常宏宇
- 作品数：17 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军第二炮兵总医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 猪α-1,3-半乳糖转移酶基因打靶载体的构建被引量：2
- 2010年
- 目的:构建猪α-1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)基因的正负筛选打靶载体。方法:以原代猪胚胎成纤维细胞基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因的2条片段;以长约2kb包含部分第9外显子的片段为同源短臂,在XbaⅠ和ClaⅠ位点插入pLoxP质粒正筛选标记neo基因的3'端;以长约5.4kb包括部分第8外显子、全部第8内含子及部分第9外显子的片段为同源长臂,于NotⅠ位点插入该质粒中neo基因的5'端;2.7kb的负筛选标记tk基因位于载体中同源短臂的3'端外侧。结果与结论:酶切、PCR及测序结果表明,同源臂被正确连接至质粒pLoxP,成功构建了猪GGTA1基因正负筛选打靶载体pSL/GT。
- 常宏宇宫锋季守平鲍国强李素波章扬培李芳聂亚玲
- 关键词：基因打靶异种移植
- 脑胶质瘤MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态研究被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨脑胶质瘤患者O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因MGMT和错配修复基因hMLH1、hMSH2启动子CpG岛甲基化状态,及其在烷化剂化疗中的意义。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测39例脑胶质瘤和6例正常脑组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态,免疫组化方法测定蛋白表达。结果:脑胶质瘤患者组织MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化发生率分别为46.2%、10.3%和20.5%,3种基因启动子未甲基化模式与其对应蛋白表达模式相似,并与患者性别、年龄、病理类型和病理分级无明显相关性。回顾性分析患者资料,显示39例脑胶质瘤患者中,MGMT基因甲基化的患者生存期显著高于MGMT基因未甲基化患者(P<0.05,Log-rank检验)。结论:MGMT及错配修复基因甲基化是脑胶质瘤发生过程中常见的分子事件,可能与肿瘤的发生有关;检测MGMT、hMLH1和hMSH2基因启动子甲基化状态,在判断脑胶质瘤患者预后和预测烷化剂化疗耐药性中可能具有重要意义。
- 郑长青季守平宫锋李安民邰军利常宏宇王颖丽高红伟李素波檀英霞章扬培
- 关键词：脑胶质瘤启动子CPG岛甲基化错配修复基因
- 新生儿先天性外胚层发育不良一例被引量：2
- 2015年
- 29天男性新生患儿,出现皮肤干燥、全身膜样脱屑、毛发稀疏色黄、无汗,反复发热。皮肤活检显示真皮内皮肤附属器消失,基因检测显示EDA基因突变,诊断为少汗型外胚层发育不良。该病是一种罕见的遗传性疾病,可影响牙齿、头发、指甲和汗腺的发育或功能。少汗型患儿可因排汗异常而导致体温升高。因此,对于新生儿有不明原因的反复发热,同时具有特殊外貌者,排除感染等引起发热的因素后,应考虑先天性外胚层发育不良的可能,及时完善相关检查,明确诊断,避免延误病情。
- 常宏宇花少栋李芳李士芝李翔文
- 关键词：文献复习
