刘准
- 作品数：6 被引量：28H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 表达PRRSV强弱毒Nsp2的Marc-145细胞系的建立及Nsp2蛋白对PRRSV复制的影响被引量：2
- 2012年
- 为探讨Nsp2蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的影响,采用体外克隆法构建表达高致病性PRRSV TJ株和其致弱毒TJM株Nsp2基因的真核表达质粒pEGFP-TJ Nsp2和pEGFP-TJMNsp2,含有增强式绿色荧光蛋白表达盒,瞬时转染重组质粒到Marc-145细胞系单层,利用G418抗性筛选建立细胞系,通过PCR和RT-PCR鉴定。PRRSV感染筛选的细胞系,检测病毒TCID50。结果建立稳定表达TJ株和TJM株Nsp2基因的猴肾细胞系Marc-145-TJ Nsp2和Marc-145-TJM Nsp2;在表达PRRSV TJ株和TJM株Nsp2蛋白的Marc-145细胞上感染PRRSV病毒,在复制早期病毒时增殖速度快,即Nsp2蛋白对PRRSV复制早期有正向调控作用,并且强毒的Nsp2此作用更明显。
- 王凤雪刘准温永俊冷雪李真光武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞系
- 高致病性PRRSVNsp2基因RNA干扰对病毒复制的影响被引量：4
- 2012年
- 旨在构建针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株Nsp2基因的siRNA的表达载体,研究Nsp2基因的表达抑制对PRRSV复制的影响。设计并合成针对PRRSV TJ株Nsp2基因的3对优势小发卡RNA(shRNA),连接到pRNAT-U6.1/Neo,构建shRNA表达载体,将鉴定正确的载体质粒转染Marc-145细胞,6 h后接毒,每日观察CPE;在接毒PRRSV TJ株后不同时间点取上清样品,测定样品TCID50;并以β-actin为内参,RT-PCR对PRRSV Nsp2 mRNA进行半定量。结果表明,选取的3条Nsp2基因的优势siRNA均能够抑制PRRSV TJ株在Marc-145细胞上增殖,其中shRNA载体S-1和S-2抑制效果明显,与空载体相比较差异极显著。本研究构建的PRRSV Nsp2基因特异性shRNA载体能够有效抑制PRRSV的复制,可使病毒滴度TCID50最多降低103.38。
- 王凤雪师新川温永俊胡嘉欣刘准武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA干扰
- 非结构蛋白2在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制调控中的作用:基因沉默和过量表达的效果
- 猪繁殖与呼吸综合征是养猪业面临的重要的一个传染病,已经发展了很多控制疾病的疫苗策略,但还未完全成功.建立一个细胞系来获得高产量的PRRSV疫苗是必需的.为了确定高致病性PRRSV(HP-PRRSV)在MARC-145细胞...
- 王凤雪温永俊杨博超刘准师新川冷雪宋妮武华陈立志程世鹏
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白研究进展被引量：12
- 2010年
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染病。主要引起母猪繁殖障碍,表现为妊娠后期流产,死胎,木乃伊胎及弱仔;各日龄段的猪特别是仔猪感染PRRSV引起呼吸道疾病,以间质性肺炎为特征,论文主要从近几年研究的PRRSV的非结构蛋白特性、免疫学功能、非结构蛋白基因的变异等方面进行分析,阐述非结构蛋白在病毒的增殖、致病力产生的影响,从而为进一步的研究提供一定的理论基础。
- 刘准王凤雪武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2非结构蛋白
- 高致病性PRRSV TJ株Nsp2蛋白的缺失及其二级结构预测被引量：2
- 2011年
- 根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株F3代全基因序列(GenBank登录号为EU860248),结合多个PRRSV亚洲株Nsp2基因比对结果,设计合成引物,选择高致病性PRRSV TJ株噬斑克隆纯化前后14个不同代次,利用合成的引物扩增各代次Nsp2基因的高变区片段及F3代和F92代Nsp2全基因,并进行产物克隆和氨基酸序列分析及结构预测。测序结果表明:PRRSV TJ株在克隆传代过程中出现了序列整段缺失,共缺失120个氨基酸,并且从F18代噬斑克隆开始一直稳定存在。缺失高变区及Nsp2蛋白二级结构预测结果表明:缺失的氨基酸使Nsp2蛋白在空间结构上发生了较大的变化,推测这可能与PRRSV TJM–F92的毒力和致病力减弱有关。
- 王凤雪冷雪李真光温永俊刘准武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白二级结构
- 高致病性PRRSV TJ株和致弱毒TJM株Nsp2测序及结构分析被引量：8
- 2011年
- 参照GenBank中PRRSV VR-2332株全序列设计特异性引物,扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Por-cine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)TJ株和其致弱毒株TJM株非结构蛋白2(Nonstructure pro-tein 2,Nsp2)编码区,经过基因的扩增、连接、转化、筛选阳性克隆进行核苷酸测序.结果表明,PRRSV TJ株Nsp2长2 850 bp,TJM株Nsp2长2 490 bp.通过序列比较分析,发现Nsp2编码区序列保守性差,TJ株和TJM株Nsp2与VR-2332核苷酸序列的同源性分别为83.6%和82.9%,运用RNAdraw软件对Nsp2编码区RNA的2级结构预测分析表明,分离的高致病性强毒株TJ株和细胞致弱毒株TJM株与经典毒株VR-2332有较大不同,PRRSVNsp2的1级序列的变化导致RNA的2级结构发生构象变化,推测这可能是3个PRRSV毒株致病力不同的原因之一.
- 王凤雪温永俊刘准冷雪李真光武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒非编码区
