武佳斌
- 作品数：10 被引量：37H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 采用不同日龄的鸡胚接种不同浓度的种毒的方法提高鸡新城疫Ⅰ系冻干活疫苗的产量比较
- 2002年
- 齐铁英张亚华南锡陆明哲齐琳南文龙武佳斌李鑫张丽云姜力
- 关键词：日龄鸡胚种毒
- PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究被引量：17
- 2010年
- 为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株疫苗的免疫机理和明确PRRSV变异株活疫苗和灭活疫苗各自的免疫特性,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4)活疫苗和PRRSV变异株(JXA1)灭活苗免疫PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫后21d用PRRSV变异株HuN4强毒攻毒,ELISA方法检测血清中PRRSV特异的抗体水平及TNF-α、IFN-α、IL-1、IL-6和CRP细胞因子水平,荧光定量RT-PCR方法检测病毒血症的发生和持续情况,并取主要器官进行病理组织学观察。结果表明:HuN4活疫苗组免疫后14d便可检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d各细胞因子水平升高,攻毒后21d病毒血症完全消失,免疫后各器官没有明显病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化轻微;JXA1株灭活苗组免疫期间没有检测到PRRSV特异性抗体,攻毒后5d～9d各细胞因子水平升高,攻毒后病毒血症持续存在,免疫后各器官有轻微病理变化,攻毒后临床症状和各组织器官病理变化比HuN4活疫苗组严重,但比对照组明显减轻。本实验表明,HuN4活疫苗能够快速有效的激发机体的体液免疫反应,在抵抗PRRSV变异株HuN4强毒攻毒时,临床症状明显优于JXA1灭活苗。
- 李丽琴蔡雪辉刘永刚王淑杰石文达徐敏荣福龙武佳斌徐明明田志军胡守萍
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征
- PRRSV CH-1a株致弱过程中不同代次病毒结构蛋白基因遗传变异分析被引量：1
- 2009年
- 对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株致弱过程中不同代次病毒(S39、S70、S148、S171)及国内分离株(GD3、JS1、JS5)的结构蛋白基因(ORF2～ORF7)进行了克隆和测序,并与国内外毒株序列进行比较和系统发育进化分析。结果表明,PRRSV CH-1a株各传代毒株和国内分离毒株各个结构蛋白序列均存在不同程度的变异,与GenBank上的登录序列进行了比对,发现GP2～GP5同源性在83.1%～100%,M蛋白同源性在95.4%～100%,N蛋白同源性在87%～100%,其中以GP2、GP3和GP5发生突变几率较大;另外,发现PRRSV CH-1a不同代次病毒GP5的H38突变为Q38(S70),L146突变为Q146(S148),而2006年分离的PRRSV变异毒株由F39突变为I39,而且分离毒株的毒力明显强于经典毒株。进化分析表明,GD3毒株与2006年～2007年分离的毒株以及PRRSV CH-1a株的亲缘关系均较近,处于二者的中间位置。
- 刘永刚蔡雪辉石文达马平王淑杰李成君武佳斌徐敏
- 关键词：PRRSVCH-1A株致弱
- 抗谷氨酸脱氢酶蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了谷氨酸脱氢酶蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明将链球菌GDH基因的抗原性和疏水性进行分析，去除信号肽和跨膜区域后设计一对引物对GDH基因进行克隆，以大肠杆菌成功表达了WC-SS7的GDH蛋白，将纯化的G...