- 去除αGal抗原的猪红细胞输入猕猴体内的初步研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨经α-半乳糖苷酶(AGL)去除了αGal抗原的猪红细胞输注给灵长类动物的可能性。方法使用AGL体外去除猪红细胞表面的αGal抗原,应用流式细胞术和配血试验检测修饰效果:用FITC标记此红细胞,将AGL酶解的pRBCs与未酶解的pRBCs分别输注给使用免疫抑制剂(眼镜蛇毒因子及地塞米松)预注射的猕猴;流式细胞仪检测计算输注红细胞在猕猴体内的存活率,同时检测受试猕猴的血生化及尿液指标。结果AGL有效清除了猪红细胞表面的αGal抗原,使其与猕猴血清的凝集反应减弱。未酶解的pRBCs在猕猴体内存活<0.5h。AGL酶解后的猪红细胞输注后2h在猕猴体内有29%存活,8h猕猴体内仍可检测到荧光标记的pRBCs。结论AGL能有效清除猪细胞表面的αGal抗原,减弱HAR,延长异种移植物的存活时间。
- 常宏宇檀英霞张成林卢雁平张海洁季守平宫锋章扬培
- 关键词：猪红细胞Α-半乳糖苷酶猕猴
- 脑胶质瘤SHG-44细胞MGMT基因甲基化状态及其与细胞对烷化剂药物耐药性关系的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨人脑胶质瘤SHG-44细胞O(6)-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因启动子甲基化状态与其蛋白表达以及细胞对烷化剂药物耐药性的相关性。方法取处于对数生长期的人脑胶质瘤SHG-44和U251细胞,分别加入5-氮-2’脱氧胞苷(5-Aza-CdR)培养6d后收集细胞,同时以未加5-Aza-CdR的正常培养细胞作为对照。提取细胞基因组DNA,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测MGMT基因的甲基化状态,并利用蛋白质印迹方法检测MGMT蛋白的表达。将收集的细胞分为3组,分别加入浓度为125、100、75、50、25、15、10μg/ml的尼莫司汀(ACNU)和50、25、15、10、5、2.5、1μg/ml的替莫唑胺(TMZ)以及等量的完全培养液(阴性对照),采用噻唑蓝(MTT)法分别检测细胞对烷化剂药物的敏感性,以细胞存活50%时所对应的药物浓度(IC50值)作为衡量细胞对药物敏感性的指标,实验重复3次。结果正常培养的SHG-44细胞MGMT基因启动子呈甲基化状态,MGMT蛋白表达缺失,对ACNU和TMZ的IC50值分别为30、11μg/ml,表现为对烷化剂药物敏感;用5-Aza-CdR处理后,SHG-44细胞MGMT基因启动子成功脱甲基化,MGMT蛋白恢复表达,其对ACNU和TMZ的IC50值分别升高了2.5和3.1倍(均P<0.05),对烷化剂药物的敏感性发生逆转。而正常培养和5-Aza-CdR处理的U251细胞MGMT基因启动子均呈未甲基化状态,都能表达MGMT蛋白,并且均表现为对ACNU和TMZ烷化剂药物耐药。结论MGMT基因甲基化状态能稳定地反映细胞诱导MGMT蛋白表达的能力,并有可能成为预测肿瘤组织对烷化剂化疗药物敏感性的分子标记。
- 郑长青季守平宫锋常宏宇王颖丽高红伟李素波檀英霞章扬培
- 关键词：甲基化
- 猪α1,3-半乳糖转移酶基因定向缺失质粒的构建被引量：1
- 2007年
- 目的:构建猪α1,3-半乳糖转移酶(α1,3-galactosyltranferase,GGTA1/α1,3-GT)基因的定向缺失质粒,用于GGTA1基因敲除。方法:以原代猪胚胎成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFFb)基因组DNA为模板,采用长程PCR方法扩增出GGTA1基因同源长、短臂,将长臂段在NotⅠ位点插入PBSLoxPNEOLoxP质粒中PGK-NEO-PolyA序列的5′端,将短臂段在SalⅠ和XhoⅠ位点插入该质粒PGK-NEO-PolyA序列的3′端。结果和结论:成功构建了猪GGTA1基因的定向缺失质粒NEOSL/GT,为下一步获得GGTA1基因敲除猪打下了基础。
- 常宏宇宫锋季守平王颖丽郑长青田曙光章扬培
- 关键词：基因打靶聚合酶链反应
