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持续高表达CXC趋化因子受体-4重组慢病毒颗粒的包装鉴定及细胞迁移被引量：1: 2013年; 目的观察持续高表达CXC趋化因子受体_4（CXCR4）慢病毒颗粒在细胞迁移的作用。方法从大鼠大脑组织提取总RNA，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）得到大鼠cDNA文库，以cDNA为模板，经过PCR获得CXCR4基因，测序正确后连接到pCDHl一MCS—EFl一copGFP（慢病毒载体质粒），与第3代慢病毒其余辅助质粒pMDLG／pRRE、pRsv．Rev及pVSV．G按照1：4：1：1共转染293T细胞包装慢病毒，超离慢病毒，测定病毒滴度，感染Hela细胞72h与14d后，分别观察Hela细胞荧光，实时定量聚合酶链反应（Real—timepcn）测定Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA含量，Transwell小室观察细胞迁移。结果测序CXCR4基因序列正确，并成功连接到pCDHl．MCS—EFl．copGFP，利用第3代慢病毒包装系统成功包装慢病毒，经超离慢病毒颗粒，流式细胞仪测定慢病毒滴度为7．89×10^5，持续观察Hela细胞荧光强度，Real．timePCR检测结果示Hela细胞表达大鼠CXCR4mRNA水平显著升高（72h为78．29倍，至14d为58．93倍），Transwell小室观察到高表达CXCR4的慢病毒颗粒感染组细胞迁移多（P〈0．05）。结论高效感染力并持续高表达CXCR4的慢病毒颗粒可持续促进细胞迁移，并有基质细胞衍生因子．1d（SDF一10L）浓度依赖性。; 王奇冯世庆孔晓红刘畅张彬张亮张衍军; 关键词：慢病毒细胞迁移

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刘畅

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