陈云霞 作品数:13 被引量:13 H指数:2 供职机构: 中国动物卫生与流行病学中心 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 公益性行业(农业)科研专项 农业部动物疫情监测与防治项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
猪圆环病毒2型广西流行株序列比较分析 被引量:1 2009年 参考GenBank发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列,设计引物,通过反向PCR技术,从广西部分市区疑似"高热病"病猪的组织中,扩增9株PCV-2流行株的全基因,并进行了序列测定分析。结果表明,9个PCV-2分离株基因组全长为1767bp或1768bp。同源性比较发现,9个分离株之间的核苷酸同源性为94.6%~99.9%,与GenBank上已发表的国外分离株比较,同源性为94.4%~100%;9个分离株ORF2之间的核苷酸及其所推导的氨基酸序列同源性分别为93.7%~99.4%和93.6%~99.1%;系统发育树显示,其中7个分离株与法国株、新西兰株关系较近,与美国株和加拿大株关系较远;另外2个分离株与澳大利亚株、美国株亲缘关系较近。 张宁 谢丽华 何苹萍 秦毅斌 陈云霞 兰家暖 廖承球 黄伟坚关键词:猪圆环病毒2型 基因克隆 广西猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析及基因分型分析 PCV是一种小的、二十面体对称、无囊膜、共价闭合、单股环状DNA病毒。病毒粒子直径为17nm,是目前发现的最小的动物病毒。根据PCV的致病性、抗原性及核酸序列,将PCV分为PCV1和PCV2两个血清型,将无致病性的PCV... 何苹萍 秦毅斌 兰家暖 陈云霞 黄伟坚 刘芳 韦英益关键词:猪圆环病毒2型 ORF2基因 基因分型 文献传递 Ⅰ类新城疫病毒NP和P基因分子流行病学研究及NDV08-004株反向遗传操作系统的建立 本研究通过对2008~2010年分离到的60株Ⅰ类新城疫病毒分离株的NP和P蛋白基因进行分子流行病学分析,基本掌握了我国目前Ⅰ类新城疫病毒的分子特征。通过构建Ⅰ类新城疫病毒代表株NDV08-004全长感染性cDNA克隆,... 陈云霞关键词:NP基因 P基因 全长CDNA克隆 病毒拯救 文献传递 猪圆环病毒2型核酸疫苗在小鼠攻毒实验中免疫保护性研究 猪圆环病毒2型(PCV2)是与猪的一种新的传染病—断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemicwasting syndrome,PMWS)密切相关,该病以进行性消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大、... 张宁 侯韶毅 陈云霞 韦英益 李茂宁 肖爱欢 兰家暖 廖承球 谢丽华 黄伟坚 张远波 刘芳 禤雄标 高永锐 卢桂娟 陆有飞 曾晓飞文献传递 Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定 被引量:1 2011年 目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。 陈云霞 管峰 赵云玲 郑东霞 张维 刘华雷 王志亮关键词:病毒拯救 Class I新城疫病毒反向遗传操作系统建立 根据I类新城疫病毒NDV08-004基因组序列(GenBank登录号FJ794269),设计7对引物,采用RT-PCR将NDV08-004基因组扩增的7个片段片段(A~G)分别克隆进pGEM-Teasy载体,然后采用单一... 刘华雷 陈云霞 管峰 郑东霞 赵云玲 王志亮关键词:病毒拯救 文献传递 广西猪增生性肠炎的PCR诊断 被引量:2 2009年 兰家暖 肖爱欢 谢丽华 侯韶毅 陈云霞 黄伟坚关键词:猪增生性肠炎 PCR诊断 接触性传染病 顽固性腹泻 猪回肠炎 饲料报酬 广西猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆与序列分析及基因分型分析 PCV是一种小的、二十面体对称、无囊膜、共价闭合、单股环状DNA病毒。病毒粒子直径为17nm,是目前发现的最小的动物病毒。根据PCV的致病性、抗原性及核酸序列,将PCV分为PCV1和PCV2两个血清型,将无致病性的PCV... 何苹萍 秦毅斌 兰家暖 陈云霞 黄伟坚 刘芳 韦英益文献传递 Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株病毒拯救体系的建立 被引量:2 2012年 根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004基因组序列(GenBank登录号FJ794269),设计7对引物,采用RT-PCR将NDV08-004基因组分段扩增(片段A~G)并分别克隆入pGEM-Teasy载体,然后采用单一的酶切位点将7个片段依次亚克隆到转录载体pOLTV5中,构建了含NDV08-004全基因组cDNA的转录载体NDV08-004-pO。采用构建的三个辅助质粒(pCI-NP、pCI-P和pCI-L)与基因组NDV08-004-pO按照2:1:1:2的比例共转染BSR T7/5细胞,结果成功拯救出具有血凝性的NDV08-004,初代分离物血凝价为4.33log2±0.58。Ⅰ类NDV反向遗传操作体系的建立为开展Ⅰ类NDV的致病机制奠定了基础。 陈云霞 刘华雷 管峰 郑东霞 赵云玲 王志亮关键词:病毒拯救 一株Class Ⅰ新城疫病毒分离株NP和P蛋白基因分子特征和遗传进化分析 被引量:2 2011年 本研究对2009年实验室保存的一株Class Ⅰ新城疫病毒分离株NDV09-056的NP和P基因进行了扩增和序列分析,对其分子特征和遗传进化关系进行了分析。结果表明该分离株NP蛋白基因全长为1746nt,共编码489aa,其N端1~401氨基酸相对比较保守,C端402~479氨基酸变化比较大;同源性分析表明本分离株的NP蛋白基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性为93.5%~98.5%,而与Ⅱ类新城疫病毒代表毒株的同源性较低,介于77.0%~79.2%。P蛋白主要氨基酸突变区集中在57~107aa和135~212aa两个区域,而N端和C端相对保守;同源性分析表明本分离株的P蛋白基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性为90.4%~95.3%,而与Ⅱ类新城疫病毒代表毒株的同源性较低,介于68.3%~72.5%。遗传进化分析表明本分离株与Ⅰ类基因3型新城疫病毒代表株NDV08-004的亲缘关系最近。 陈云霞 刘华雷 郑东霞 赵云玲 黄伟坚 王志亮关键词:新城疫病毒 NP基因 P基因