岑东
- 作品数：18 被引量：41H指数：4
- 供职机构：宁波市鄞州区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后,拮抗足叶乙甙(VP-16)诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞:未转染Raji细胞、空载体pVITRO2-mcs转染细胞和HGF基因转染细胞,分成正常对照组和经VP-16处理的药物组。采用Western blot法验证HGF蛋白的表达;CCK-8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度;通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙(AO)染色、苏木精–伊红(HE)染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果显示:Western blot法验证了HGF蛋白质的表达;CCK-8法显示100μg/mL足叶乙甙可明显抑制Raji细胞增殖;透射电镜下可发现典型的凋亡细胞;流式检测结果表明:给药组与正常组相比,三组细胞的凋亡率明显升高(P<0.01),提示VP-16具有诱导细胞凋亡的作用;但给药组间:HGF基因转染组凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)和空载体pVITRO2-mcs转染组(P<0.05),提示HGF基因转染可明显抑制VP-16诱导的Raji细胞的凋亡,AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP-16诱导的细胞凋亡效应。
- 沈蓉蓉郑筱娇岑东赵行滑世轩裴仁治吕建新涂植光
- 关键词：肝细胞生长因子基因转染凋亡
- 巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体的构建及靶向性研究被引量：1
- 2008年
- 目的:构建巨噬细胞特异性启动子调控的靶向巨噬细胞的真核表达载体。方法:PCR方法合成巨噬细胞特异性启动子,并将其插入带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体pEGFP-N1中,替代CMV启动子。利用脂质体转染法,将其与红色荧光蛋白真核表达载体(pERFP-N1)共转染巨噬细胞和非巨噬细胞,通过荧光显微镜观察GFP和RFP在不同细胞中的表达水平来鉴定启动子的靶向性。结果:成功构建了巨噬细胞特异性启动子调控的真核表达载体,并且能在巨噬细胞中高效特异性地表达报告基因。结论:构建的靶向巨噬细胞的真核表达载体能提高目的基因的表达特异性,为提高基因治疗胞内菌感染的靶向性及降低毒副作用奠定了实验基础。
- 文阳安郭金英余晓林岑东刘靳波陈彦张健涂植光
- 关键词：巨噬细胞细胞特异性启动子真核表达载体
- HGF基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用
- 2013年
- 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用及其机制。方法:采用HGF基因重组质粒pVITRO2-HGF转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小;8周后获取瘤组织,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)和免疫组化检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度(MVD),并进行相关分析。结果:造模成功率为96.7%。HGF转染组的瘤体积明显大于HGF转染+VP-16组(P<0.01)、未转染组与空载体组(P<0.01),HGF转染+VP-16组也大于对照组(P<0.01),未转染组与空载体组间无显著差异(P>0.05)。pVITRO2-HGF转染组凋亡指数显著低于对照组(P<0.01),经VP-16诱导后凋亡增加(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。pVITRO2-HGF转染组的MVD显著高于对照组(P<0.01),但经VP-16诱导后血管增生降低(P<0.01),但仍高于对照组(P<0.05),对照组间无显著差异(P>0.05)。结论:HGF基因转染可显著促进裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,明显抑制凋亡的发生,这一效应可能与其促进肿瘤血管新生和抑制肿瘤细胞凋亡有关。
- 赵行郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：基因转染淋巴瘤裸鼠异种移植物
- 肝细胞生长因子诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞抗凋亡效应研究被引量：3
- 2017年
