唐晓波
- 作品数：53 被引量：58H指数：5
- 供职机构：哈尔滨医科大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- PKC和血管内皮细胞在15-HETE收缩肺动脉中的作用被引量：6
- 2006年
- 目的探讨蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶A(PKA)信号转导途经及血管内皮完整性在15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)收缩肺动脉中的作用。方法采用组织浴槽血管环法与PKC、PKA抑制剂以及除去血管内皮细胞相结合的方法。结果用6·8mmol·L-1hypericin阻断PKC途径可使15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉量效曲线右移(P<0·01);用0·112mmol·L-1KT5720阻断PKA途径使15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉量效曲线右移不明显;除去血管内皮细胞可降低对照组和缺氧组肺动脉血管环对15-HETE的反应性。结论15-HETE收缩肺动脉的作用和PKC信号转导系统以及血管内皮细胞的完整性有关。
- 唐晓波李倩毕海荣周建秋吕昌莲朱大岭
- 关键词：15-HETEPKAPKC
- 一种CYP4A11多肽及抗人CYP4A11多肽抗体的制备方法
- 一种CYP4A11多肽及抗人CYP4A11多肽抗体的制备方法，它涉及一种多肽及该多肽抗体的制备方法。它解决了目前使用的人CYP4A11价格昂贵，而且抗体不能全部满足用于免疫印迹、免疫组织化学实验和酶联免疫吸附实验的问题。...
- 朱大岭唐晓波杨微刘海英武正华吴红
- 文献传递
- 抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测被引量：5
- 2011年
- 目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定。方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株。表达产物经Ni-NTA柱纯化,120 g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确。bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株。120 g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合。FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合。结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性。
- 戴丽娟鄢成伟李淑珍陈莉李新禹单瑞辉于学薇唐晓波
- 关键词：CD3VEGFR2
- CYP4A/20-HETE在VEGF活化eNOS及调节肺血管节律作用的分子机制被引量：3
- 2005年
- 朱大岭毕海荣唐晓波
- 关键词：细胞活化ENOS肺血管分子机制
- CYP4A/20-HETE和eNOS活化有关的调节蛋白间的相互作用被引量：1
- 2007年
- 目的研究CYP4A/20-HETE和eNOS活化有关的调节蛋白间的相互作用。方法培养新生牛肺动脉内皮细胞(PAECs),用免疫沉淀(IP)和免疫印迹(WB)对下列4组的CYP4A,eNOS及eNOS调节蛋白进行测定:对照组:PAECs培养皿中加入与20-HETE处理组体积相同的乙醇溶剂,作用10min;20-HETE处理5min组:PAECs培养皿中20-HETE的浓度为1×10-6mol·L-1,作用5min;20-HET处理10min组:PAECs培养皿中20-HETE的浓度为1×10-6mol·L-1,作用10min;VEGF处理10min组:PAECs培养皿中VEGF的浓度为1×10-8mol·L-1,作用10min。结果经20-HETE处理后:肺动脉内皮细胞eNOS蛋白表达增加、phos-pho-eNOS(Ser1177)合成增加;用VEGF进行的上述实验结果与20-HETE相似;20-HETE促使Hsp、蛋白激酶B(Akt)与eNOS结合。结论免疫沉淀和免疫印迹实验结果表明:CYP4A与eNOS在肺动脉内皮细胞相互结合;20-HETE通过促使Hsp、蛋白激酶B(Akt)与eNOS结合,使eNOS(Ser1177)磷酸化,增加NO释放,舒张血管;VEGF和20-HETE的作用相似。
- 毕海荣唐晓波朱大岭
- 关键词：免疫沉淀免疫印迹
- 人结合珠蛋白cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达和鉴定
- 2014年
- 目的:克隆人结合珠蛋白(haptoglobin,Hp)cDNA,并在大肠杆菌中表达和鉴定。方法:从Hela细胞中分离总RNA,采用RT-PCR方法获得人Hp cDNA,分别克隆至原核表达载体pET-32a和PGEX-4T-1,转化至大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果:成功构建了高效原核表达质粒PET-32a-Hp和PGEX-4T1-Hp;Western印迹结果表明,经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达了分子量约30 kD和37 kD的目的蛋白;表达产物经Ni2+-NTA离子交换树脂纯化,纯度>90%。结论:在E.coli成功表达和纯化了人Hp融合蛋白,为进一步开发人Hp诊断试剂打下基础。
- 孟琴汤伟松刘亮李淑珍唐晓波
- 关键词：卵巢癌克隆纯化
- 非小细胞肺癌生物标记物角蛋白19基因的克隆、表达及纯化被引量：1
- 2013年
- 目的克隆人角蛋白19（CK19）基因，原核表达重组蛋白并纯化，为建立一种新的非小细胞肺癌诊断方法奠定基础。方法从宫颈癌HeLa细胞株中提取总RNA，经RT—PCR合成eDNA，设计特异性的引物，用PCR的方法扩增目的片段，构建pET．32a—CK19和pGEX-4T1-CK19表达载体，在BL21大肠杆菌中表达CK19重组蛋白纯化，并进行SDS—PAGE及Westernblot鉴定。结果经PCR扩增后得到一条420bp的DNA片段，构建载体后DNA测序，结果与预期序列一致。初步结果鉴定表明，表达和纯化的融合蛋白，与预期结果一致。结论成功克隆CK19基因，并获得高纯度的CK19融合蛋白，为进一步制备体外诊断试剂打下基础。
- 孙晓林李梅唐佳昕李淑珍唐晓波
- 关键词：非小细胞肺癌克隆纯化
- 高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2被引量：2
- 2009年
- 目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。
- 张家宁褚晓杰吕昌莲吴春铃包红霞唐晓波朱大岭
- 关键词：STAUROSPORINE细胞外信号调节激酶蛋白激酶A
- 一种CYP4A11多肽
- 一种CYP4A11多肽，它涉及一种多肽。它解决了目前使用的人CYP4A11价格昂贵，而且抗体不能全部满足用于免疫印迹、免疫组织化学实验和酶联免疫吸附实验的问题。CYP4A11多肽的氨基酸序列为：RLRRLPNPCEDKD...
- 朱大岭唐晓波杨微刘海英武正华吴红
- 文献传递
- ERK1／2通路参与15-羟二十碳四烯酸收缩缺氧大鼠肺动脉的过程(英文)被引量：5
- 2005年
- 缺氧诱导的15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosateteraenoic acid,15-HETE)是引起肺动脉收缩的重要介导因子。15- HETE引起肺动脉收缩的信号转导途径尚不清楚。本研究旨在确定细咆外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase-1／2, ERK1／2)信号转导通路是否参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。采用组织浴槽肺动脉环张力检测、蛋白质免疫印迹 (Western blot)和免疫细胞化学方法。制备缺氧大鼠动物模型,成年雄性Wistar大鼠在低氧环境下(吸入氧分数为0．12)正常喂养 9 d。显微分离直径1～1．5mm肺动脉,剪成长为3 mm的动脉环,进行血管张力检测。用ERK1／2 上游激酶(MEK)抑制剂PD98059 抑制ERK1／2活性。结果显示,PD98059可明显抑制15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环的收缩作用。在去除内皮的肺动脉环, PD98059仍可明显降低15-HETE的缩血管作用。Western blot和免疫细胞化学结果都显示,15-HETE能促进ERK1／2磷酸化。 由此表明ERK1/2信号转导通路参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。
- 吕昌莲叶宏唐晓波朱大岭
- 关键词：缺氧细胞外信号调节激酶
