杨文君
- 作品数：26 被引量：28H指数：4
- 供职机构：雅安职业技术学院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- ScYLV和SrMV的PCR引物优化设计被引量：4
- 2012年
- 以甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,,ScYLV)和高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,,SrMV)为材料,运用DNAMAN、Primer Premier 5.0和Oligo6.0等软件设计PCR引物,,进行普通PCR、多重PCR、实时定量PCR反应,检验所设计引物的PCR扩增效率、特异性和有效性。归纳总结多种PCR反应中引物设计的一般性思路,提出启发性的方法,并将以上经验付诸实践检验;最后将研究思路概括为:针对性、实用性和一般性。
- 王洪星张雨良罗志文杨文君刘志昕
- 关键词：甘蔗黄叶病毒PCR引物设计PRIMER
- 雅安藏茶醇沉物对小鼠耐缺氧作用实验研究
- 2018年
- 目的:研究雅安藏茶醇沉物对小鼠的耐缺氧作用及其机制。方法:根据体重将ICR小鼠随机分成4组:空白对照组、雅安藏茶醇沉物100、200、400mg/kg 3个剂量组,连续灌胃16d,分别采用常压耐缺氧实验、急性脑缺血性缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验,观察雅安藏茶醇沉物对小鼠的耐缺氧作用;并通过检测血清与肝脏中的SOD、MDA含量,探讨其可能的作用机制。结果:雅安藏茶醇沉物可以明显延长小鼠常压缺氧条件下的存活时间和急性脑缺血缺氧条件下的张口喘气时间,且能够增强小鼠血清和肝脏SOD活性,降低MDA含量。结论:雅安藏茶醇沉物具有明显的耐缺氧作用。
- 袁野章斌梁大伟杨文君姚永秀
- 关键词：耐缺氧超氧化物歧化酶丙二醛
- 甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化被引量：4
- 2011年
- 为提高甘蔗抗病性,本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no.HQ342888),利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术,针对病毒外壳蛋白CP,设计两对含有酶切位点的特异性引物,CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1,以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板,pRNAi1017为中间载体,分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R,将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置,构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R,经过PstⅠ酶切鉴定,证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法,以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草,经过PCR检测,得到12株阳性转基因植株,Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测,证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录,该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础。
- 张雨良熊国如王健华张树珍官梅花杨文君刘志昕
- 关键词：甘蔗黄叶病毒RNA干扰烟草转化
- 甘蔗黄叶病毒P0蛋白基因细菌双杂交诱饵载体的构建和自激活鉴定
- 2015年
- 由甘蔗黄叶病毒所引起的甘蔗黄叶病是甘蔗生产中潜在的重要病毒病害之一。该病毒属黄症病毒科(Luteoviridae)中的马铃薯卷叶病毒属(Poleroviruses)。根据甘蔗黄叶病毒海南分离物(SCYLV-CHN-HN1)全基因组序列(Gen Bank No.HQ342888),设计P0蛋白基因的一对特异性引物P0-Bait F/P0-Bait R。以实验室保存的重组质粒p MD18T-P0为DNA模板,PCR扩增P0蛋白基因。然后将P0蛋白基因和细菌双杂交诱饵质粒p BT分别进行双酶切后,连接构建重组诱饵质粒p BT-P0。经PCR扩增、双酶切鉴定和序列分析,表明获得了细菌双杂交重组诱饵载体p BT-P0,且编码框正确。将重组载体p BT-P0转化细菌双杂交系统Bacterio Match RⅡScreening Reporter感受态细胞,进行自激活和毒性验证。结果显示p BT-P0重组载体在细菌双杂交系统中无自激活作用及毒性作用,表明本试验构建的p BT-P0可应用于该系统筛选与之互作的寄主蛋白。
- 杨文君余乃通张雨良王健华谢慧敏刘锋刘志昕
- 关键词：甘蔗黄叶病毒
- SCYLV-HN1基因组序列分析及CP、P0细胞双杂交诱饵质粒构建
- 甘蔗是热带、亚热带主要的经济作物之一，全球60％的食糖均来至于甘蔗，我国的食糖更是有90％来自于甘蔗。随着能源短缺，甘蔗又被用作生产生物酒精的能源作物。甘蔗黄叶病是近20年来才发现的一种严重威胁甘蔗生产的世界性病毒病害，...