- α1,3-半乳糖转移酶及其相关糖基转移酶的研究进展被引量：4
- 2008年
- 糖基化作用是最重要的翻译后修饰之一。多种多样的半乳糖化反应使得生物体可以表达极其多样的寡糖结构。α1,3-半乳糖转移酶(GGTA1)、ABO血型抗原合成酶及异红细胞糖苷酯合成酶(iGb3 s)均催化半乳糖在α1,3糖苷键之间的转移。前两者合成的抗原在异种移植(Galα1,3-Gal抗原,简称αGal)和同种异基因移植(ABO抗原)的免疫排斥反应中发挥重要的作用。本综述主要讨论这些转移酶的特性、其合成的抗原及其在移植中的意义。
- 常宏宇章扬培
- 关键词：ABO血型系统异种移植
- 二维、三维超声对胎儿先天性心血管畸形筛查作用分析被引量：1
- 2017年
- 目的探讨二维、三维超声对胎儿先天性心血管畸形筛查作用。方法采用随机抽样与回顾性研究方法，2013年1月至2016年4月选择在我院诊治的35名疑似胎儿心血管畸形的产妇作为研究对象，所有产妇都给予二维、三维超声，然后与病理检查结果进行对比分析，判断诊断准确性。结果在35名产妇胎儿中，病理检查结果显示出102处心脏异常情况，其中房室间隔异常35处、动脉心室连接异常28处、房室连接异常25处、动脉干异常14处。二维联合三维超声对各种类型心血管畸形的正确诊断率都高于二维超声（P〈0．05）。二维超声检查对胎儿先天性心血管畸形的诊断敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为84．9％、50．0％、96．6％和16．7％，而二维联合三维超声检查分别为97．0％、100．0％、100．0％和66．7％，二维联合三维超声检查的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值都高于二维超声（P〈0．05）。结论超声检查在胎儿先天性心血管畸形诊断中具有重要的意义。二维联合三维超声检查有利于对心脏形态学进行客观评估，提高诊断效果，有很好的应用价值。
- 鲁雪莹常宏宇
- 关键词：三维超声二维超声敏感度特异度
- 萘甲唑啉滴鼻液致婴儿中毒被引量：4
- 2010年
- 1例53d女婴因鼻塞,家长自行给予萘甲唑啉滴鼻液2滴后出现嗜睡、拒乳入院。入院时查体:P80次/min,R30次/min,精神萎靡,嗜睡,面色灰白,反应差,呼吸节律欠平稳,四肢冰冷,原始反射减弱。随后间或有抽泣样呼吸,R18～20次/min。立即给予吸氧、山莨菪碱及纳洛酮,6h后症状好转,3d后痊愈出院。
- 常宏宇李芳聂亚玲侯庆香张宏李曼曾立张霞
- 关键词：婴儿中毒
- 利用正负筛选打靶载体在猪肾细胞系PK-15细胞中敲除GGTA1基因被引量：1
- 2010年
- 目的半乳糖-α1,3-半乳糖(αGal)表位是猪到人异种移植中引起排斥反应的主要异种抗原。通过同源重组敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因可从异种移植物表面彻底清除αGal表位。本研究的目的在于利用正负筛选打靶载体定向缺失猪GGTA1基因。方法构建猪α1,3-半乳糖基转移酶基因正负筛选打靶载体pSL/GT,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,打靶载体线性化后用脂质体包裹转染猪肾细胞系PK-15细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,挑选抗性克隆进行PCR及Southern杂交鉴定。结果共得到436个抗性细胞克隆,其中31个克隆PCR结果阳性。经Southern杂交鉴定证实,其中1个克隆发生了同源重组,为杂合子。结论本研究构建了有效的猪GGTA1基因的正负筛选打靶载体pSL/GT,并利用其在猪肾细胞系PK-15细胞中定向缺失GGTA1基因,获得了杂合子GGTA1(+/-)PK-15细胞。
- 常宏宇宫锋季守平鲍国强李素波章扬培李芳聂亚玲
- 关键词：Α1,3-半乳糖基转移酶基因打靶异种移植
