发病机制奠定了基础。
- 马丽华黄荣忠张亮徐晓艳曾粒刘钊邓婧李文娟谢鹏
- 关键词：博尔纳病病毒磷蛋白类多克隆抗体
- 以右美沙芬为探针测定大鼠肝微粒体中CYP2D6酶活性及动力学分析被引量：2
- 2013年
- 目的建立大鼠肝微粒体中细胞色素P450(CYP)2D6酶活性的检测方法,以右美沙芬为探针底物进行体外酶动力学分析,为相关药物代谢研究提供参考依据。方法采用高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)方法提高检测灵敏度。通过优化大鼠肝微粒体孵育体系的反应条件,建立稳定的动力学评价方法。以Graphpad prism 5.01软件绘制米曼动力学曲线并计算V_(max)与K_m值。结果右美沙芬与其代谢产物右啡烷分离良好且无其他内源性物质干扰。右啡烷检测限为5 nmol·L^(-1)(S/N>3),定量下限为0.015μmol·L^(-1),线性范围为0.015~7.5μmol·L^(-1)。测定方法重现性好且稳定。经优化条件后测定,不同浓度的右美沙芬在0.2 mg·mL^(-1)蛋白浓度下,孵育10 min,测得动力学参数V_(max)为(1.075±0.060)nmol·min^(-1)·mg^(-1)pro,K_m为(7.470±0.983)μmol·L^(-1)。结论高效液相色谱结合荧光检测法可以有效提高灵敏度,此大鼠微粒体孵育体系的建立可应用于体外CYP2D6酶活性的测定及酶动力学研究。
- 惠俊敏郭延垒杨竹李文娟王应雄于超
- 关键词：右美沙芬细胞色素P450CYP2D6
- 博尔纳病病毒感染人少突胶质细胞的代谢组学研究
- 背景 博尔纳病病毒(Borna disease virus，BDV)是单股负链非节段性有包膜的RNA病毒，有高度嗜神经性，BDV感染后在细胞内呈低拷贝复制，呈慢性持续感染状态，使细胞产生非溶解性病变，引起宿主细胞凋亡及...
- 李文娟
- 关键词：博尔纳病病毒少突胶质细胞代谢组学致病机制
- 以CDNB为探针测定大鼠肝微粒体中GST活性并优化反应体系被引量：2
- 2013年
- 目的以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为探针,优化大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)催化反应的条件,为准确测定GST活性提供依据。方法采用Welch Materials Ultimate TM XB C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL.min-1,检测波长238 nm。首先于0.05 mg.mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,检测CDNB能否被GST催化发生反应,然后分别在CDNB及CDNB+GSH两种反应条件下,比较不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度的反应差异,选出合理反应条件。结果 CDNB在选定色谱条件下实现了快速分离,且无内源性干扰。CDNB在GST催化下发生了反应;在不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度下,两种反应条件下CDNB反应存在明显差异(P<0.05):CDNB及GSH作为起始条件时反应较少,此外,CDNB反应量与蛋白浓度、孵育时间分别呈线性关系,是优化反应条件的重要依据。结论采用CDNB测定GST活性时,选择合适的CDNB及GSH反应条件能准确地测定GST活性,可用于GST活性测定及相关动力学分析。
- 张有金郭延垒张艳辉李文娟于超
- 关键词：高效液相色谱法大鼠肝微粒体谷胱甘肽硫转移酶
