张寿儒
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Peroxiredoxin 2基因慢病毒载体的构建及对结直肠癌SW480细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的:构建Peroxiredoxin 2(Prdx2)基因慢病毒表达载体,建立能够稳定高表达Prdx2的结直肠癌SW480细胞株,研究Prdx2的高表达对SW480细胞生长增殖的影响。方法:利用PCR扩增Prdx2编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin(GV218)中,构建Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)慢病毒表达载体,包装产生慢病毒颗粒,鉴定后将其转染SW480细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白表达;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测SW480细胞中Prdx2的mRNA和蛋白水平表达情况;MTT法检测细胞生长情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果:构建的重组慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)经鉴定正确;慢病毒转染SW480细胞后,细胞中Prdx2在mRNA和蛋白水平高表达。MTT法及平板克隆形成实验结果显示Prdx2高表达的SW480细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。结论:成功构建Prdx2基因慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin,筛选出稳定高表达Prdx2的SW480细胞株;高表达的Prdx2分子可显著促进结直肠癌SW480细胞增殖。
- 冯继红傅仲学文坤明张寿儒卢伟东王昊吴星烨
- 关键词：结直肠癌SW480慢病毒表达载体
- 沉默PLD2基因对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨沉默磷脂酶D2(phospholipases D2,PLD2)基因的表达对人结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响及其潜在的分子机制。方法:采用载有靶向PLD2的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)腺病毒转染SW480和SW620细胞;q RTPCR和Western blot法检测转染后结肠癌细胞PLD2的m RNA和蛋白质表达的变化;平板克隆形成实验和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖和细胞迁移能力的变化;采用Western blot法检测转染前后细胞中周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)蛋白的表达。结果:转染PLD2 si RNA后结肠癌细胞PLD2 m RNA和蛋白的表达量明显下降(均P<0.01),沉默PLD2表达后细胞的增殖和迁移能力明显受抑制,同时Cyclin D1和MMP-2蛋白的表达量也明显下调(均P=0.000)。结论:干扰PLD2表达引起的细胞增殖和迁移能力的下降可能与Cyclin D1和MMP-2表达下调密切相关,提示PLD2可能成为结肠癌治疗的新靶点之一。
- 杜昆利刘茂希张寿儒吴星烨曾丽傅仲学
- 关键词：细胞增殖细胞迁移结肠癌小干扰RNA
- Peroxiredoxin 2基因RNAi慢病毒载体构建及对SW480细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的构建Peroxiredoxin2(PRDX2)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,探讨PRDX2基因干扰后对结直肠癌SW480细胞增殖的影响。方法设计、合成靶向PRDX2的RNA干扰的序列,构建pGC-EGFP-shPRDX2慢病毒载体并进行鉴定,同时应用qRT-PCR和Western blot方法观察转染的SW480结肠癌细胞PRDX2 mRNA和蛋白表达的抑制效果,并通过MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖变化。结果成功构建PRDX2基因慢病毒载体并经测序证实;pGCEGFP-shPRDX2可有效抑制结直肠癌SW480细胞PRDX2的表达,感染慢病毒的SW480细胞中PRDX2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);SW480细胞经PRDX2 RNA干扰后其生长和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论 PRDX2基因RNAi慢病毒表达载体在SW480细胞中表达稳定可靠,PRDX2基因干扰后有效抑制了结直肠癌SW480细胞的增殖和生长,为进一步探讨PRDX2在结直肠癌发生、发展及转移中的作用奠定基础。
- 冯继红傅仲学文坤明卢伟东王昊陈旺盛郭金宝张寿儒
- 关键词：绿色荧光蛋白质类慢病毒载体
- 低位直肠癌保肛手术的现状与进展被引量：6
- 2009年
- 张寿儒窦拉加张成武王晓武
- 关键词：低位直肠癌保肛手术肿瘤手术标准术式恶性肿瘤淋巴引流生活质量