- 杨文君
- 关键词：甘蔗黄叶病毒基因组序列原核表达
- 文献传递
- 香蕉条斑病毒ORFⅠ、ORFⅡ在大肠杆菌中的原核表达和自激活特性的鉴定
- 2010年
- 目前,香蕉条斑病毒所有3个ORF表达产物功能均不明确,通过双杂技术研究病毒未知蛋白与宿主蛋白的互作,可以初步推断未知蛋白的功能。本实验旨在构建香蕉条斑病毒ORFⅠ和ORFⅡ在细菌双杂系统中的诱饵质粒。首先以课题组保存的连接有香蕉条斑病毒河口分离物全基因组的pMD-18T载体DNA为模板,经过PCR扩增,切胶回收,并通过与带有λcI基因的pBT载体共同双酶切及T4连接酶连接后,得到与λcI基因融合表达的重组载体pBT-ORF1和pBT-ORF2。转化大肠杆菌XL1-BlueMRF'报告菌株,用IPTG(0.1mmol/L)诱导目的基因片段表达。Westernblotting结果表明,ORF1-λcI和ORF1-λcI两种融合蛋白均成功表达,且大小与预期一致。之后,pBT-ORF1及pBT-ORF2分别与空质粒pTRG共转化XL1-BlueMRF'报告菌株,pBT空质粒和pTRG-Gal11p共转化作为阴性对照。结果显示pBT-ORF1及pBT-ORF2均无自激活现象,可以进行后续的细菌双杂工作。本实验为BSV与宿主的细菌双杂系统的建立及蛋白组学的研究奠定了基础。
- 林湛松王健华张雨良江林杨文君余乃通刘志昕
- 关键词：原核表达WESTERNBLOTTING
- 槟榔植原体膜蛋白基因的克隆及其抗血清制备被引量：6
- 2014年
- 根据实验室测得的槟榔植原体膜蛋白基因(Ac Pmp)序列设计1对特异引物mp-FP/mp-RP,以病样槟榔总DNA为模板扩增该Ac Pmp的编码区并连接到p MD19T simple中间载体。将测序正确的阳性菌提取质粒p MD19T-Ac Pmp,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后回收Ac Pmp片段,然后以正确的编码框连接到原核表达载体p ET32a(+),转化Escherichia coli BL21感受态细胞。含有p ET32a-Ac Pmp的BL21表达菌经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,在30℃,0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,可产生部分可溶性的融合蛋白。利用Ni2+-NTA亲和层析柱法进行纯化并获得高纯度的可溶性融合蛋白。将纯化后的融合蛋白多次免疫家兔,取其抗血清,以融合蛋白(1∶10 000稀释)作抗原,间接ELISA法测定抗血清效价大于125 000。Western Blot杂交结果表明槟榔植原体膜蛋白抗血清能与融合蛋白特异性结合。
- 杨文君余乃通张雨良王健华刘志昕
- 关键词：膜蛋白基因原核表达抗血清制备
- 应用多重RT-PCR检测甘蔗黄叶病毒和高粱花叶病毒被引量：8
- 2011年
- 建立了多重RT-PCR同时检测甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV)和高粱花叶病毒病毒(Sorghummosaic virus,SrMV)的技术体系,该体系可有效地对甘蔗田间植株和试管苗进行检测。根据引物之间的互补性及引物的Tm值筛选多重PCR引物。确定适宜的PCR缓冲液的浓度为1×,退火温度为53℃,延伸温度为72℃。
- 王洪星张雨良罗志文杨文君龚殿孙玉娟张树珍刘志昕
- 关键词：多重RT-PCR病毒检测甘蔗
- 汉源花椒挥发油提取工艺及其抑菌作用研究
- 2015年
- 目的:探讨汉源花椒挥发油的最佳提取工艺,验证其体外的抑菌作用。方法:采用正交试验法,以挥发油含量为指标,对萃取剂用量、提取时间和溶剂用量等因素进行研究。通过抑菌圈实验对其抑菌效果、最低抑菌浓度(MIC值)和最低杀菌质量浓度(MBC值)进行测定。结果:最佳提取工艺条件为提取时间8h,用50 m L乙醚萃取,8倍水量进行蒸馏提取,平均得率为6.97%。汉源花椒挥发油对供试细菌有明显抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强(MIC值为1.5 mg/m L,MBC值为3.1 mg/m L)。结论:该提取工艺合理,汉源花椒挥发油具有良好的抑菌作用。
- 章斌李顺源杨文君彭裕红
- 关键词：挥发油抑菌作用
- SCYLV-HN1基因组序列分析及CP、P0细菌双杂交诱饵质粒构建
- 甘蔗是热带、亚热带主要的经济作物之一,全球60%的食糖均来至于甘蔗,我国的食糖更是有90%来自于甘蔗。随着能源短缺,甘蔗又被用作生产生物酒精的能源作物。甘蔗黄叶病是近20年来才发现的一种严重威胁甘蔗生产的世界性病毒病害,...
- 杨文君
- 关键词：甘蔗黄叶病毒外壳蛋白RNA沉默抑制子
- 文献传递
