孙晓凌
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：黑龙江大学更多>>
- 发文基金：国家转基因植物研究与产业化专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建被引量：3
- 2004年
- 为了克隆甜菜单体附加系M14无融合生殖相关基因 ,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果 ,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA ,分离纯化mRNA ,以Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶的作用下 ,合成第一链cDNA ,进而合成第二链cDNA。含有EcoRⅠ和NotⅠ粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连 ,并对连接产物进行体外包装 ,得到噬菌体颗粒 ,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库。经大肠杆菌寄主菌株XL1-blueMRF’平板检测 ,三个文库滴度分别为 2 .8× 10 5pfu·mL-1、1.6× 10 5pfu·mL-1和 3.5× 10 5pfu·mL-1,克隆重组率为 83%、78%和 81%。
- 郑天然李荣田孙晓凌李海英郭德栋
- 关键词：甜菜无融合生殖单体附加系CDNA文库
- 从甜菜M14 cDNA文库中筛选无融合生殖候选基因
- 本实验根据GenBank中FIE基因的同源序列比较保守区设计了一对简并引物，通过RT-PCR方法克隆得到了甜菜M14品系花蕾FIE基因特异性片段。序列测定结果表明，克隆的特异性FIE片段长为406bp，编码135个氨基酸...
- 孙晓凌
- 关键词：无融合生殖甜菜CDNA文库
- 文献传递
