张勇侠
- 作品数：24 被引量：21H指数：4
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种特异性结合CD15的全人源抗体及应用
- 本发明提供了一种全人源抗CD15抗体，其重链可变区具有SEQID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与细胞粘附分子(CD15抗原)特异性地结合，其亲和力大于10<S...
- 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪
- 文献传递
- 诺如病毒衣壳蛋白在Tn5细胞中的表达及纯化
- 2017年
- 将人诺如病毒VA387株ORF2基因插入载体pFastBac1中,转化DH10Bac感受态细胞获得Bacmid-NoV-ORF2;脂质体介导转染sf9昆虫细胞,获得表达NoV-ORF2的重组杆状病毒Ac-NoV-ORF2.冻融破碎经Ac-NoV-ORF2感染的Tn5细胞,离心收集上清进行分子筛纯化.10%SDS-PAGE分析结果显示,重组病毒感染的Tn5细胞可见特异的蛋白条带;目的蛋白条带为相对分子质量59kD和56kD的两个条带;电镜观察发现表达的诺如病毒衣壳蛋白成功装配成了大小约为40~50nm的VLPs.结果表明在Tn5细胞中实现了诺如病毒衣壳蛋白的表达和VLPs的装配.
- 马玉晓刘兰军李玫颖张勇侠蔡峰代云见范凤鸣张雪梅赵云
- 关键词：诺如病毒病毒样颗粒
- 一种用于拯救麻疹病毒、重组麻疹病毒的系统以及方法
- 本发明公开了一种用于拯救麻疹病毒及表达GFP的重组麻疹病毒的系统、方法及用途，本发明的系统包括如下成分：1)含有麻疹病毒反基因组全长的转录质粒pT7MV<Sub>S191</Sub>或pT7MV<Sub>S191</Su...
- 刘兰军张勇侠李玫颖陈宗香
- 文献传递
- 一种抗人T淋巴细胞免疫球蛋白淋巴细胞毒效价检测方法的建立
- 2022年
- 目的建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名:Grafalon)作为待检样品,建立其淋巴细胞毒效价定量检测方法。优化反应体系,考察细胞培养密度、细胞代次对待检样品效价的影响,并对方法的精密度进行验证。结果优化的反应体系组成为50μL待检样品+50μL补体(1∶5稀释)+50μL细胞(5×10^(6)个/mL);细胞传代密度为2×10^(5)个/mL传代培养72 h或3×10^(5)个/mL传代培养48 h用于效价测定最佳;当细胞生长状态较好且一致时,从P10到P25代次的细胞效价测定结果较一致。采用该方法板内重复测定待检样品效价,变异系数(CV)为6.32%,重复性良好;不同代次Jurkat细胞测定待检样品效价6次,CV为4.15%,中间精密度良好。结论建立了一种便捷、精确的测定ALG淋巴细胞毒效价的定量检测方法,为ALG效价测定提供了一种客观、准确的评价手段。
- 杜天飞容新宗杨盛理张勇侠武志强李春阳刘兰军
- 关键词：JURKAT细胞
- Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备
- 2018年
- 目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。
- 张勇侠高雅丽康庄丛聪罗心梅代云见陈宗香李立李桂华刘兰军
- 关键词：登革病毒NS1蛋白原核表达免疫荧光
- 抗IgE单链抗体在大肠杆菌中可溶性高效表达条件的研究被引量：5
- 2012年
- 目的:以抗IgE单链抗体(anti-IgE scFv)为研究对象,以大肠杆菌周质高效表达可溶性单链抗体为目标,研究不同宿主细胞、培养基及培养条件对可溶性单链抗体表达产量的影响。方法:构建Rosetta(DE3)、BL21(DE3)和SoluBL21(DE3)三种大肠杆菌工程菌,研究不同碳源、氮源、培养基配方和培养条件对可溶性抗IgE单链抗体产量的影响。结果:携带抗IgE单链抗体基因的pET-IgE26质粒在新型宿主SoluBL21(DE3)中的表达产量明显优于传统的Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌。经碳氮源筛选、培养基和培养条件的优化,确定SoluBL21(DE3)工程菌高效表达可溶性重组抗体的最佳培养基为:以M9培养基为基础,添加0.5%葡萄糖、0.6%酪蛋白胨和0.02%微量元素。最佳的培养条件为:以LB为种子培养基,37℃过夜培养至OD600为3.0左右,以5%接种量接种于最佳发酵培养基中;接种后细胞生长条件:37℃,260r/min,培养3.5h;细胞诱导培养条件:当OD600为1.5～1.8时,降温至25℃,添加0.1mmol/L IPTG,220r/min继续培养16h。经抗原ELISA检测,抗IgE单链抗体的可溶性表达量比原始对照组提高了5倍。结论:通过对宿主细胞类型的筛选、培养基及培养条件的优化,可以显著提高重组单链抗体在大肠杆菌周质空间内的表达产量。该研究结果不仅为规模化制备抗IgE单链抗体提供了技术支持,同时为大肠杆菌生产重组小分子抗体提供了有价值的参考。
- 刘启刚代云见张勇侠王保成王明蓉
- 关键词：大肠杆菌表达条件优化
- 以麻疹病毒为载体的麻疹、风疹联合疫苗
- 本发明的目的在于，提供一种以麻疹病毒为载体的麻疹、风疹联合疫苗，属于重组载体疫苗领域。本发明首先公开了一种感染性克隆，所述感染性克隆是将风疹病毒的ORF2(包含C基因、E2基因、E1基因)片段构建到质粒载体所得到的重组质...
- 刘兰军张勇侠罗心梅高雅丽
- 腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立
- 2019年
- 目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1R。方法将JL1全长cDNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUVJL1(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lgCCID50/mL以上;JL1R与疫苗株S79诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S79疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。
- 高雅丽张勇侠陈宗香康庄罗心梅丛聪李立刘兰军
- 关键词：腮腺炎病毒疫苗株反向遗传系统
- 一种特异性结合CD4的全人源抗体及应用
- 本发明提供了一种全人源抗CD4抗体，其重链可变区具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO：4所述的氨基酸序列，本抗体分子与辅助T细胞膜上的表面抗原分化簇4(CD4抗原)特异性地结合，其...
- 何明跃王明蓉高强杜天飞张勇侠代云见何勇智丛聪
- 文献传递
- 一种拯救麻疹Schwarz/Moraten疫苗株的系统和方法
- 本发明提供了一种麻疹Schwarz/Moraten疫苗株反向遗传学方法，包括如下步骤：(1)病毒全长质粒pT7MV<Sub>sw</Sub>和辅助质粒与哺乳动物细胞混合；(2)电击转染；(3)培养细胞，收获病毒；所述全长...
- 刘兰军张勇侠陈宗香高雅丽康庄
- 文献传递
