王明蓉
- 作品数：22 被引量：39H指数：4
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种特异性结合CD4的全人源抗体及应用
- 本发明提供了一种全人源抗CD4抗体，其重链可变区具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与辅助T细胞膜上的表面抗原分化簇4(CD4抗原)特异性地结合，其...
- 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪
- 文献传递
- 一种新的大肠埃希菌蛋白质快速合成方法
- 2019年
- 目的在大肠埃希菌中建立同时进行PCR克隆和重组蛋白快速表达的方法。方法通过TA载体将包含目的基因和全部蛋白表达元件的蛋白表达单位引入大肠埃希菌后,无需使用任何限制性酶,直接在大肠埃希菌中表达编码的蛋白质。结果通过小规模或大规模表达多种不同蛋白质,证实了该方法的有效性和可靠性。使用该方法获得的绿色荧光蛋白和血管内皮生长因子特异性VH的可溶性蛋白表达量分别达到30和20 mg/L。结论该法设计灵活,且易于进行多种蛋白质的平行表达,为快速筛选理想的蛋白突变体提供了新途径。
- 何勇智余馨丛聪代云见王明蓉何明跃
- 关键词：大肠埃希菌聚合酶链反应
- 一种构建大容量同义密码库及优化基因模板的方法
- 本发明公开了构建大容量同义密码库及优化基因模板的方法，它是通过优化基因模板,改进蛋白质的理化性质。本发明优化基因的方法可以改进编码目标蛋白的核苷酸密码，并维持目标蛋白的原氨基酸序列不变,进而改进目标蛋白的可溶性、功能、产...
- 王明蓉张雪梅葛永红何明跃
- 文献传递
- 重组sTNFα-R1蛋白同义密码突变库的构建及筛选
- 2013年
- 目的:以重组肿瘤坏死因子-α受体1(sTNFα-R1)的基因序列为模板,构建同义密码突变库,在不改变原氨基酸序列的同时筛选获得目标蛋白产量提高的突变菌株。方法:分段设计并合成同义密码突变兼并引物,通过优化PCR反应条件,构建目的基因的完整同义密码突变库。突变库经双酶切插入到pET11(b)载体上,并电转至E.coli BL21(DE3)细胞中。阳性克隆经PCR鉴定后,细胞表达目标蛋白,应用SDS-PAGE等方法分析目标蛋白产量。结果:目的基因同义突变库的PCR扩增产物可见330bp的特征条带,突变库测序结果显示整个基因序列的第三位碱基发生预期的同义突变;完成了445株克隆筛选,针对其中产量高于对照组的45株克隆进行测序,获得42株基因序列不同但氨基酸序列未发生变化的克隆菌株,其同义密码突变阳性率高达93%;选择其中2株初筛产量较高的菌株进行放大验证,结果显示7#突变株的包涵体收率及目标蛋白相对百分含量明显高于对照株,其每升发酵液的目标蛋白总产量比对照株提高2.44倍,405#突变株比对照株提高1.44倍。结论:通过优化PCR反应条件成功构建了目标基因全序列的同义密码突变库,采用同义密码突变库技术途径,在不改变原氨基酸序列的前提下可以快速优化蛋白表达产量。
- 何静丛聪代云见李坤王明蓉
- 长效重组人胰岛素原类似物的高密度细胞培养的研究被引量：2
- 2009年
- 本文以长效重组人胰岛素原类似物(SIIA-0801)的大肠埃希菌工程菌为研究对象,针对采用高细胞密度培养技术表达包涵体重组融合蛋白的关键参数,重点研究了诱导培养基成份(包括碳源、氮源、无机盐、微量元素)、种子细胞密度、IPTG诱导剂的加入量及诱导时间,诱导温度等因素与包涵体表达产量的相关性。结果发现其融合蛋白的最佳表达培养基:1.5%蛋白胨,1%酵母粉,0.5%NaCl,0.8%葡萄糖和0.2%磷酸盐缓冲液(22mmol/LKH2PO4,40mmol/LK2HPO4)。最佳诱导表达条件为:25%接种量,诱导温度37℃,接种培养1h后添加0.5mmol/L IPTG,继续诱导培养5h,发酵培养的总周期为6h。优化后的培养条件比传统的LB培养基及培养方法,其产量提高了6倍多。该结果为长效重组人胰岛素原类似物(SIIA-0801)后续的生产工艺研究提供了重要的参考依据。
- 何勇智高强杜天飞王明蓉
- 关键词：包涵体
- 一种特异性结合CD15的全人源抗体及应用
- 本发明提供了一种全人源抗CD15抗体，其重链可变区具有SEQID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与细胞粘附分子(CD15抗原)特异性地结合，其亲和力大于10<S...
