沈昕
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划湖北省“十一五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肝癌细胞特异性结合双价抗体的构建表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建和表达与肝癌细胞特异结合的双价单链抗体(bivalentsingle-chainFv,BsFv),并鉴定该双价抗体的生物活性。方法以与肝癌细胞特异结合的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过聚合酶链反应(PCR)方法扩增出两个scFv片段,将其连入原核表达载体pAB1;构建的表达载体转化大肠埃希菌TG1,挑取单克隆细菌进行扩增,提取质粒酶切、测序鉴定。阳性菌经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Westernblot鉴定,间接免疫荧光流式细胞术(FACS)测定与肝癌细胞特异结合的特性。结果经酶切鉴定以及DNA测序结果表明该BsFv构建成功,SDS-PAGE、Westernblot鉴定表明表达蛋白相对分子量与BsFv理论值一致,且表达产物同亲本scFv比较,与肝癌细胞特异结合活性增强。结论BsFv构建成功,BsFv较scFv具有明显优势,为其用于临床肿瘤的诊断和治疗奠定了基础。
- 黄宇余冰邢薇沈昕肖代雯刁智娟刘静代维赵晓蓉雷萍沈关心
- 关键词：单链抗体肝癌细胞双价抗体
- 抗TfR scFv-SLC融合蛋白的构建、表达与鉴定
- 2009年
- 目的:构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体(scFv)-次级淋巴组织趋化因子(SLC)融合蛋白。方法:以pDsRed2-N1-CCL21为模板,设计引物,采用PCR扩增得到两端有EcoRⅠ、NotⅠ酶切位点的SLC基因。以EcoRⅠ、NotⅠ双酶切pET28a+scFv载体和PCR产物,连接后转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导TfRscFv-SLC融合蛋白的表达。SDS-PAGE、Western blot分析TfR scFv-SLC的表达特性。FCM测定scFv-SLC与肿瘤细胞结合活性。结果:EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定可见约350bp的小片段,与SLC的理论值相符,DNA测序结果表明含有TfRscFv-Linker-SLC序列,表明pET28a+scFv-SLC融合基因表达载体构建成功。IPTG诱导产物经SDS-PAGE分析可见约41kD的条带,符合scFv-SLC理论值。FCM结果显示TfR scFv-SLC可与MCF-7、HepG2细胞结合,且结合的阳性率较TfRscFv有所提高。结论:成功构建与表达scFv-SLC融合蛋白,且能与MCF7、HepG2等细胞特异性结合。
- 潘兴飞刘静沈昕许海霞姚欣欣陈广生胡军朱慧芬雷萍沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体次级淋巴组织趋化因子融合蛋白
- 内质网滞留型抗TfR胞内抗体的构建、表达及其对肿瘤细胞生长的抑制
- 目的:铁是细胞生长增殖及机能活动所必需的微量元素之一,而肿瘤细胞主要是通过高表达转铁蛋白受体(TfR)来摄取铁。铁剥夺可以抑制肿瘤细胞生长及促进肿瘤细胞凋亡,本研究拟通过胞内抗体技术探讨内质网滞留型抗转铁蛋白受体单链抗体...
- 彭吉林吴砂赵晓平王敏李文涵沈昕代维雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体胞内抗体肿瘤细胞
- 文献传递
- 抗TfR单链抗体—AP融合蛋白的构建、表达与鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的构建、表达和鉴定抗转铁蛋白受体(TfR)单链抗体———碱性磷酸酶(AP)融合蛋白。方法用SfiⅠ和NotⅠ分别酶切抗转铁蛋白受体scFv表达质粒pUC19/119,获得scFv基因,直接亚克隆到表达载体pDAP2中,在TG1菌中表达scFvAP融合蛋白,SDSPAGE分析scFvAP的分子量,酶免疫测定鉴定其抗体和酶活性。结果scFvAP融合蛋白表达载体经scFv特异性引物PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳可见约700bp条带,符合scFv基因理论值大小,IPTG诱导产物经SDSPAGE分析可见约为75ku的蛋白条带,符合scFvAP融合蛋白分子量的理论值大小,直接细胞ELISA测定证明表达产物scFvAP融合蛋白具有结合人TfR和AP活性的双重功效。结论抗人scFvAP融合蛋白表达载体构建成功,表达产物具有结合人TfR和AP活性的双重功效,为其临床检测应用奠定了基础。
- 肖代雯黄宇沈昕邢薇刁智娟刘静雷萍陶娟沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体碱性磷酸酶融合蛋白
- 抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:抗转铁蛋白受体(TfR)双价抗体(bsFv)构建、表达及其与细胞结合的活性鉴定。方法:以抗TfR的单链抗体(scFv)为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,通过PCR方法扩增两条scFv片段,将其连接并克隆至原核表达载体pAB1,转化大肠杆菌TG1,阳性菌经IPTG诱导表达,FCM检测bsFv与K562,HepG2肿瘤细胞结合的活性及特异性。结果:酶切鉴定及DNA测序证明该bsFv构建成功;SDS-PAGE、Western blot鉴定表明表达蛋白分子量与bsFv理论值一致;FCM结果证明bsFv可与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合,且结合的阳性率较scFv有所提高。结论:成功构建了抗转TfR的bsFv,且能与K562,HepG2肿瘤细胞特异性结合。
- 肖代雯朱慧芬沈昕邢薇黄宇雷萍黄韬王国斌沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体双价抗体
- 抗TfR双价抗体的构建、表达及其鉴定
- 目的:抗转铁蛋白受体双价抗体(BsFv)的构建,表达及其与细胞结合活性与特异性鉴定。方法:①以抗转铁蛋白受体scFv为模板,设计引物引入中间连接肽(G4S)及酶切位点AscI,扩增出两个 scFv片段,将其连接,并克隆至...
- 肖代雯沈昕邢薇黄宇雷萍朱慧芬刁智娟刘红云沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体双价抗体单链抗体
- 文献传递
- 抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应。方法:采用CFSE染色、PI-AnnexinⅤ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用。结果:抗人TfRmAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应。
- 沈昕邢薇何峰容李黎刘静朱慧芬雷萍沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单克隆抗体
