李瑛
- 作品数：33 被引量：105H指数：7
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- 弓形虫P30与佐剂CTA_2/B复合基因酵母表达载体的构建与生物信息学分析被引量：8
- 2005年
- 目的构建含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组P30CTX蛋白奠定基础。方法PCR扩增P30CTX复合基因,产物回收后与pMD18T载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,经氨苄抗性筛选及测序,建立克隆载体pMD18T P30CTX;克隆载体与表达载体双酶切后,回收1313bp的P30CTX基因,亚克隆入酵母表达载体,转化大肠埃希菌DH5α,筛选、测序后建立酵母表达载体PGAPZαA P30CTX。重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定。使用生物信息软件分析P30CTX复合基因,预测编码蛋白结构。结果重组质粒经PCR可得1313bp的特异条带,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切获得1313bp和3085bp的条带,与预期大小一致,测序结果证实为pGAP P30CTX基因,序列分析同源性为99.82%,P30CTX蛋白结构折叠无明显改变。结论成功构建了含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,预测毕赤酵母表达系统对P30CTX的抗原性不会产生影响。
- 周怀瑜何深一丛华古钦民李瑛赵群力杨婷婷张加勤
- 关键词：刚地弓形虫P30酵母表达载体
- 阻断共刺激分子B7-1和B7-2对感染蠕虫小鼠免疫应答的影响
- 2002年
- 目的 探讨共刺激分子 B7- 1和 B7- 2在蠕虫感染免疫中的作用。 方法 用 BAL B/ c小鼠皮下注射感染巴西日圆线虫第 3期幼虫 ,在感染当天、感染后第 3d及第 7d分别腹腔注射大鼠抗 B7- 1和 /或 B7- 2单抗 ,以阻断共刺激信号。于感染当天 ,感染后第 7d和第 14 d,计数小鼠外周血液的嗜酸性粒细胞 ,于感染后第 14 d计数小肠绒毛嗜酸性粒细胞 ;EL ISA采用 Watanabe N方法测定 Ig E抗体。 结果 联合应用两种抗体抑制了外周血液及小肠组织的嗜酸性粒细胞增多 ;抑制了 Ig E抗体的产生。然而 ,单用抗 B7- 1或抗 B7- 2一种单克隆抗体 ,对嗜酸性粒细胞计数和 Ig E水平无明显影响。 结论 在巴西日圆线虫感染免疫中 ,T细胞的激活需要 B7- 1和 B7- 2共刺激分子的参与 ;而 B7- 1或 B7-
- 黄勇古钦民侯桂华李瑛丛华周怀瑜赵群力禹卉
- 关键词：共刺激分子小鼠免疫应答
- 弓形虫主要表面抗原p30单价及复合基因疫苗的构建被引量：12
- 2005年
- 目的 构建弓形虫单价基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0及复合基因疫苗 pcDNA3 1 p3 0 ROP2 ,并比较两种疫苗对小鼠的免疫保护性。 方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株基因组DNA中分别扩增编码弓形虫主要表面抗原 p3 0和弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )的基因片段 ,经T A克隆 ,将p3 0单价基因及 p3 0 ROP2复合基因片段分别插入真核细胞表达载体pcDNA3 1,构建重组真核表达质粒 pcDNA3 1 p3 0及pcDNA3 1 p3 0 ROP2。分别免疫BALB/c小鼠 ,设磷酸缓冲盐溶液 (PBS)组、pcDNA3 1空质粒组为对照 ;酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测血清特异性IgG抗体 ;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。 结果 获得 pcDNA3 1 p3 0、pcDNA3 1 p3 0 ROP2重组表达质粒 ,用 pcDNA3 1 p3 0 ROP2免疫的小鼠 ,其IgG抗体吸光度 (A490 =2 0 5 1± 0 3 3 7)高于用 pcDNA3 1 p3 0的吸光度 (A490 =1 892± 0 3 69) (P <0 0 5 )。攻击感染弓形虫后小鼠生存时间 ,用 pcDNA3 1 p3 0 ROP2免疫的小鼠 ,较用 pcDNA3 1 p3 0的明显延长 (P <0 0 1)。 结论 弓形虫不同生活阶段的抗原复合基因疫苗较单价基因疫苗具有更好的免疫保护性。
