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一种高效定向无缝DNA片段连接方法: 本发明属于基因工程技术领域，具体为一种定向无缝DNA片段连接方法。本发明的连接引物两端要与待连接DNA片段2a和3a的待连接处两侧各有5-40个碱基的序列完全互补；由于引物的tm值随着碱基数量和GC含量的增加变高，而完成...; 卢大儒周翔达宋晓孙海燕陈红岩; 文献传递

一种高效定向无缝DNA片段连接方法: 本发明属于基因工程技术领域，具体为一种定向无缝DNA片段连接方法。本发明的连接引物两端要与待连接DNA片段2a和3a的待连接处两侧各有5-40个碱基的序列完全互补；由于引物的tm值随着碱基数量和GC含量的增加变高，而完成...; 卢大儒周翔达宋晓孙海燕陈红岩; 文献传递

耐热DNA连接酶介导的TLCR技术在简化DNA重组实验中的应用被引量：2: 2016年; 传统的DNA重组方法 TypeⅡ型限制酶技术受到片段纯化的限制,无法做到复杂混合体系中DNA片段的特异性连接。为解决这个问题,本研究将耐热连接酶链式反应(Thermostable ligase chain reaction,TLCR)引入DNA片段的连接与捕获。该技术利用耐热型DNA连接酶的特性,在热循环反应中配合针对目的片段末端序列设计的单链寡核苷酸连接模板——Helper,实现目的片段的特异性连接和产物数量的指数性增长。两个质粒构建实验被用于验证TLCR技术的可行性和应用效果。首先利用TLCR技术从一个未经纯化的含有7种不同大小片段的混杂体系中特异性地将一段1.5 kb的片段捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验准确率达到80%,验证TLCR技术在复杂混合体系中特异性连接DNA片段的可行性和准确性。在另一个质粒构建实验中,TLCR技术从λ噬菌体基因组Hind消化物中将两段总长达27 kb的片段按顺序捕获进载体,随机抽取的克隆样品经检验同样达到了80%的准确率。结果表明,TLCR技术能够简化DNA重组实验的操作,并且适用于多片段和大片段的连接,可以为生物学研究提供便利。; 周翔达宋晓怀聪孙海燕陈红岩卢大儒; 关键词：HELPER

一种基于弹回探针引物技术的低频突变检测方法: 本发明属于基因检测技术领域，具体为一种基于弹回探针引物技术的低频突变检测方法。本发明包括：设计弹回探针引物、制备DNA模板、配置检测体系、设置反应程序和确定Ts值、结果的判定等步骤。本发明是将弹回探针引物富集扩增技术与弹...; 孙海燕卢大儒; 文献传递

应用HRM技术对CYP2C19*2和CYP2C19*3进行双重SNP分型被引量：6: 2013年; 氯吡格雷是一种广泛用于预防静脉血栓形成的抗血小板药物。研究表明,携带有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3的病人,其体内代谢氯吡格雷成为其活性形式的能力降低,导致氯吡格雷抑制血小板聚集功能减弱。文章旨在建立一种利用高分辨率熔解曲线分析(High-resolution melting curveanalysis,HRM)技术在闭合单管中同时对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行简便、准确分型的方法。本实验针对两个SNP位点分别设计特异性的HRM引物,并在两个位点引物的5′端分别加上富含AT和GC的序列,保证两个位点的扩增产物熔解峰无重叠。利用HRM技术,快速、灵敏地对64例随机DNA样本的CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点进行了基因分型,且HRM方法的分型结果与测序验证结果完全一致。因此,利用HRM技术可以实现在闭合单管中简便、准确地对CYP2C19*2、CYP2C19*3两个多态性位点同时进行基因分型。该方法有望应用于临床,指导氯吡格雷的个体化用药。; 曹春鸽孙海燕周芳芳王诗铭陈红岩卢大儒; 关键词：高分辨率熔解曲线分析氯吡格雷 SNP分型

无细胞百白破疫苗效果评价及安全性观察: 该文就上海市卢湾区历年来百日咳的流行病学和疫苗免疫效果进行分析,还分析对无细胞百白皮疫苗(DPTa)与全细胞百白破疫苗(DPTa)免疫接种后人体反应性和抗百日咳、白喉、破伤风的免疫效果及免疫持久性等问题进行研究.; 孙海燕; 关键词：百日咳疫苗免疫百白破疫苗免疫效果; 文献传递

突变富集高分辨率溶解曲线分析技术体系的建立以及在循环外周血检测中的运用: 许多研究已经证实,肿瘤患者循环外周血DNA与肿瘤组织DNA的突变具有一致性,又因为血液样本留取方便,可随时进行动态检测,因此循环外周血成为肿瘤突变检测较佳的替代的样本,而在循环外周血中实现肿瘤相关基因的检测也越来越成为技...; 孙海燕; 关键词：KRAS基因; 文献传递

突变富集高分辨率熔解曲线分析技术体系的建立以及在循环外周血检测中的运用: 许多研究已经证实，肿瘤患者循环外周血DNA与肿瘤组织DNA的突变具有一致性，又因为血液样本留取方便，可随时进行动态检测，因此循环外周血成为肿瘤突变检测较佳的替代的样本，而在循环外周血中实现肿瘤相关基因的检测也越来越成为技...; 孙海燕

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孙海燕