刘琴芝
- 作品数：38 被引量：100H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 一种人源中和性抗禽流感病毒H5N1基因工程抗体
- 本发明公开了一种人源中和性抗禽流感病毒H5N1基因工程抗体，来源于中国高致病性禽流感H5N1恢复期病人抗体基因文库，其主要特征在于此重组抗体是由存在于抗体轻链和重链基因可变区中的高变区(CDRs)特异性基因序列决定的，并...
- 梁米芳孙丽娜李德新舒跃龙刘琴芝李川张全福
- 文献传递
- 在昆虫细胞表达汉坦病毒的核蛋白及其在血清检测中的初步应用被引量：1
- 2003年
- 李川孟祥芝张全福刘琴芝于建石胡孔新刘刚梁米芳李德新
- 关键词：昆虫细胞汉坦病毒核蛋白血清检测杆状病毒ELISA
- 基于荧光微球的病毒性出血热IgM抗体检测方法的建立
- 2009年
- 目的建立并初步评价多元检测引起病毒性出血热病原体特异性IgM抗体的方法。方法在原核细胞中重组表达纯化马尔堡病毒、拉沙热病毒、裂谷热病毒、肺综合征出血热汉坦病毒、汉滩病毒、Seoul病毒及普马拉病毒核蛋白（NP），共价偶联到7种不同的xMAP荧光微球上，优化评价偶联效果，通过参比血清中相应病毒NP特异性抗体检测，评估检测方法，并与常规使用的MacELISA方法进行比较。结果在Luminex平台的基础上建立了多元检测引起病毒性出血热的病毒核蛋白特异性抗体的方法，特异性与敏感性与常规应用的特异性抗体检测MacELISA试剂盒相当，但可以同时排查多个病毒感染情况。结论利用LuminexxMAP技术建立基于病毒核蛋白多元检测方法快速敏感，操作简单，可以用于病毒性出血热的检测和血清流行病学调查。
- 李建东张硕张全福刘琴芝韦艳李川梁米芳李德新
- 关键词：出血热病毒性核蛋白质类免疫球蛋白M
- 登革工型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达被引量：1
- 2009年
- 目的分泌表达登革I型病毒prM／E基因，为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础。方法用RT-PCR法获得登革I型病毒广州分离株全长prM／E基因，在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20％为乙脑病毒E基因相应的部分，分别将其克隆入真核表达载体pcDNA5／FRT中，获得三种重组质粒D1prME-pc5，D1JsprME．pc5，D1JsprM80E20JE-pc5。用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞，通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达。结果用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革I型病毒蛋白的表达。Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带，转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革I型病毒的特异蛋白条带。结论转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革I型病毒prM／E蛋白，只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达。
- 苗芳李川张硕王晓芳李建东张全福刘琴芝韦艳杭小同梁米芳李德新
- 关键词：登革热病毒基因
- 乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体的构建及鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的构建乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体，为进一步研究以乙脑病毒为载体的新型疫苗奠定基础。方法（1）构建了两个乙脑病毒复制子：一个为完全缺失PrM／E基因（命名为Full △prMJE Replicon）；一个保留E基因C端213bp（命名为Partial △prM／E Replicon），并代之以多克隆位点。（2）将复制子RNA转染BHK-21细胞，于24、48、72、96h采用Real-time PCR验证复制子的自主复制能力。（3）于复制子多克隆位点处插入YFP报告基因，并将含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞，采用荧光显微镜观察及流式细胞仪检测验证YFP的表达。结果（1）两个复制子RNA转染BHK-21细胞后，RNA有随时间增加而不断增多的趋势。（2）含报告基因的复制子RNA转染BHK-21细胞后，荧光信号持续增强，表达YFP的阳性细胞率也逐渐增多。结论构建的乙脑病毒SA14-14-2株复制子载体Full △prM／E Replicon及Partial △prM／E Replicon具有自主复制能力及对外源蛋白的表达能力。
- 韦艳李川陆鹏于建石李建东刘琴芝张全福李德新
- 关键词：脑炎病毒复制子杂合子检测