- 杨婷婷何深一蒋华古钦民丛华周怀瑜张加勤李瑛赵群力
- 关键词：PCDNA3弓形虫基因疫苗真核细胞表达载体
- 弓形虫复合抗原基因P30-ROP2体外扩增、克隆及真核表达重组质粒的构建被引量：5
- 2005年
- 目的 构建弓形虫RH株 pcDNA3.1 P30 ROP2 真核表达重组质粒,为进一步表达及 DNA疫苗的研制作准备。 方法 用PCR技术从弓形虫RH分离株的基因组DNA中扩增编码 P30基因片段和棒状体蛋白(ROP2)的基因片段,重组入 pUC18克隆载体,然后将 pUC18 P30 ROP2中的 P30 ROP2 外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,再经含氨苄青霉素的LB培养基筛选、酶切及PCR鉴定。 结果 从弓形虫RH株基因组中扩增出特异的 P30、ROP2 片段,克隆成功 pUC18 P30 ROP2 重组质粒;经亚克隆、筛选鉴定获得了 pcDNA3. 1 P30 ROP2重组表达质粒。 结论 成功构建了弓形虫 pUC18 P30 ROP2重组克隆质粒,亚克隆成功 pcDNA3.1 P30 ROP2真核表达重组质粒,为下一步DNA疫苗的研究奠定了基础。
- 蒋华何深一周怀瑜丛华古钦民李瑛赵群力
- 关键词：弓形虫P30克隆
- 编码弓形虫表面抗原P30、P22复合基因真核表达载体的构建被引量：1
- 2005年
- 目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒, 为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备。 方法 用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组 DNA;用 PCR技术从基因组DNA中扩增编码表面抗原 P30、P22 的基因片段,分别重组入 pMD18 T载体中。将 pMD18 T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入 pUC18克隆载体中, pUC18 P30 P22 中的 P30 P22 片段经酶切、纯化后,亚克隆入 pcDNA3.1( )真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定。 结果 从弓形虫 RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆 pUC18 P30 P22 重组质粒的酶切片段分别与 P30、P22基因大小一致;经亚克隆、筛选鉴定获得了 pcDNA3.1 P30 P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致。结论 成功构建弓形虫 pUC18 P30 P22重组质粒和 pcDNA3.1 P30 P22 重组质粒,为研制弓形虫 DNA疫苗奠定了基础。
- 郭岚古钦民李瑛周怀瑜赵群力丛华何深一
- 关键词：弓形虫属P30基因
- 弓形虫表面抗原P22、P30复合基因在原核细胞中表达的研究被引量：12
- 2002年
- 目的 :对含有P2 2、P30复合基因的重组菌进行IPTG诱导表达 ,进而检测复合基因的融合表达产物的免疫活性。方法 :用IPTG对工程菌进行诱导表达 ,表达产物行SDS PAGE蛋白凝胶电泳及Western Blot免疫印记检测。结果 :蛋白电泳结果显示 ,阳性重组菌比阴性菌在 6 6 .5KDa位置上明显多一条带 ,此条带可与P30抗体结合并使免疫印记显示阳性结果。结论 :含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体经诱导表达出融合蛋白 ,其内的组分蛋白P30具有与其相应抗体结合的能力。