- 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪
- 文献传递
- miRNA及其在医药领域应用的研究进展被引量：3
- 2011年
- miRNAs（MicroRNAs）是一类内生性、序列结构进化上高度保守、长度为20～23nt（核苷酸）的非编码性质单链小分子RNA，广泛存在于真核生物。miRNA在生命活动中具有必不可少的调节作用，主要包括个体时序性发育、细胞增值、分化、凋亡、器官发育、脂肪代谢、激素分泌、神经系统发育，并与肿瘤产生等密切相关。本综述主要涉及miRNA结构特征、分子生物学功能、生物合成过程及其在疾病治疗、新药研发等相关领域的研究进展。
- 王奇宇王明蓉罗洁
- 关键词：MIRNA肿瘤RNA干扰
- 毛细管电泳技术在聚乙二醇化蛋白药物质量控制中的应用
- 2015年
- 毛细管电泳是一种以高压电场为驱动力,熔融石英毛细管为分离通道的液相微分离技术。该技术样品消耗量少,分离模式灵活多样,能够检测氨基酸、多肽、蛋白质、细胞、病毒颗粒等多种生物样品,较高效液相色谱有更强的样品适应性。目前,该技术呈现了与其他分析技术联用,检测体系芯片化,检测通量不断提高的发展趋势。蛋白分子异质性分析是蛋白质药物质量控制的重要方面。由于聚乙二醇分子本身具有一定程度的异质性,蛋白聚乙二醇化的过程也有可能引入新杂质,因此聚乙二醇化蛋白药物异质性分析更加必要。聚乙二醇修饰蛋白药物质量控制需要说明蛋白质上连接聚乙二醇分子的数量和位置,即需要检测蛋白的聚乙二醇修饰率和聚乙二醇修饰位点。通过回顾近几年毛细管电泳在聚乙二醇化蛋白药物质量控制中的应用,说明不论是传统毛细管电泳系统还是芯片毛细管电泳系统都能够实现多种蛋白药物聚乙二醇修饰率检测,通过毛细管电泳与质谱联用也能够分析蛋白药物聚乙二醇修饰位点。毛细管电泳与应用非常广泛的分子排阻色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳相比,具有分离效果好,分析速度快,定量准确的优势。综上所述,毛细管电泳技术是聚乙二醇化蛋白药物质量控制的一种重要技术手段,在聚乙二醇化蛋白质量控制方面具有广阔的应用前景。
- 张涛王明蓉
- 关键词：毛细管电泳聚乙二醇化毛细管区带电泳
- 包涵体变复性技术研究进展被引量：13
- 2012年
- 现代生物技术的迅猛发展使大规模表达异源重组蛋白成为现实，这极大地促进了蛋白类产品的开发，尤其是重组蛋白药物的研发。日前非糖基化的重组蛋白表达多采用火肠杆菌的原核表达系统，该系统的突出特点是表达产物多以包涵体形式存在。与蛋白可溶性表达相比，包涵体具有产量高、蛋白稳定、容易纯化等优点，对毒性蛋白制备尤其适宜。因此，采用包涵体形式己成为规模制备重组蛋白产品的主要途径之一。
- 罗莉李坤王保成王明蓉
- 关键词：包涵体变复性原核表达系统现代生物技术重组蛋白表达可溶性表达
- 抗IgE单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效表达条件的研究被引量：5
- 2012年
- 目的:以抗IgE单链抗体(anti-IgE scFv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响。方法:构建Rosetta(DE3)、BL21(DE3)和SoluBL21(DE3)三种大肠杆菌工程菌,研究不同碳源、氮源、培养基配方和培养条件对可溶性抗IgE单链抗体产量的影响。结果:携带抗IgE单链抗体基因的pET-IgE26质粒在新型宿主SoluBL21(DE3)中的表达产量明显优于传统的Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌。经碳氮源筛选、培养基和培养条件的优化,确定SoluBL21(DE3)工程菌高效表达可溶性重组抗体的最佳培养基为:以M9培养基为基础,添加0.5%葡萄糖、0.6%酪蛋白胨和0.02%微量元素。最佳的培养条件为:以LB为种子培养基,37℃过夜培养至OD600为3.0左右,以5%接种量接种于最佳发酵培养基中;接种后细胞生长条件:37℃,260r/min,培养3.5h;细胞诱导培养条件:当OD600为1.5～1.8时,降温至25℃,添加0.1mmol/L IPTG,220r/min继续培养16h。经抗原ELISA检测,抗IgE单链抗体的可溶性表达量比原始对照组提高了5倍。结论:通过对宿主细胞类型的筛选、培养基及培养条件的优化,可以显著提高重组单链抗体在大肠杆菌周质空间内的表达产量。该研究结果不仅为规模化制备抗IgE单链抗体提供了技术支持,同时为大肠杆菌生产重组小分子抗体提供了有价值的参考。
- 刘启刚代云见张勇侠王保成王明蓉
- 关键词：大肠杆菌表达条件优化