- 在传染性非典型肺炎患者组织和血液中发现冠状病毒被引量：7
- 2003年
- 用RT-PCR从广东两例传染性非典型肺炎(非典型肺炎)死亡病例的肺和脾标本中,以及北京、辽宁和宁夏非典型肺炎患者血清中,扩增出冠状病毒核苷酸序列。这些PCR产物为冠状病毒RNA聚合酶基因部分片段,所有测定的序列和国内外SARS病毒序列相同。这些发现提示,冠状病毒和非典型肺炎关系密切,有助于确定我国非典型肺炎的病因。所建立的套式PCR方法可以用于检测临床标本。由于血液中存在SARS病毒,进行血清操作时需要注意安全保护。
- 李德新于建石胡孔新段淑敏毕胜利许文波崔爱利张燕洪涛吴昊窦志勇何雅慧韩玉霞刘刚杜润蕾张全福刘琴芝梁米芳王建伟郭元吉徐红戴淑玲董小平梁国栋阮力
- 关键词：传染性非典型肺炎冠状病毒PCR核苷酸序列
- 人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究被引量：9
- 2003年
- 严重急性呼吸道综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全。快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫。为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中11株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Westernblot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点。对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中。人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径。
- 杜润蕾于建石梁米芳刘琴芝李川韩露露段淑敏周为民张全福王涛毕胜利李德新
- 关键词：严重急性呼吸综合征SARS病毒基因工程抗体FAB抗体抗体库
- 抗登革病毒NS1单抗的制备及检测NS1方法的建立被引量：2
- 2006年
- 制备抗登革病毒NS1蛋白单克隆抗体，建立检测NS1的ELISA方法。表达1～4型登革病毒NS1蛋白，将1型NS1蛋白纯化后免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术制备单克隆抗体。经ELISA、Western blotting、间接免疫荧光筛选和鉴定单克隆抗体，进行纯化和HRP标记。通过鉴定每两株单抗之间是否存在竞争作用，选择非竞争单抗组合并建立NS1捕获法ELISA。结果获得7株高滴度抗NS1单抗，捕获法ELISA可以检出10ng／mLNS1。原核表达登革病毒NS1蛋白制备的单抗可以和天然病毒抗原反应，NS1捕获法ELISA可以用于登革病毒感染检测。
- 郝永华王芹关武祥修梅红戴晓霞郑峰李伟红刘峰刘琴芝李川张全福梁米芳李德新
- 关键词：登革病毒NS1蛋白单克隆抗体
- 抗病毒人源基因工程抗体的基础和应用研究
- 2007年
- 由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所主持的“抗病毒人源基因工程抗体的基础和应用研究”，属于生命科学技术领域中预防医学和生物技术研究领域。作为一类新兴起的生物工程药，抗病毒人源基因工程抗体以其对人体无免疫原性，无污染源，特异性抗病毒疗效及连续规模生产可行性等优势逐渐成为预防和治疗病毒性疾病的一类可替代血源性免疫球蛋白的新型抗病毒感染生物工程药。主要研究内容包括以下三大方面：
- 梁米芳李德新曹经瑗张全福毕胜利李川刘琴芝
- 关键词：基因工程抗体抗病毒感染生命科学技术生物工程
- 云南省澜沧江下游地区虫媒病毒的调查研究被引量：39
- 2003年
- 目的 了解云南澜沧江下游地区自然界虫媒病毒流行情况。方法 从云南澜沧江下游地区(澜沧县和思茅市)所属乡村采集蚊虫,分类后保存于液氮。经消毒、研磨、离心等处理后接种组织培养细胞分离病毒,并进行初步鉴定。结果从233份标本中,分离到22株致C6/36细胞病变的病毒,表现为细胞圆化、聚集、脱落。分离阳性率为9.4％(22/233)。经鉴定10株对乙醚和5’-磺脱氧尿苷抵抗,为无包膜双链RNA病毒,核酸电泳为12节段RNA病毒。9株对乙醚敏感,对5’-碘脱氧尿苷抵抗,为有膜RNA病毒,核酸电泳为10条带。Colti病毒95-75单克隆抗体与新分离的12节段RNA病毒的酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验呈阳性反应,而与10节段病毒呈阴性反应。3株病毒为对乙醚敏感,其中1株被乙型脑炎病毒A2株免疫腹水中和,并与A2免疫腹水荧光试验呈阳性反应;1株(云南92-4)与布尼亚病毒组特异免疫腹水的荧光试验和ELISA试验均为强阳性,而与甲病毒组特异性免疫腹水及黄病毒组的乙型脑炎病毒免疫腹水均呈阴性反应;经负染在电镜下观察毒粒呈圆形,直径约为(87.00±0.05)nm。外层可见表面突起。结论 从云南澜沧江下游地区采集的蚊标本分离到10株Colti病毒,9株环状病毒,1株为乙脑病毒,1株为布尼亚病毒,1株尚在研究中。
- 陶三菊张海林杨冬荣王焕琴刘琴芝张云智杨卫红章域震曹玉玺徐丽宏何英陈伯权
- 关键词：虫媒病毒脑炎病毒布尼亚病毒