- 古钦民王伟卞继峰丛华胡海燕何深一李瑛
- 关键词：弓形虫基因P30基因P22
- 弓形虫SAG1-SAG2复合DNA疫苗免疫小鼠诱导的免疫保护性被引量：11
- 2006年
- 目的利用已构建的弓形虫主要表面抗原SAG1DNA疫苗及SAG1-SAG2复合DNA疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法将两核酸疫苗分别通过肌肉注射免疫小鼠,对照组注射pcDNA3.1空质粒。ELISA法检测血清IgG抗体及细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-4;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定免疫鼠脾脏NK细胞杀伤率;流式细胞仪测定T细胞亚群;用弓形虫速殖子腹腔攻击感染小鼠,观察小鼠的生存时间。结果SAG1-SAG2组小鼠IgG抗体、IFN-γ、IL-2及CD4+/CD8+细胞比例均高于SAG1组(P<0.05);各组均未检测到IL-4;复合DNA疫苗组感染弓形虫后生存时间较单基因组延长(P<0.01)。结论弓形虫SAG1-SAG2复合DNA疫苗较SAG1单基因疫苗具有更好的免疫保护性。
- 孙怡何深一丛华杨婷婷周怀瑜古钦民李瑛赵群力
- 关键词：弓形虫复合基因DNA疫苗
- 含有弓形虫表面抗原P22、P30复合基因的载体构建被引量：2
- 2002年
- 目的 选择弓形虫表面抗原P2 2、P30的有效基因片段 ,共同构建在同一克隆载体pUC19和表达载体 pGE MEXTM- 1上 ,并保证其连接方向及开放读码框的正确。方法 根据已发表P30基因序列 ,用PCR技术调取所需基因片段 ,P2 2基因片段来自重组质粒pGEX - 2T -v2 2 ,将两片段定向克隆于克隆载体 pUC19及表达质粒pGEMEXTM- 1上 ,用酶切及测序的方法对重组子进行鉴定。结果 酶切产物经电泳显示条带清晰 ,P2 2、P30基因片段的泳动位置分别在 4 4 6bp和 86 0bp的位置 ,与预计结果一致 ;测序结果表明插入的复合基因片段方向及序列均正确。结论 成功构建的含有P2 2、P30基因片段的质粒重组体 ,保证了两基因连接方向、序列及开放读码框的正确 ,为今后两基因的进一步复合表达研究奠定了基础。
- 王伟古钦民刘师莲何深一胡海燕李瑛卢翌耿昭
- 关键词：弓形虫P30基因
- 弓形虫P30基因非融合蛋白表达的研究被引量：4
- 2001年
- 目的 :构建弓形虫主要表面抗原P30基因的原核表达载体并在E .coli中进行表达。方法 :采用定向克隆的方法 ,将PCR扩增得到的P30片段 ,插入原核表达质粒 pBV2 2 0上 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,于氨苄LB培养平板上筛选阳性克隆 ,经过酶切及PCR扩增鉴定重组子。将含阳性重组子 pBV2 2 0 P30的工程菌经温度诱导表达 ,SDS PAGE电泳及免疫印迹分析。结果 :成功构建了 pBV2 2 0 P30重组质粒 ;SDS PAGE电泳及Western blot显示表达P30非融合蛋白的分子量为 2 9kD ,且能被弓形虫高免鼠血清识别。结论 :从弓形虫基因组DNA中获取P30基因 ,并成功构建了 pBV2 2 0 P30重组质粒 ,诱导表达了P30非融合蛋白。对弓形虫病基因疫苗研制奠定了基础。
- 丛华古钦民周怀瑜赵群利何深一李瑛
- 关键词：弓形虫属P30基因基因表达
- 济南市蔬菜污染土源性线虫卵情况的调查
- 2002年
- 为了解土源性线虫传播途径和流行因素,我们于1999年7～9月对土源性线虫污染蔬菜的情况进行了调查。1 材料和方法1.1 标本采样:在济南市五处菜市场随机采取新鲜蔬菜,每份约500g;在五家超市随机采取“净菜”标本,每份约250g。1.2 标本的清洗和浓缩:用毛刷蘸取自来水刷洗蔬菜标本,“净菜”用自来水直接浸洗,将洗过的水倒入锥形杯中,待其自然沉淀。1h后倾去其上层液,再放入清水,搅拌后静置。如此反复水洗沉淀,直至上液清晰为止。倾去上液。
- 周怀瑜赵群力丛华李瑛何深一古钦民
- 关键词：蔬菜污染