- 目的观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对经凋亡诱导剂足叶乙苷(etoposide,VP-16)诱导后慢性髓细胞性白血病(CML)K562细胞凋亡的抑制作用,并分析其分子机制。方法采用苏木素-伊红(HE)染色、吖啶橙染色(AO)染色对凋亡细胞形态特征变化进行定性/半定量分析;采用Annexin V-FITC/PI双染、JC-1染色检测细胞膜表面的PS外翻和完整性及线粒体膜电位分析凋亡细胞生化特征变化;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9等凋亡相关基因mRNA表达的变化,综合评价HGF抗凋亡效应,并阐述其分子机制。结果 HE法、AO法发现HGF+VP-16组凋亡率明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.05),提示HGF可显著抑制凋亡的发生;Annexin V-FITC/PI双染法、JC-1染色法发现HGF+VP-16组早期凋亡细胞明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.001),提示HGF具有抗K562细胞早期凋亡效应;凋亡相关基因mRNA表达检测结果发现,HGF+VP-16组的Bcl-2 mRNA表达量明显高于VP-16组(P<0.001),而Bax mRNA、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA表达量明显低于VP-16组(P<0.05、P<0.001、P<0.001),证实HGF抑制凋亡基因表达,同时促进抗凋亡基因的表达,提示HGF具抗凋亡效应。结论 HGF显著抑制经VP-16诱导的CML K562细胞的凋亡,该抗凋亡效应可能通过HGF/c-Met途径调控PI3K/AKT通路而实现。
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉赵行滑世轩吕建新岑东
- 关键词：肝细胞生长因子慢性髓细胞性白血病K562细胞凋亡
- 实时荧光定量PCR检测急性白血病的肝细胞生长因子mRNA的表达及其意义被引量：1
- 2008年
- 目的定量检测急性白血病（AL）骨髓单个核细胞（MNCs）的肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达，并探讨其临床意义。方法制备67例初治AL患者的骨髓MNCs，提取定量MNCs的总RNA，并制备cDNA。应用实时荧光定量-PCR（FQ-PCR）检测HGF mRNA在AL的表达。结果HGF mRNA在AL组的表达显著高于对照组（6．936±1．613，0．407±0．170，P〈0．001），而急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的表达差异无统计学意义（7．127±1．911，6．635±0．934，P〉0．05）。在AL中，M5呈显著强表达（9．998±1．454），高于M2、M3、M4、L1、L2和L3表达（P〈0．001）；而后者间表达差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF mRNA在性别、年龄间的表达差异也无统计学意义（P〉0．05）。缓解组HGF mRNA的表达明显低于未缓解组（6．393±1．165，8．041±1．848，P〈0．005）。结论HGF mRNA在AL组与对照组、AL亚型间的表达存在差异，但在AML与ALL、AL患者的性别、年龄间的表达无差异。且低表达者疗效较好，提示HGF mRNA可能是AL诊治的又一理想指标。
- 岑东吕建新裴仁治涂植光余晓林文阳安
- 关键词：白血病肝细胞生长因子聚合酶链反应
- NK4拮抗HGF促进肿瘤细胞凋亡的生物学效应被引量：3
- 2013年
- 观察NK4通过拮抗肝细胞生长因子(HGF)诱导不同肿瘤细胞凋亡,研究其生物学作用及分子机制.以足叶乙甙(VP-16)诱导凋亡,分别或经HGF蛋白、NK4蛋白处理5种肿瘤细胞(B细胞淋巴瘤细胞系Raji、人急性粒细胞白血病细胞系HL-60、宫颈癌细胞系HeLa、前列腺癌细胞系PC-3、非小细胞肺癌细胞系A549),采用流式细胞术(FCM)、吖啶橙(AO)染色法、苏木素-伊红(HE)染色法定量观察5种肿瘤细胞的凋亡情况,并进行相关分析.FCM发现,经VP-16处理5种肿瘤细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.001),而HGF+VP-16组凋亡率明显下降(P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.05).AO染色和HE染色结果也证实,5种肿瘤细胞经VP-16处理后凋亡率均显著增高(P<0.001,P<0.001),而HGF+VP-16组细胞凋亡率均明显低于VP-16组(P<0.001,P<0.01),HGF+NK4+VP-16组细胞凋亡率均明显高于HGF+VP-16组(P<0.001,P<0.05).此外,发现NK4+VP-16组、HGF+NK4+VP-16组、VP-16组等3组间凋亡率无统计学差异(P>0.05).以上结果提示,HGF蛋白可抵抗凋亡诱导剂VP16的作用,明显降低细胞凋亡;NK4通过竞争性抑制HGF从而促进肿瘤细胞的凋亡,具有潜在的肿瘤治疗价值.
