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Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定被引量：1: 2011年; 目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。; 陈云霞管峰赵云玲郑东霞张维刘华雷王志亮; 关键词：病毒拯救

Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株病毒拯救体系的建立被引量：2: 2012年; 根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004基因组序列(GenBank登录号FJ794269),设计7对引物,采用RT-PCR将NDV08-004基因组分段扩增(片段A～G)并分别克隆入pGEM-Teasy载体,然后采用单一的酶切位点将7个片段依次亚克隆到转录载体pOLTV5中,构建了含NDV08-004全基因组cDNA的转录载体NDV08-004-pO。采用构建的三个辅助质粒(pCI-NP、pCI-P和pCI-L)与基因组NDV08-004-pO按照2:1:1:2的比例共转染BSR T7/5细胞,结果成功拯救出具有血凝性的NDV08-004,初代分离物血凝价为4.33log2±0.58。Ⅰ类NDV反向遗传操作体系的建立为开展Ⅰ类NDV的致病机制奠定了基础。; 陈云霞刘华雷管峰郑东霞赵云玲王志亮; 关键词：病毒拯救

Ⅰ类新城疫病毒分离株NDV08-046的基因组特性被引量：3: 2011年; 对1株Ⅰ类新城疫病毒分离株NDV08-046进行了全基因组序列测定和遗传进化分析。结果表明,该分离株基因组长度为15198 nt,符合＂六碱基原则＂。与Ⅱ类新城疫病毒的基因组序列相比,该分离株在基因组P基因的2381~2382 nt的位置（根据La Sota株的基因组序列,包含15186 nt）有12 nt的插入（TGGGAGACGGGG）。NDV08-046株F蛋白裂解位点的序列为112-ERQERL-117,具有典型的新城疫弱毒株特征。全基因组的遗传进化分析显示,所有的新城疫毒株能够被分为2个明显不同的分支,即Ⅰ类和Ⅱ类,NDV08-046分离株在分类地位上属于Ⅰ类新城疫病毒基因2型。; 刘华雷孙军峰赵云玲张维管峰刘文华郑东霞李金明王志亮; 关键词：基因组序列遗传进化分析

Class I新城疫病毒反向遗传操作系统建立: 根据I类新城疫病毒NDV08-004基因组序列(GenBank登录号FJ794269),设计7对引物,采用RT-PCR将NDV08-004基因组扩增的7个片段片段(A～G)分别克隆进pGEM-Teasy载体,然后采用单一...; 刘华雷陈云霞管峰郑东霞赵云玲王志亮; 关键词：病毒拯救; 文献传递

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管峰