- 王淑杰蔡雪辉徐敏武佳斌刘永刚石文达李丽琴徐明明荣福龙
- 文献传递
- 猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2009年
- 为建立猪链球菌快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌谷氨酸脱氢酶蛋白(GDH)为抗原,建立了检测猪链球菌抗体的间接ELISA诊断方法。实验确定了最佳抗原包被浓度为6μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为60min,兔抗猪酶标抗体的最佳稀释倍数为1∶2000,其作用时间为60min;判定标准为S/P值≥0.210时判为阳性,S/P值≤0.166时判为阴性,介于两者之间的判为可疑。实验结果表明该方法特异性、敏感性和重复性均较好,适用于猪链球菌所有亚型的抗体检测,为猪链球菌的流行病学调查提供了一种简便快速的血清学检测方法。
- 徐敏王淑杰蔡雪辉刘永刚石文达武佳斌李丽琴
- 关键词：猪链球菌间接ELISA
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1R株全基因组序列测定及遗传变异分析被引量：4
- 2010年
- 为了解猪繁殖与呼吸综合征的弱毒(PRRSV)株在基因组水平上的变异和分子遗传特征,本研究对致弱毒株CH-1R株进行了全基因组序列的测定。结果表明,CH-1R株基因组序列全长15424nt,具有典型的动脉炎病毒基因组结构。通过与亲本株CH-1a株序列进行比对,发现其基因组内碱基的缺失和突变主要分布在ORF1a基因的第2191位～2193位、ORF5基因的第439位、ORF6基因的第49位和ORF7基因的第28位和第139位。其中PRRSVCH-1R株的Nsp2蛋白和结构蛋白的变异相对较大,尤其是Nsp2蛋白的变异,同CH-la株相比,CH-1R株的Nsp2蛋白存在多处核苷酸的突变,其中包括连续3个核苷酸发生缺失;由结构蛋白基因推导的氨基酸序列共有17处变异,在各结构蛋白中以GP3和GP5蛋白变异较大,而高度保守的M蛋白和N蛋白,同样发生了变异,由此预测了Nsp2蛋白的R631E、GP5蛋白的L146Q、M蛋白的Q16L和N蛋白的K46N处毒力相关的氨基酸位点,推测其在毒株致弱过程中起到了重要的作用。
- 石文达刘永刚王洪峰王淑杰马平徐敏武佳斌蔡雪辉
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组序列分析
- 猪链球菌WC-SS7株GDH基因的表达及GDH蛋白单克隆抗体的制备被引量：5
- 2009年
- 目的原核表达猪链球菌7型临床分离株WC-SS7的GDH蛋白,制备抗GDH蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法将临床分离的猪链球菌7型WC-SS7株的GDH基因克隆入表达载体pET-30a,转入大肠杆菌中,用IPTG诱导表达,用Ni化琼脂糖柱(Pierce)纯化的GDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,对抗WC-SS7GDH蛋白单克隆抗体进行特异性鉴定及亚型鉴定。结果表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳分析后,在约为52KD处可见一条明显的诱导表达带,说明GDH蛋白得到了正确的表达;细胞融合后检测为阳性的细胞株经过3次单克隆筛选,最终得到了6株能和GDH蛋白反应的能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,这些单抗通过Western鉴定结果显示其具有良好的特异性,6株单克隆抗体亚型鉴定结果显示其亚型均为IgG1型,且轻链均为κ链。结论本研究成功表达了WC-SS7的GDH蛋白,并获得了6株能和GDH蛋白反应的、能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,所获得的重组GDH蛋白及特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,为猪链球菌临床感染血清学诊断方法的建立奠定基础。
- 王淑杰徐敏蔡雪辉武佳斌刘永刚王洪峰石文达李丽琴徐明明荣福龙
- 关键词：猪链球菌原核表达单克隆抗体
- 鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用被引量：3
- 2002年
- 采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样)。鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗。鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上。全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗。
- 齐铁英张亚华南锡陆明哲佐颖姜力齐琳南文龙武佳斌李鑫
- HP-PRRSV（HuN4）截短Nsp2蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
- 猪繁殖与呼吸综合征/(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS/)是在1987年在美国首次发现,由猪繁殖与呼吸综合征病毒/(Porcine reproducti...
- 武佳斌
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征原核表达单克隆抗体
- 文献传递
- 冻干种毒在制备鸡传染性喉气管炎和鸡痘活疫苗生产中的应用
- 2003年
- 齐铁英张亚华南锡陆明哲齐琳南文龙武佳斌李鑫
- 关键词：鸡传染性喉气管炎鸡痘活疫苗