- 郑筱娇高洲沈蓉蓉岑东裴仁治罗建平吕建新
- 关键词：肝细胞生长因子凋亡拮抗
- HGF mRNA实时荧光定量PCR在淋巴瘤的应用
- 2008年
- 目的构建肝细胞生长因子(HGF)mRNA定量标准,建立实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测体系,探讨在淋巴瘤的应用价值。方法提取总RNA,行RT-PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准。设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度,建立HGF实时FQ-PCR检测体系,并进行方法学评价。应用该检测体系定量检测47例淋巴瘤的HGF mRNA表达,并采用受试者工作特征(ROC)曲线法,评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度。结果成功构建了HGF定量标准,结合热启动PCR和降落PCR技术创建了HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系。方法学评价实验表明:标准曲线的斜率为-3.513,相关系数为0.999,扩增效率达92.6%;批内、批间和日间变异系数分别为2.1%、4.0%和6.8%;灵敏度达2拷贝/μl。HGF mRNA在对照组和淋巴瘤组的表达分别为0.317±0.192和6.425±2.172,组间差异具统计学意义(P<0.001),但HD组和NHL组的表达无显著差异(P>0.05),而缓解组显著低于复发组(P<0.05)。ROC曲线法提示,当临床诊断界值为3.316时,HGF mRNA对淋巴瘤诊断敏感度和特异度分别为93.6%和100%。结论成功构建了HGF mRNA定量标准。建立的HGF mRNA FQ-PCR检测体系是理想的、可行的,可定量检测淋巴瘤HGF mRNA并具诊断价值。
- 岑东吕建新裴仁治涂植光余晓林文阳安滑世轩
- 关键词：肝细胞生长因子实时荧光定量PCR淋巴瘤
- APOL1基因变异的检测及其与高血压肾病的初步关联研究被引量：4
- 2017年
- 目的:建立载脂蛋白L1(APOL1)基因变异的检测方法,初步观察APOL1基因变异与高血压肾病(HRD)的关联性。方法:检索确认APOL1基因序列,设计第2~7外显子的7对引物。提取人外周血样本基因组DNA,行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖电泳鉴定、纯化,行全基因测序。检测10例HRD患者APOL1基因,进行非同义突变的功能评价,分析其与HRD的关联性。结果:成功扩增了APOL1基因第2~7外显子,测序证实含目标外显子序列。10例HRD患者中发现APOL1基因变异2例,这些变异可能具有致病性。结论:成功建立了APOL1基因的全基因测序方法。HRD患者存在APOL1基因变异,需积累病例进一步证实两者关联性。
- 陈龙岑东杨律宋文慧陈其军唐莉吕建新
- 关键词：基因变异高血压肾病
- 肝细胞生长因子mRNA实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在淋巴瘤诊断中的价值被引量：5
- 2008年
- 目的 构建肝细胞生长因子（HGF）mRNA定量标准，建立实时荧光定量（FQ）-PCR检测体系，探讨其检测淋巴瘤的应用价值。方法 提取总RNA，行逆转录（RT）-PCR，获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒，作为定量标准。设计第二引物对和探针，确定扩增条件，优化组分浓度，建立HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系，并定量检测47例淋巴瘤患者[霍奇金病（HD）11例，非霍奇金淋巴瘤（NHL）36例；治疗后，获缓解34例，未缓解13例]和19例非肿瘤患者的淋巴组织标本中HGF mRNA表达。同时，用受试者工作特征（ROC）曲线法，评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度。结果 本研究构建的HGF mRNA定量标准和实时FQ-PCR检测体系的标准曲线斜率为-3．513，相关系数为0．999，扩增效率达92．6％；批内、日内和日间变异系数分别为2．1％、4．0％和6．8％；灵敏性达2拷贝／μl。HGF mRNA在淋巴瘤组的表达（6．425±2．172）显著高于非肿瘤对照组（0．317±0．192，t=15．883，P〈0．001），缓解组的表达（6．157±1．712）显著低于未缓解组（7．591±1．184，t=2．768，P〈0．05），但在HD组和NHL组的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。ROC曲线提示，当临床诊断临界值为3．316时，HGF mRNA对淋巴瘤诊断的敏感度和特异度分别为93．6％和100％。结论 本研究成功构建了HGF mRNA的定量标准和实时FQ-PCR检测体系，并可用于淋巴瘤的HGF mRNA定量检测。
- 岑东吕建新裴仁治涂植光余晓林文阳安
- 关键词：淋巴瘤肝细胞生长因子聚合酶链反应
- 急性白血病细胞肝细胞生长因子mRNA的定量检测及其临床意义
- 目的1、构建肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)mRNA实时荧光定量聚合酶链反应(fluorsence-quantatity polymerase chain reaction,FQ...
- 岑东
- 关键词：肝细胞生长因子MRNA逆转录聚合酶链反应急性白血病
- 文献传递
